引用本文： 熊健, 吳蕾, 皮御陽, 許詠冬. 非小細胞肺癌淋巴結 Beclin 1 表達與淋巴結轉移的關系. 中國胸心血管外科臨床雜志, 2019, 26(10): 984-987. doi: 10.7507/1007-4848.201902002 復制
Beclin 1 是目前受到廣泛關注的自噬基因之一，其在多種腫瘤組織中表達不一，被認為是觀察腫瘤發展及與腫瘤預后密切相關的指標之一。研究表明，當 Beclin 1 表達異常時，腫瘤的發生幾率大幅增加[1-4]。不過其在肺癌中的作用目前并不確定。一些學者認為其與非小細胞肺癌的發生、發展及預后相關，可作為腫瘤預后的一個觀測指標，如董桂蘭等[5]發現自噬相關蛋白 Beclin1 表達下調可能參與了非小細胞肺癌的發生及發展，類似的研究還有不少[6-8]。由于腫瘤的預后與腫瘤的分期密切相關，特別是淋巴結是否轉移及轉移的程度是腫瘤分期的一個重要指標，而目前 Beclin 1 基因與肺癌淋巴結轉移的關系并不明確。因此，了解 Beclin 1 基因表達水平與腫瘤淋巴結轉移程度是協助判斷 Beclin 1 基因水平是否與腫瘤預后有關的一項重要觀察點。現回顧性分析我院 2009 年 9 月至 2016 年 9 月收治的 204 例肺癌患者的臨床資料。
1 資料與方法
1.1 臨床資料和分組
2011 年 9 月至 2016 年 9 月我院共收治 204 例非小細胞肺癌患者，其中男 116 例、女 88 例，平均年齡（55.3±11.2）歲。所有患者術前評估包括血液學檢測、氣管鏡、頭顱 CT、胸部 CT、骨掃描、腹部 B 超、心電圖、肺功能檢查。入組標準：術前評估無遠處轉移，縱隔淋巴結>1 cm 者行超聲支氣管鏡穿刺活檢，病理證實陽性者行新輔助化療 2 周。排除標準：術前檢查證實有遠處轉移者，術前評估無法耐受手術者。據肺癌淋巴結轉移與否將所有患者分為無淋巴結轉移組（N0 組）、有肺葉間和葉內淋巴結轉移、無縱隔淋巴結轉移組（N1組）和縱隔淋巴結轉移組（N2組）。
1.2 手術方法
所有患者均行肺癌根治術，術中行系統性縱隔淋巴結清掃。切取部分標本組織采用 Western blotting 法測量 Beclin 1 水平，采用蘇木精-伊紅染色制作病理學標本。術后常規留置胸腔引流管，抗炎化痰支持治療。癌旁正常組織取材為距離腫瘤邊界 5 cm 以上。
1.3 統計學分析
采用 SPSS 22.0 統計軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差（
±s）表示，組間比較采用重復測量方差分析或秩和檢驗；率的比較采用 χ2 檢驗。P<0.05 為差異有統計學意義。
2 結果
204 例非小細胞肺癌患者中鱗癌 36 例、腺癌 168 例，其中 N0 組 111 例、N1組 142 例、N2 組 51 例。
三組患者腫瘤組織 Beclin 1 水平隨著淋巴結轉移站數增加逐漸降低，差異有統計學意義（P<0.05）。三組患者 N1 Beclin 1 水平對比，N1 組和 N2 組較 N0 組明顯偏低，差異有統計學意義（P<0.01）。三組患者 N2 Beclin 1 水平對比，N2 組較 N0 組及 N1 組明顯偏低，差異有統計學意義（P<0.01，表1）。
表1
三組樣本組織中 Beclin 1 水平比較（
）
N0 組 N1、N2 Beclin 1 水平相近，差異無統計學意義（P>0.05）。N1 組 N1 Beclin 1 水平低于 N2 Beclin 1，差異有統計學意義（P<0.01）。N2 組 N2 Beclin 1 水平略高于 N1 Beclin 1 水平，但差異無統計學意義（P>0.05，表1）。
3 討論
通過循環再利用細胞內大分子物質，清除受損細胞器，自噬基因可有效維持細胞內環境的穩定，其與細胞的增殖過程密切相關，亦可參與腫瘤的發生發展過程。Beclin 1 基因是目前受到極大關注的一種自噬基因，當與 PI3K 形成復合體后，可調節自噬前體結構中的 ATG 蛋白位置，進而調節自噬活性。作為抑癌基因，其缺乏可導致全身多個器官細胞癌變，如 Song 等[9]發現，Beclin 1 低表達有助于提高胰腺癌患者總生存期（OS）及無病生存期，上調體內 Beclin 1 水平可加快腫瘤的進展及提高其侵襲性。Wang 等[10]也發現 Beclin 1 表達水平與胃癌的大小、淋巴結轉移程度及腫瘤侵襲程度密切相關。Beclin 1 高表達可促進 MKN-45 胃癌細胞的凋亡，抑制其向遠處轉移。因而 Beclin 1 可作為胃癌發生的抑制劑，成為胃癌治療的可能靶點。類似的研究還有不少[11-13]。
在肺癌方面，目前的研究表明 Beclin 1 與肺癌的預后有一定關聯，如 Zhou 等[14]的研究表明，Beclin 1 低表達非小細胞肺癌患者的 OS 僅 28 個月，明顯低于 Beclin 1 高表達組，并且 Beclin 1 低表達與肺癌淋巴結轉移密切相關。我們的數據也提示肺癌組織 Beclin 1 水平較正常組織偏低，與已有研究結果類似。影響肺癌預后的一個重要因素在于腫瘤的分期，特別是有無縱隔淋巴結轉移對術后分期至關重要。目前對淋巴結標本有無轉移主要采用病理切片的方式，雖然石蠟切片的精確度很高，但依然存在部分誤差。在精準化治療的今天，是否能采取病理切片聯合其他指標提高診斷的精確性值得期待。在我們的研究中發現，Beclin 1 基因在轉移淋巴結中的表達明顯低于無轉移淋巴結，且差異有統計學意義。這提示未來判斷是否存在淋巴結轉移時，Beclin 1 基因水平可作為一個重要的考量指標，若淋巴結病理切片陰性而 Beclin 1 水平較正常值偏低者，需再次復核以免漏診，尤其對于病理切片介于良惡性之間的標本，Beclin 1 水平可能成為判斷結果的有力證據。
我們的研究數據表明，在 N2 組患者中，N1 Beclin 1 表達水平較 N2 Beclin 1 略低，考慮可能是由于 N1 先出現轉移，隨后再導致 N2 轉移，N1 轉移時間較 N2 更長，故 Beclin 1 基因受影響時間更長所致。但兩組數據對比差異并無統計學意義，故在有淋巴結轉移的患者當中，Beclin 1 表達水平僅能判斷是否存在淋巴結轉移，但并不能幫助判斷是取自哪一站淋巴結。
少部分并發縱隔淋巴結轉移的肺癌患者存在跳躍性轉移現象，從肺部淋巴液轉流途徑看這種現象難以理解，目前對為何存在這種現象暫無定論。既往對淋巴結的檢測均為病理切片，是否存在 N1 漏診導致跳躍性轉移率升高值得探討。聯合 Beclin 1 檢測后可提高 N1 淋巴結轉移的檢出率，是否會降低跳躍性轉移的發生率值得進一步探究。
有研究提示 TNM 分期晚的腫瘤 Beclin 1 水平較分期早的患者低[15]。我們的數據也提示，N2 組腫瘤 Beclin 1 水平較 N1 組和 N0 組偏低，且差異有統計學意義，考慮 N2 組 TNM 分期普遍較 N0 和 N1 組更差，故 N2 組腫瘤 Beclin 1 水平較 N1 組和 N0 組更低，這與已有研究基本相符。不過雖然淋巴結是分期的一個重要因素，但腫瘤的大小、位置對腫瘤分期也有很大影響，故單測腫瘤組織本身的 Beclin 1 水平可能無法判斷該患者是否并發 N1 或 N2 淋巴結轉移，必須對所清掃淋巴結本身行 Beclin 1 表達水平檢測才能協助判斷是否存在淋巴結轉移。不過由于可手術患者多為術前判斷 N2 無轉移者，故可能存在由于挑選手術患者所造成的統計數據偏移，需要進一步研究觀察。
綜上所述，Beclin 1 水平可成為判斷肺部腫瘤良惡性的一個參考指標，淋巴結 Beclin 1 水平可作為協助判斷肺癌是否存在淋巴結轉移的一個重要參考指標。
利益沖突：無。
Beclin 1 是目前受到廣泛關注的自噬基因之一，其在多種腫瘤組織中表達不一，被認為是觀察腫瘤發展及與腫瘤預后密切相關的指標之一。研究表明，當 Beclin 1 表達異常時，腫瘤的發生幾率大幅增加[1-4]。不過其在肺癌中的作用目前并不確定。一些學者認為其與非小細胞肺癌的發生、發展及預后相關，可作為腫瘤預后的一個觀測指標，如董桂蘭等[5]發現自噬相關蛋白 Beclin1 表達下調可能參與了非小細胞肺癌的發生及發展，類似的研究還有不少[6-8]。由于腫瘤的預后與腫瘤的分期密切相關，特別是淋巴結是否轉移及轉移的程度是腫瘤分期的一個重要指標，而目前 Beclin 1 基因與肺癌淋巴結轉移的關系并不明確。因此，了解 Beclin 1 基因表達水平與腫瘤淋巴結轉移程度是協助判斷 Beclin 1 基因水平是否與腫瘤預后有關的一項重要觀察點。現回顧性分析我院 2009 年 9 月至 2016 年 9 月收治的 204 例肺癌患者的臨床資料。
1 資料與方法
1.1 臨床資料和分組
2011 年 9 月至 2016 年 9 月我院共收治 204 例非小細胞肺癌患者，其中男 116 例、女 88 例，平均年齡（55.3±11.2）歲。所有患者術前評估包括血液學檢測、氣管鏡、頭顱 CT、胸部 CT、骨掃描、腹部 B 超、心電圖、肺功能檢查。入組標準：術前評估無遠處轉移，縱隔淋巴結>1 cm 者行超聲支氣管鏡穿刺活檢，病理證實陽性者行新輔助化療 2 周。排除標準：術前檢查證實有遠處轉移者，術前評估無法耐受手術者。據肺癌淋巴結轉移與否將所有患者分為無淋巴結轉移組（N0 組）、有肺葉間和葉內淋巴結轉移、無縱隔淋巴結轉移組（N1組）和縱隔淋巴結轉移組（N2組）。
1.2 手術方法
所有患者均行肺癌根治術，術中行系統性縱隔淋巴結清掃。切取部分標本組織采用 Western blotting 法測量 Beclin 1 水平，采用蘇木精-伊紅染色制作病理學標本。術后常規留置胸腔引流管，抗炎化痰支持治療。癌旁正常組織取材為距離腫瘤邊界 5 cm 以上。
1.3 統計學分析
采用 SPSS 22.0 統計軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用重復測量方差分析或秩和檢驗；率的比較采用 χ2 檢驗。P<0.05 為差異有統計學意義。
2 結果
204 例非小細胞肺癌患者中鱗癌 36 例、腺癌 168 例，其中 N0 組 111 例、N1組 142 例、N2 組 51 例。
三組患者腫瘤組織 Beclin 1 水平隨著淋巴結轉移站數增加逐漸降低，差異有統計學意義（P<0.05）。三組患者 N1 Beclin 1 水平對比，N1 組和 N2 組較 N0 組明顯偏低，差異有統計學意義（P<0.01）。三組患者 N2 Beclin 1 水平對比，N2 組較 N0 組及 N1 組明顯偏低，差異有統計學意義（P<0.01，表1）。
表1
三組樣本組織中 Beclin 1 水平比較（）
N0 組 N1、N2 Beclin 1 水平相近，差異無統計學意義（P>0.05）。N1 組 N1 Beclin 1 水平低于 N2 Beclin 1，差異有統計學意義（P<0.01）。N2 組 N2 Beclin 1 水平略高于 N1 Beclin 1 水平，但差異無統計學意義（P>0.05，表1）。
3 討論
通過循環再利用細胞內大分子物質，清除受損細胞器，自噬基因可有效維持細胞內環境的穩定，其與細胞的增殖過程密切相關，亦可參與腫瘤的發生發展過程。Beclin 1 基因是目前受到極大關注的一種自噬基因，當與 PI3K 形成復合體后，可調節自噬前體結構中的 ATG 蛋白位置，進而調節自噬活性。作為抑癌基因，其缺乏可導致全身多個器官細胞癌變，如 Song 等[9]發現，Beclin 1 低表達有助于提高胰腺癌患者總生存期（OS）及無病生存期，上調體內 Beclin 1 水平可加快腫瘤的進展及提高其侵襲性。Wang 等[10]也發現 Beclin 1 表達水平與胃癌的大小、淋巴結轉移程度及腫瘤侵襲程度密切相關。Beclin 1 高表達可促進 MKN-45 胃癌細胞的凋亡，抑制其向遠處轉移。因而 Beclin 1 可作為胃癌發生的抑制劑，成為胃癌治療的可能靶點。類似的研究還有不少[11-13]。
在肺癌方面，目前的研究表明 Beclin 1 與肺癌的預后有一定關聯，如 Zhou 等[14]的研究表明，Beclin 1 低表達非小細胞肺癌患者的 OS 僅 28 個月，明顯低于 Beclin 1 高表達組，并且 Beclin 1 低表達與肺癌淋巴結轉移密切相關。我們的數據也提示肺癌組織 Beclin 1 水平較正常組織偏低，與已有研究結果類似。影響肺癌預后的一個重要因素在于腫瘤的分期，特別是有無縱隔淋巴結轉移對術后分期至關重要。目前對淋巴結標本有無轉移主要采用病理切片的方式，雖然石蠟切片的精確度很高，但依然存在部分誤差。在精準化治療的今天，是否能采取病理切片聯合其他指標提高診斷的精確性值得期待。在我們的研究中發現，Beclin 1 基因在轉移淋巴結中的表達明顯低于無轉移淋巴結，且差異有統計學意義。這提示未來判斷是否存在淋巴結轉移時，Beclin 1 基因水平可作為一個重要的考量指標，若淋巴結病理切片陰性而 Beclin 1 水平較正常值偏低者，需再次復核以免漏診，尤其對于病理切片介于良惡性之間的標本，Beclin 1 水平可能成為判斷結果的有力證據。
我們的研究數據表明，在 N2 組患者中，N1 Beclin 1 表達水平較 N2 Beclin 1 略低，考慮可能是由于 N1 先出現轉移，隨后再導致 N2 轉移，N1 轉移時間較 N2 更長，故 Beclin 1 基因受影響時間更長所致。但兩組數據對比差異并無統計學意義，故在有淋巴結轉移的患者當中，Beclin 1 表達水平僅能判斷是否存在淋巴結轉移，但并不能幫助判斷是取自哪一站淋巴結。
少部分并發縱隔淋巴結轉移的肺癌患者存在跳躍性轉移現象，從肺部淋巴液轉流途徑看這種現象難以理解，目前對為何存在這種現象暫無定論。既往對淋巴結的檢測均為病理切片，是否存在 N1 漏診導致跳躍性轉移率升高值得探討。聯合 Beclin 1 檢測后可提高 N1 淋巴結轉移的檢出率，是否會降低跳躍性轉移的發生率值得進一步探究。
有研究提示 TNM 分期晚的腫瘤 Beclin 1 水平較分期早的患者低[15]。我們的數據也提示，N2 組腫瘤 Beclin 1 水平較 N1 組和 N0 組偏低，且差異有統計學意義，考慮 N2 組 TNM 分期普遍較 N0 和 N1 組更差，故 N2 組腫瘤 Beclin 1 水平較 N1 組和 N0 組更低，這與已有研究基本相符。不過雖然淋巴結是分期的一個重要因素，但腫瘤的大小、位置對腫瘤分期也有很大影響，故單測腫瘤組織本身的 Beclin 1 水平可能無法判斷該患者是否并發 N1 或 N2 淋巴結轉移，必須對所清掃淋巴結本身行 Beclin 1 表達水平檢測才能協助判斷是否存在淋巴結轉移。不過由于可手術患者多為術前判斷 N2 無轉移者，故可能存在由于挑選手術患者所造成的統計數據偏移，需要進一步研究觀察。
綜上所述，Beclin 1 水平可成為判斷肺部腫瘤良惡性的一個參考指標，淋巴結 Beclin 1 水平可作為協助判斷肺癌是否存在淋巴結轉移的一個重要參考指標。
利益沖突：無。
