引用本文： 王志國, 匡瑞霞, 徐全臣, 陳振雨, 李鵬. 人體不同部位正常皮膚成纖維細胞對機械張力反應的研究. 中國修復重建外科雜志, 2015, 29(4): 467-471. doi: 10.7507/1002-1892.20150101 復制
增生性瘢痕的發生機制目前尚未明確，研究表明機械張力可能在其形成過程中發揮主要作用[1-2]；成纖維細胞是關鍵效應細胞，其異質性被認為是增生性瘢痕發病的重要機制[3]。皮膚是人體最大的器官，不同部位皮膚承受的機械張力不同，增生性瘢痕發生幾率和轉歸也不同[4-6]，提示不同部位皮膚對機械張力的反應可能也不同。本研究通過檢測人體背部和上臂內側正常皮膚成纖維細胞對機械張力的反應，探討人體皮膚成纖維細胞的部位特征，藉此探索增生性瘢痕的發生機制。
1 材料與方法
1.1 主要試劑及儀器
α-MEM培養基、FBS、含EDTA的胰酶（HyClone公司，美國）；Cell Counting Kit-8（CCK-8）試劑盒（同仁化學研究所，日本）；逆轉錄試劑盒、熒光定量PCR試劑盒（大連寶生物工程有限公司）；TGF-β1、Ⅰ型膠原ELISA試劑盒（R&D Systems 公司，美國）；Trizol試劑（Sigma公司，美國）。Ⅰ型膠原a1鏈（collagen type Ⅰα1 chain，COL1A1）、TGF-β1、整合素β1、 P130Cas（p130Crk-associated substance）PCR引物由上海生工生物工程技術服務有限公司設計合成多通道細胞應力加載儀由青島大學附屬青島市立醫院口腔科袁曉與哈爾濱工業大學聯合研制；6 孔彈性基底膜培養板（BF-3001C；Flex-cell 公司，美國）；酶聯免疫檢測儀（Tecan公司，瑞士）；ABI-7500 定量PCR儀（ABI公司，美國）；CO2培養箱（Shelden公司，美國）；倒置顯微鏡（Leica公司，德國）。
1.2 實驗分組及方法
實驗用正常皮膚組織標本由2013年1月－2014年1月于青島大學附屬醫院燒傷整形外科接受色素痣切除手術的3例患者自愿捐贈，男1例，女2例；年齡20、21、40歲。每例患者均取背部及上臂內側皮膚，按照文獻[7-8]應用組織塊法體外培養成纖維細胞，取第5～8代細胞進行實驗。
背部和上臂內側細胞分別設實驗組和對照組，實驗組細胞接受加載周期性機械張力，對照組細胞不作加載。調整細胞懸液濃度至1.5×105個/mL，以2 mL/孔均勻接種于6孔彈性基底膜培養板，每孔接種細胞3×105個。于37℃、5%CO2及飽和濕度條件下繼續培養24 h，倒置顯微鏡下觀察細胞達70%～80%融合后，更換培養基。根據前期研究皮膚成纖維細胞對10%拉伸幅度的機械張力產生明顯機械傳導和生化效應[9]，我們將實驗組細胞培養板置于多通道細胞應力加載儀內，加載周期性機械張力，拉伸最大幅度為10%；加載頻率為0.1Hz，即5 s拉伸，5 s松弛。實驗組加載24、36、48 h，對照組于相應時間點，取細胞進行以下觀測。
1.3 觀測指標
1.3.1 細胞形態學觀察
各時間點加載結束后，倒置顯微鏡下觀察各組細胞形態變化。
1.3.2 CCK-8
檢測細胞增殖活性各時間點兩組分別取3孔細胞，每孔加入CCK-8試劑200 μL，搖動培養板將試劑混勻后繼續在培養箱中培養3 h。取細胞上清液，采用酶聯免疫檢測儀在450 nm波長處檢測吸光度（A）值。以A值大小間接反映細胞數量。
1.3.3 RT-PCR檢測
各個時間點取3孔細胞，每孔加入1 mL Trizol試劑裂解細胞，Trizol 法提取細胞總RNA，常規行RT-PCR檢測整合素β1、P130Cas、COL1A1、TGF-β1 mRNA表達水平。具體如下：SYBR? Premix TaqTM Ⅱ10 μL，濃度 10 μmol/L 的上、下游引物各0.8 μL，DNA模板2 μL，雙蒸水6.4 μL，每個樣品重復3管。反應依照兩步法PCR擴增標準程序，進行95℃預變形30s，然后95℃、5s，60℃、20s，40個循環。擴增完成后，應用LightCycler480軟件對反應產物的溶解曲線進行自動定量分析。采用GAPDH作為內參，各引物序列見表 1。采用相對定量法計算各目的基因mRNA含量，即根據Ct值計算2-ΔΔct值。ΔΔCt=（Ct目的－Ct內參）－（Ct對照－Ct內參）。
表1
RT-PCR目的基因引物序列及產物大小
Table1.
Primer sequence and product size of RT-PCR
1.3.4 ELISA檢測
在加力各時間點收集培養板各孔細胞上清液，按照TGF-β1、Ⅰ型膠原ELISA試劑盒說明進行操作，檢測TGF-β1、Ⅰ型膠原含量。
1.4 統計學方法
采用SPSS11.5統計軟件進行分析。數據以均數±標準差表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗；檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 細胞形態觀察
對照組：細胞分布分散，排列無序。實驗組：加載后細胞增殖旺盛，分布密集，排列呈一定方向性；隨加載時間增加，細胞增殖愈旺盛，分布愈加密集。見圖 1。
圖1
各組細胞形態學觀察（倒置顯微鏡×100） ? 對照組背部細胞培養24 h ? 實驗組背部細胞培養24 h ? 實驗組背部細胞培養36 h ? 實驗組背部細胞培養48 h ? 對照組上臂內側細胞培養24 h ? 實驗組上臂內側細胞培養24 h ? 實驗組上臂內側細胞培養36 h ? 實驗組上臂內側細胞培養48 h? ?圖 2 機械張力對細胞增殖的影響
Figure1.
Cell morphology of skin fibroblasts cultured in vitro (Inverted microscope×100) ? Scapular upper back of control group at 24 hours ? Scapular upper back of experimental group at 24 hours ? Scapular upper back of experimental group at 36 hours ? Scapular upper back of experimental group at 48 hours ? Medial side of upper arm of control group at 24 hours ? Medial side of upper arm of experimental group at 24 hours ? Medial side of upper arm of experimental group at 36 hours ? Medial side of upper arm of experimental group at 48 hours? ? Fig. 2 Effect of cyclic stretch on the proliferation of cultured scapular upper back and medial side of upper arm skin fibroblasts
2.2 CCK-8檢測細胞增殖活性
各時間點，對照組背部及上臂內側細胞增殖比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。加載24 h時，實驗組背部及上臂內側細胞增殖活性比較，差異無統計學意義（t=0.644，P=0.534）；加載36、48 h時背部細胞增殖能力高于上臂內側，差異均有統計學意義（t=2.96，P=0.014；t=7.319，P=0.000）。見圖 2。
2.3 RT-PCR檢測
各時間點，對照組背部細胞及上臂內側細胞整合素β1、P130Cas、COL1A1、TGF-β1 mRNA表達水平比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。加載24 h時，實驗組背部細胞及上臂內側細胞整合素β1、P130Cas、TGF-β1 mRNA表達水平比較，差異均無統計學意義（t=1.488，P=0.167； t=1.153，P=0.276； t=0.705，P=0.497）；36 h和48 h時，背部細胞以上基因表達水平均顯著高于上臂內側細胞，比較差異均有統計學意義[（t=8.459，P=0.000；t=10.002，P=0.000；t=9.587，P=0.000）；（t=13.942，P=0.000；t=32.525，P=0.000；t=12.819，P=0.000）]。各時間點，實驗組背部及上臂內側細胞中COL1A1 mRNA表達水平比較，差異均無統計學意義（t=1.718，P=0.117；t=1.919，P=0.084；t=1.823，P=0.098）。見圖 3。
圖3
機械張力對細胞整合素β1、P130Cas、TGF-β1、COL1A1 mRNA表達的影響 ? 整合素β1 ? P130Cas ? TGF-β1 ? COL1A1? ?圖 4 機械張力對細胞TGF-β1和Ⅰ型膠原蛋白表達的影響 ? TGF-β1 ? Ⅰ型膠原
Figure3.
Effects of cyclic stretch on target gene expressions in scapular upper back and medial side of upper arm skin fibroblasts ? Integrin β1 ? P130Cas ? TGF-β1 ? COL1A1? ? Fig. 4 Effects of cyclic stretch on target protein productions in scapular upper back and medial side of upper arm skin fibroblasts ? TGF-β1 ? Collagen type Ⅰ
2.4 ELISA檢測
各時間點，對照組背部及上臂內側細胞TGF-β1、Ⅰ型膠原含量比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。加載24 h時，實驗組背部及上臂內側細胞TGF-β1含量比較，差異無統計學意義（t=1.996，P=0.074）；36、48h時背部細胞高于上臂內側細胞，差異有統計學意義（t=5.975，P=0.000；t=14.686，P=0.000）。而各時間點實驗組背部及上臂內側細胞Ⅰ型膠原含量比較，差異均無統計學意義（t=1.826，P=0.098；t=0.341，P=0.740；t=1.606，P=0.139）。見圖 4。
3 討論
研究發現，通過加載靜態機械張力，可以促進皮膚成纖維細胞增殖、分泌生長因子[10]；動態機械張力可以促進皮膚成纖維細胞增殖、膠原合成和TGF-β表達 [11]；機械張力可以使成纖維細胞旁分泌TGF-β，也可以活化肌成纖維細胞細胞外基質中的TGF-β[12]。但有研究發現阻斷機械張力傳導并不影響皮膚成纖維細胞合成膠原和表達TGF-β[13]；甚至，機械張力可通過下調CTGF表達抑制成纖維細胞增殖及膠原合成[14]。以上國內外有關皮膚成纖維細胞對機械張力反應的研究結論差異較大，我們認為與選擇的成纖維細胞來源部位不同有關。
皮膚作為人體最大器官，不同部位發生增生性瘢痕的幾率不同，增生性瘢痕的轉歸也不同。人體肩背部、前胸及關節部位受到重力和肌肉牽拉力的影響最大，是增生性瘢痕多發部位；而上瞼、肢體屈側、手足底等處由于受到重力和肌肉牽拉力影響較小，增生性瘢痕發生率低[4-6]。因此，我們認為人體不同部位皮膚對機械張力反應不同。因此，明確人體不同部位正常皮膚成纖維細胞的力學參數是研究增生性瘢痕力學機制的基礎。目前，罕見人體不同部位、性別與皮膚成纖維細胞力學參數的相關研究文獻。本研究中，我們隨機選擇健康自愿者背部和上臂內側正常皮膚進行比較，這兩個部位分別為增生性瘢痕高發和少發部位。
整合素是機械和生化信號傳輸的雙向通道，可以對細胞內外的刺激產生反應[15]。當整合素胞外區域與其特異的細胞外基質配體結合后，會導致細胞骨架蛋白聚集，形成粘著斑。粘著斑是主要的機械信號感受位點，其機械形變是機械信號傳導的起始[16]。蛋白酪氨酸激酶活化引起粘著斑激酶（focal adhesion kinase，FAK）磷酸化，活化的FAK激活整合素β鏈胞內區與粘著斑復合體內的Talin 和Vinculin 連接，把力學信號從胞外傳遞進胞內[17]。細胞骨架蛋白P130Cas是細胞內基本的感應器，FAK磷酸化后將其激活。P130Cas負責將力學信號有選擇轉換到細胞和核內的不同構件上，產生一系列生化信號[18-19]。既往研究發現機械張力能夠刺激皮膚成纖維細胞整合素β1和P130Cas基因表達[20-21]。
本研究結果顯示，機械張力能刺激成纖維細胞增殖，促進整合素β1、P130Cas、TGF-β1和COL1A1基因表達，刺激TGF-β1和Ⅰ型膠原分泌。但是，實驗組兩部位細胞的反應水平不一致。實驗組背部細胞整合素β1 mRNA和P130Cas mRNA表達在加載36 h和48 h均高于上臂內側，顯示背部皮膚成纖維細胞對機械張力的敏感性更高；背部細胞增殖及TGF-β1 mRNA表達和分泌水平在加載36 h和48 h均高于上臂內側，顯示背部皮膚成纖維細胞對機械張力的生化反應更強烈。加載機械張力后各時間點實驗組兩部位Ⅰ型膠原mRNA表達和分泌水平差異均無統計學意義，提示短時間內張力刺激兩部位對Ⅰ型膠原的合成和分泌能力無顯著影響。
綜上述，人體不同部位皮膚成纖維細胞對機械張力的傳導能力和生化反應不同，可能導致不同部位增生性瘢痕的發生率不同。但本研究僅選擇了兩個部位，尚需進一步研究人體更多部位皮膚成纖維細胞對機械張力的反應。
增生性瘢痕的發生機制目前尚未明確，研究表明機械張力可能在其形成過程中發揮主要作用[1-2]；成纖維細胞是關鍵效應細胞，其異質性被認為是增生性瘢痕發病的重要機制[3]。皮膚是人體最大的器官，不同部位皮膚承受的機械張力不同，增生性瘢痕發生幾率和轉歸也不同[4-6]，提示不同部位皮膚對機械張力的反應可能也不同。本研究通過檢測人體背部和上臂內側正常皮膚成纖維細胞對機械張力的反應，探討人體皮膚成纖維細胞的部位特征，藉此探索增生性瘢痕的發生機制。
1 材料與方法
1.1 主要試劑及儀器
α-MEM培養基、FBS、含EDTA的胰酶（HyClone公司，美國）；Cell Counting Kit-8（CCK-8）試劑盒（同仁化學研究所，日本）；逆轉錄試劑盒、熒光定量PCR試劑盒（大連寶生物工程有限公司）；TGF-β1、Ⅰ型膠原ELISA試劑盒（R&D Systems 公司，美國）；Trizol試劑（Sigma公司，美國）。Ⅰ型膠原a1鏈（collagen type Ⅰα1 chain，COL1A1）、TGF-β1、整合素β1、 P130Cas（p130Crk-associated substance）PCR引物由上海生工生物工程技術服務有限公司設計合成多通道細胞應力加載儀由青島大學附屬青島市立醫院口腔科袁曉與哈爾濱工業大學聯合研制；6 孔彈性基底膜培養板（BF-3001C；Flex-cell 公司，美國）；酶聯免疫檢測儀（Tecan公司，瑞士）；ABI-7500 定量PCR儀（ABI公司，美國）；CO2培養箱（Shelden公司，美國）；倒置顯微鏡（Leica公司，德國）。
1.2 實驗分組及方法
實驗用正常皮膚組織標本由2013年1月－2014年1月于青島大學附屬醫院燒傷整形外科接受色素痣切除手術的3例患者自愿捐贈，男1例，女2例；年齡20、21、40歲。每例患者均取背部及上臂內側皮膚，按照文獻[7-8]應用組織塊法體外培養成纖維細胞，取第5～8代細胞進行實驗。
背部和上臂內側細胞分別設實驗組和對照組，實驗組細胞接受加載周期性機械張力，對照組細胞不作加載。調整細胞懸液濃度至1.5×105個/mL，以2 mL/孔均勻接種于6孔彈性基底膜培養板，每孔接種細胞3×105個。于37℃、5%CO2及飽和濕度條件下繼續培養24 h，倒置顯微鏡下觀察細胞達70%～80%融合后，更換培養基。根據前期研究皮膚成纖維細胞對10%拉伸幅度的機械張力產生明顯機械傳導和生化效應[9]，我們將實驗組細胞培養板置于多通道細胞應力加載儀內，加載周期性機械張力，拉伸最大幅度為10%；加載頻率為0.1Hz，即5 s拉伸，5 s松弛。實驗組加載24、36、48 h，對照組于相應時間點，取細胞進行以下觀測。
1.3 觀測指標
1.3.1 細胞形態學觀察
各時間點加載結束后，倒置顯微鏡下觀察各組細胞形態變化。
1.3.2 CCK-8
檢測細胞增殖活性各時間點兩組分別取3孔細胞，每孔加入CCK-8試劑200 μL，搖動培養板將試劑混勻后繼續在培養箱中培養3 h。取細胞上清液，采用酶聯免疫檢測儀在450 nm波長處檢測吸光度（A）值。以A值大小間接反映細胞數量。
1.3.3 RT-PCR檢測
各個時間點取3孔細胞，每孔加入1 mL Trizol試劑裂解細胞，Trizol 法提取細胞總RNA，常規行RT-PCR檢測整合素β1、P130Cas、COL1A1、TGF-β1 mRNA表達水平。具體如下：SYBR? Premix TaqTM Ⅱ10 μL，濃度 10 μmol/L 的上、下游引物各0.8 μL，DNA模板2 μL，雙蒸水6.4 μL，每個樣品重復3管。反應依照兩步法PCR擴增標準程序，進行95℃預變形30s，然后95℃、5s，60℃、20s，40個循環。擴增完成后，應用LightCycler480軟件對反應產物的溶解曲線進行自動定量分析。采用GAPDH作為內參，各引物序列見表 1。采用相對定量法計算各目的基因mRNA含量，即根據Ct值計算2-ΔΔct值。ΔΔCt=（Ct目的－Ct內參）－（Ct對照－Ct內參）。
表1
RT-PCR目的基因引物序列及產物大小
Table1.
Primer sequence and product size of RT-PCR
1.3.4 ELISA檢測
在加力各時間點收集培養板各孔細胞上清液，按照TGF-β1、Ⅰ型膠原ELISA試劑盒說明進行操作，檢測TGF-β1、Ⅰ型膠原含量。
1.4 統計學方法
采用SPSS11.5統計軟件進行分析。數據以均數±標準差表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗；檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 細胞形態觀察
對照組：細胞分布分散，排列無序。實驗組：加載后細胞增殖旺盛，分布密集，排列呈一定方向性；隨加載時間增加，細胞增殖愈旺盛，分布愈加密集。見圖 1。
圖1
各組細胞形態學觀察（倒置顯微鏡×100） ? 對照組背部細胞培養24 h ? 實驗組背部細胞培養24 h ? 實驗組背部細胞培養36 h ? 實驗組背部細胞培養48 h ? 對照組上臂內側細胞培養24 h ? 實驗組上臂內側細胞培養24 h ? 實驗組上臂內側細胞培養36 h ? 實驗組上臂內側細胞培養48 h? ?圖 2 機械張力對細胞增殖的影響
Figure1.
Cell morphology of skin fibroblasts cultured in vitro (Inverted microscope×100) ? Scapular upper back of control group at 24 hours ? Scapular upper back of experimental group at 24 hours ? Scapular upper back of experimental group at 36 hours ? Scapular upper back of experimental group at 48 hours ? Medial side of upper arm of control group at 24 hours ? Medial side of upper arm of experimental group at 24 hours ? Medial side of upper arm of experimental group at 36 hours ? Medial side of upper arm of experimental group at 48 hours? ? Fig. 2 Effect of cyclic stretch on the proliferation of cultured scapular upper back and medial side of upper arm skin fibroblasts
2.2 CCK-8檢測細胞增殖活性
各時間點，對照組背部及上臂內側細胞增殖比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。加載24 h時，實驗組背部及上臂內側細胞增殖活性比較，差異無統計學意義（t=0.644，P=0.534）；加載36、48 h時背部細胞增殖能力高于上臂內側，差異均有統計學意義（t=2.96，P=0.014；t=7.319，P=0.000）。見圖 2。
2.3 RT-PCR檢測
各時間點，對照組背部細胞及上臂內側細胞整合素β1、P130Cas、COL1A1、TGF-β1 mRNA表達水平比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。加載24 h時，實驗組背部細胞及上臂內側細胞整合素β1、P130Cas、TGF-β1 mRNA表達水平比較，差異均無統計學意義（t=1.488，P=0.167； t=1.153，P=0.276； t=0.705，P=0.497）；36 h和48 h時，背部細胞以上基因表達水平均顯著高于上臂內側細胞，比較差異均有統計學意義[（t=8.459，P=0.000；t=10.002，P=0.000；t=9.587，P=0.000）；（t=13.942，P=0.000；t=32.525，P=0.000；t=12.819，P=0.000）]。各時間點，實驗組背部及上臂內側細胞中COL1A1 mRNA表達水平比較，差異均無統計學意義（t=1.718，P=0.117；t=1.919，P=0.084；t=1.823，P=0.098）。見圖 3。
圖3
機械張力對細胞整合素β1、P130Cas、TGF-β1、COL1A1 mRNA表達的影響 ? 整合素β1 ? P130Cas ? TGF-β1 ? COL1A1? ?圖 4 機械張力對細胞TGF-β1和Ⅰ型膠原蛋白表達的影響 ? TGF-β1 ? Ⅰ型膠原
Figure3.
Effects of cyclic stretch on target gene expressions in scapular upper back and medial side of upper arm skin fibroblasts ? Integrin β1 ? P130Cas ? TGF-β1 ? COL1A1? ? Fig. 4 Effects of cyclic stretch on target protein productions in scapular upper back and medial side of upper arm skin fibroblasts ? TGF-β1 ? Collagen type Ⅰ
2.4 ELISA檢測
各時間點，對照組背部及上臂內側細胞TGF-β1、Ⅰ型膠原含量比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。加載24 h時，實驗組背部及上臂內側細胞TGF-β1含量比較，差異無統計學意義（t=1.996，P=0.074）；36、48h時背部細胞高于上臂內側細胞，差異有統計學意義（t=5.975，P=0.000；t=14.686，P=0.000）。而各時間點實驗組背部及上臂內側細胞Ⅰ型膠原含量比較，差異均無統計學意義（t=1.826，P=0.098；t=0.341，P=0.740；t=1.606，P=0.139）。見圖 4。
3 討論
研究發現，通過加載靜態機械張力，可以促進皮膚成纖維細胞增殖、分泌生長因子[10]；動態機械張力可以促進皮膚成纖維細胞增殖、膠原合成和TGF-β表達 [11]；機械張力可以使成纖維細胞旁分泌TGF-β，也可以活化肌成纖維細胞細胞外基質中的TGF-β[12]。但有研究發現阻斷機械張力傳導并不影響皮膚成纖維細胞合成膠原和表達TGF-β[13]；甚至，機械張力可通過下調CTGF表達抑制成纖維細胞增殖及膠原合成[14]。以上國內外有關皮膚成纖維細胞對機械張力反應的研究結論差異較大，我們認為與選擇的成纖維細胞來源部位不同有關。
皮膚作為人體最大器官，不同部位發生增生性瘢痕的幾率不同，增生性瘢痕的轉歸也不同。人體肩背部、前胸及關節部位受到重力和肌肉牽拉力的影響最大，是增生性瘢痕多發部位；而上瞼、肢體屈側、手足底等處由于受到重力和肌肉牽拉力影響較小，增生性瘢痕發生率低[4-6]。因此，我們認為人體不同部位皮膚對機械張力反應不同。因此，明確人體不同部位正常皮膚成纖維細胞的力學參數是研究增生性瘢痕力學機制的基礎。目前，罕見人體不同部位、性別與皮膚成纖維細胞力學參數的相關研究文獻。本研究中，我們隨機選擇健康自愿者背部和上臂內側正常皮膚進行比較，這兩個部位分別為增生性瘢痕高發和少發部位。
整合素是機械和生化信號傳輸的雙向通道，可以對細胞內外的刺激產生反應[15]。當整合素胞外區域與其特異的細胞外基質配體結合后，會導致細胞骨架蛋白聚集，形成粘著斑。粘著斑是主要的機械信號感受位點，其機械形變是機械信號傳導的起始[16]。蛋白酪氨酸激酶活化引起粘著斑激酶（focal adhesion kinase，FAK）磷酸化，活化的FAK激活整合素β鏈胞內區與粘著斑復合體內的Talin 和Vinculin 連接，把力學信號從胞外傳遞進胞內[17]。細胞骨架蛋白P130Cas是細胞內基本的感應器，FAK磷酸化后將其激活。P130Cas負責將力學信號有選擇轉換到細胞和核內的不同構件上，產生一系列生化信號[18-19]。既往研究發現機械張力能夠刺激皮膚成纖維細胞整合素β1和P130Cas基因表達[20-21]。
本研究結果顯示，機械張力能刺激成纖維細胞增殖，促進整合素β1、P130Cas、TGF-β1和COL1A1基因表達，刺激TGF-β1和Ⅰ型膠原分泌。但是，實驗組兩部位細胞的反應水平不一致。實驗組背部細胞整合素β1 mRNA和P130Cas mRNA表達在加載36 h和48 h均高于上臂內側，顯示背部皮膚成纖維細胞對機械張力的敏感性更高；背部細胞增殖及TGF-β1 mRNA表達和分泌水平在加載36 h和48 h均高于上臂內側，顯示背部皮膚成纖維細胞對機械張力的生化反應更強烈。加載機械張力后各時間點實驗組兩部位Ⅰ型膠原mRNA表達和分泌水平差異均無統計學意義，提示短時間內張力刺激兩部位對Ⅰ型膠原的合成和分泌能力無顯著影響。
綜上述，人體不同部位皮膚成纖維細胞對機械張力的傳導能力和生化反應不同，可能導致不同部位增生性瘢痕的發生率不同。但本研究僅選擇了兩個部位，尚需進一步研究人體更多部位皮膚成纖維細胞對機械張力的反應。
