• 1. 四川大學華西醫院(成都, 610041)骨科;
  • 2. 四川大學華西醫院(成都, 610041)衛生部移植工程與移植免疫重點實驗室;
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目的 探討miR-93-5p是否通過靶向調控其預測靶基因Smad5的表達,從而抑制小鼠MSCsC3H10T1/2細胞的成骨分化。 方法 構建Smad5 3'-UTR-熒光素酶報告載體(pmiR-RB-REPORTTM),通過雙熒光素酶報告基因檢測,觀察miR-93-5p對Smad5 3'-UTR熒光素酶活性的影響,鑒定Smad5是否為miR-93-5p的靶基因。將miR-93-5p mimics(M組)與miR-93-5p inhibitor(In組)及其對應的陰性對照組miR-93-5p mimics陰性對照(MC組)與miR-93-5p inhibitor陰性對照(InC組)分別轉染至C3H10T1/2細胞中,并進行成骨誘導培養,48 h后分別采用實時熒光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)及Western blot檢測各組細胞Smad5在mRNA及蛋白水平的相對表達量;14 d后通過茜素紅染色檢測各組細胞外鈣鹽的沉積情況,了解miR-93-5p對C3H10T1/2細胞成骨分化的調控效應。 結果 雙熒光素酶報告基因檢測結果顯示,miR-93-5p能與Smad5 mRNA3'-UTR特異性結合,抑制其熒光素酶活性(P<0.05)。qRT-PCR檢測示,M組及In組Smad5的mRNA相對表達量與對應陰性對照組MC組及InC組比較差異均無統計學意義(P>0.05);Western blot檢測示,M組及In組Smad5蛋白相對表達量與對應陰性對照組比較差異均有統計學意義(P<0.05),其中M組較MC組表達量下調,而In組則較InC組表達量上調。茜素紅染色示,M組鈣鹽沉積較MC組明顯減少,而In組則較InC組鈣鹽沉積明顯增多。 結論 Smad5是miR-93-5p的靶基因,miR-93-5p可通過靶向調控Smad5的表達,抑制小鼠C3H10T1/2細胞成骨分化。

引用本文: 徐練, 李曉龍, 劉印, 孔清泉, 龍丹, 李勝富. miR-93-5p靶向調控Smad5表達抑制小鼠C3H10T1/2細胞成骨分化的研究. 中國修復重建外科雜志, 2015, 29(10): 1288-1294. doi: 10.7507/1002-1892.20150279 復制

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