引用本文： 張淼, 周國雄. Galectin-3 和 Galectin-1 在胰腺癌中的表達. 華西醫學, 2017, 32(10): 1509-1514. doi: 10.7507/1002-0179.201708009 復制
在我國，因腫瘤死亡的病例中有 2.26% 是由胰腺癌所致，且胰腺癌發病率呈逐年上升趨勢[1]。由于胰腺的解剖位置比較獨特，早期的胰腺癌往往無癥狀，加之缺乏有效敏感的診斷方法，胰腺癌早期不易被發現，患者一旦出現癥狀，腫瘤往往己經轉移。目前盡管對胰腺癌的流行病學和分子生物學的研究使我們對其發生發展有了一些認識，但胰腺癌的病因還不太清楚，因此，我們需要對胰腺癌的發生發展的相關機制作更深入的研究，為臨床早期發現及治療胰腺癌提供新的方法。Galectin-3 是半乳凝素家族中的一員，廣泛表達于正常組織和腫瘤組織中，參與多種生理和病理過程，包括細胞生長和凋亡、細胞黏附及新生血管形成和腫瘤浸潤與轉移等[2]。近年來越來越多的研究發現，很多腫瘤表達高水平的 Galectin-3，如胃癌、結腸癌、間變型大細胞淋巴瘤、甲狀腺癌、卵巢癌及黑色素瘤等[3]。因此，檢測 Galectin-3 水平可能對一些腫瘤的早期診斷及預后判斷具有一定的臨床價值。Galectin-1 是半乳糖凝集素家族中另一重要成員，Galectin-1 也表達于多種正常的細胞如內皮細胞、樹突狀細胞、巨噬細胞、神經纖維細胞和腫瘤組織如腎癌、胃癌、結腸癌、前列腺癌等，且在胸腺等免疫組織中含量豐富，可能與免疫有關。本研究通過培養人胰腺癌細胞 SW1990、PANC-1 和 ASPC-1 及收集臨床胰腺癌標本，采用逆轉錄聚合酶鏈反應（reverse transcriptase-polymerase chain reaction，RT-PCR）、免疫細胞化學（immunocytochemistry，ICC）、免疫組織化學（immunohistochemistry，IHC）等方法研究 Galectin-3 和 Galectin-1 在胰腺癌中的表達情況，為進一步研究其在胰腺癌發生發展中的作用提供依據。現報告如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
選擇我院病理科中于 2002 年—2009 年經手術切除、病理證實的 40 例胰腺癌組織標本和 31 例正常胰腺組織標本。胰腺癌中，男 24 例，女 16 例；年齡 39～78 歲，平均（58.0±6.7 歲）；病理分級：高分化 10 例，中分化 13 例，低分化 17 例。正常胰腺中，男 20 例，女 11 例；年齡 42～73 歲，平均（56.0±6.2 歲）。
1.2 儀器與試劑
主要儀器：二氧化碳恒溫培養箱、–80℃ 低溫冰箱（日本 Sanyo 公司）；臺式高速離心機、臺式低溫高速離心機（德國 Hettich 公司）；聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）擴增儀（美國 MJ Research 公司）；凝膠電泳攝像儀（日本松下公司）；穩壓穩流電泳儀（北京六一儀器廠）；倒置顯微鏡（日本奧林巴斯公司）。
主要試劑：Trizol Reagent（美國 Invitrogen 公司）；RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit、DreamTaqTM Green PCR Master Mix（2X）（加拿大 Fermentas 公司）；100 bp DNA Marker（上海捷瑞生物工程有限公司）；IHC 試劑盒（抗小鼠生物素化二抗）（上海明睿生物技術有限公司）；抗山羊免疫球蛋白G 二抗-辣根過氧化物酶（上海麥約爾生物技術有限公司）；鼠抗人 Galectin-3（美國 Santa 公司；羊抗人 Galectin-1（美國 R&D 公司）。
胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1（均購于中國科學院上海生命科學研究院）在含 10% 小牛血清、100 U/mL青霉素（山西振東泰盛注射用青霉素鈉）和 100 μg/mL 鏈霉素（山東瑞陽注射用硫酸鏈霉素）DMEM 完全培養基內，在 37℃、5% 二氧化碳飽和濕度恒溫箱中培養，待細胞單層貼壁生長至 80% 左右時用 0.25% 胰蛋白酶消化，按 1∶3 的比例傳代接種至新的培養瓶中繼續培養，備用。
1.3 方法
1.3.1 RT-PCR 檢測胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 中 Galectin-3 和 Galectin-1 mRNA 的表達
① 引物的設計和合成。根據 GeneBank 數據庫中提供的人 Galectin-3、Galectin-1、β-actin 的全長互補 DNA （complementary DNA，cDNA ）序列，基因編號分別為 NM_002306、NM_002305、NM_001101，經過 Primer 5.0 軟件設計引物，并經過 Blast 同源性檢索后，由 Invitrogen（上海）公司合成 3 對引物，其序列及擴增片段大小見表 1。② RT-PCR。各取 3 瓶處于對數生長期的 SW1990、PANC-1、ASPC-1 細胞，進行細胞總 RNA 的收集、RNA 定量與純度測定、cDNA 的合成、PCR 擴增、凝膠電泳法對 PCR 產物分析。
表1
Galectin-3、Galectin-1、β-actin 的引物序列及擴增片段大小
1.3.2 ICC 檢測胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 中Galectin-3 和 Galectin-1 蛋白的表達
各取 1 瓶 SW1990 、PANC-1、ASPC-1 細胞進行細胞爬片、固定、染色（按 IHC 試劑盒說明步驟完成），鏡下觀察各細胞株細胞質內及細胞膜出現棕黃色顆粒為表達陽性細胞，并用無錫朗珈病理圖文分析系統進行圖文處理。
1.3.3 IHC 檢測胰腺癌和正常胰腺組織中 Galectin-3 和 Galectin-1 蛋白的表達
所需組織經 4% 甲醛固定、LEICA 自動脫水機脫水、透明、浸蠟處理，包埋成蠟塊，切成厚度為 4～5 μm 的薄片，切片要求平整，盡量避免因刀的缺口造成組織劃痕，以免影響組織細胞的形態完整，出現非特異性著色。對切片脫蠟、抗原修復、染色（按 IHC 試劑盒說明步驟完成），鏡下觀察腫瘤細胞細胞質內及細胞膜出現棕黃色顆粒為表達陽性細胞。IHC 評分方法[4]：按染色強度評分，無色為 0 分，弱陽性為 1 分，中度陽性為 2 分，強陽性為 3 分；按陽性細胞率評分，腫瘤細胞內無陽性染色者為 0 分，陽性細胞率≤10% 為 1 分，11%～50% 為 2 分，51%～80% 為 3 分，>80% 為 4 分；將二者相乘得綜合 IHC 評分，0 分為－，1～4 分為+，5～8 分為++，9～12 分為+++。
1.4 統計學方法
用 SPSS 11.5 統計軟件分析。計量資料采用均數±標準差表示，兩組均數比較采用t 檢驗，多組均數比較采用單因素方差分析。等級資料采用例數表示，兩組比較采用 Wilcoxon 秩和檢驗，多組比較采用 Kruskal-Wallis 秩和檢驗。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 Galectin-3、Galectin-1 mRNA 在胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 中的表達
在胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 中，檢測到有 Galectin-3 mRNA 的表達，未檢測到 Galectin-1 mRNA 的表達。見圖 1。
2.2 Galectin-3、Galectin-1 蛋白在胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 中的表達
在胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 中， Galectin-3 蛋白均有表達，Galectin-1 蛋白未見表達。見圖 2。
圖1
SW1990、PANC-1、ASPC-1 中 Galectin-3 和 Galectin-1 mRNA 電泳圖
1： Marker；2、3、4：依次為 SW1990、PANC-1、ASPC-1 中 Galectin-3 mRNA；5、6、7：依次為 SW1990、PANC-1、ASPC-1 中 Galectin-1 mRNA
圖2
各胰腺癌細胞株中 Galectin-3 和 Galectin-1 蛋白的表達（ICC ×200）
圖3
正常胰腺和不同分化程度胰腺癌組織中 Galectin-3 和 Galectin-1 蛋白的表達（IHC ×200）
2.3 Galectin-3、Galectin-1 蛋白在胰腺癌和正常胰腺組織中的表達
31 例正常胰腺組織中 Galectin-3、Galectin-1 蛋白均無表達。而在 40 例胰腺癌組織中 Galectin-3、Galectin-1 蛋白均有表達，其中 Galectin-3 蛋白表達（+）9 例，（++）14 例，（+++）17 例，均表達于胰腺癌細胞中，而胰腺癌細胞周圍的基質中無表達； Galectin-1 蛋白表達（+）14 例，（++）12 例，（+++）14 例，但在 40 例胰腺癌組織標本的癌細胞中均未發現有 Galectin-1 蛋白表達，卻在癌細胞周圍的成纖維細胞中有 Galectin-1 蛋白的表達。見圖 3。
Galectin-3 蛋白在胰腺癌組織中的表達水平與胰腺癌的分化程度無關（P>0.05）。低、中、高分化程度的胰腺癌中 Galectin-1 蛋白表達水平差異無統計學意義（P>0.05），但可見低分化與高、中分化胰腺癌中 Galectin-1 蛋白表達水平的分布有所不同，合并高、中分化胰腺癌后進行分析，結果顯示，與高、中分化胰腺癌比較，低分化胰腺癌中 Galectin-1 蛋白表達水平較高，兩組間差異有統計學意義（P<0.05）。見表 2～4。
表2
Galectin-3 蛋白在不同分化程度胰腺癌組織表達（例）
表3
Galectin-1 蛋白在不同分化程度胰腺癌組織表達（例）
表4
Galectin-1 蛋白在低分化與高、中分化胰腺癌組織中的表達（例）
3 討論
Galectin-3 和 Galectin-1 是半乳凝素家族中的 2 個重要成員。Galectin-3 包括 2 個結合域：1 個糖結構識別域（carbohydrate-recognition domain，CRD）和 1 個特有的富含甘氨酸、脯氨酸和酪氨酸重復序列氨基（-NH2）末端結合域。氨基末端結合域由 110～150 個氨基酸殘基組成，為 CRD 與具有糖軛合物的細胞表面結合時發揮多種功能所必需，羧基末端的糖結合域包含約 135 個氨基酸殘基的 CRD[5]。Galectin-3 可廣泛表達于正常細胞（如巨噬細胞和單核細胞）、正常組織（如正常胃黏膜、結腸黏膜、乳腺上皮、前列腺）和腫瘤組織（如胃癌、結腸癌、乳腺癌、前列腺癌、間變型大細胞淋巴瘤、甲狀腺癌、肺癌、肝癌、膀胱癌及黑色素瘤等）中[6]，在多數腫瘤中可呈高表達，發揮著多種生物學作用，包括調節細胞的生長、凋亡、細胞黏附及參與新生血管形成及腫瘤浸潤與轉移等。研究發現，在甲狀腺癌組織中 Galectin-3 呈高表達，而在甲狀腺正常組織、癌旁組織及甲狀腺腺瘤中無 Galectin-3 的表達或者表達極弱[7]。同時，在惡性甲狀腺癌中能檢測到有 Galectin-3 mRNA 的高表達，而在正常組織和良性占位中檢測不到，且還發現 Galectin-3 的表達量與甲狀腺癌的發展階段相關，越到晚期，Galectin-3 的表達越高，說明 Galectin-3 在甲狀腺癌的發生發展中具有重要作用。然而 Idikio [8]研究發現，在正常乳腺組織中 Galectin-3 也是高表達的，但在乳腺癌組織中 Galectin-3 的表達量卻出現了下調現象，說明 Galectin-3 在各腫瘤中的表達情況是不一樣的。本實驗通過 RT-PCR 方法檢測到胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 有 Galectin-3 mRNA 的表達，用 ICC 也證實了胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 有 Galectin-3 蛋白的表達；對 40 例胰腺癌組織和 31 例正常胰腺組織進行 IHC 分析，發現正常胰腺組織中不表達 Galectin-3 蛋白，而在胰腺癌組織中有 Galectin-3 蛋白表達，且都表達在胰腺癌細胞中，其周圍基質無 Galectin-3 蛋白的表達。且 Galectin-3 蛋白在胰腺癌組織中的表達量隨著胰腺癌的病理分化程度的加深，其表達量無明顯的變化（P>0.05），說明胰腺癌細胞有 Galectin-3 有高表達，且 Galectin-3 可能在胰腺癌的發生發展具有重要作用，但和胰腺癌的病理分化程度無關系。
Galectin-1 表達于多種類型的細胞，如內皮細胞、樹突狀細胞、神經膠質瘤胸腺上皮細胞、巨噬細胞、成纖維細胞、骨髓基質細胞和腎癌細胞等。在胸腺、胎盤等免疫組織中含量比較豐富。很多研究發現與相應的正常組織相比，在許多腫瘤組織（如星形細胞瘤、黑色素瘤、結腸癌、乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌等）中 Galectin-1 的表達量上調[9]，但目前關于 Galectin-1 在腫瘤的何種組織成分中表達的這個問題的報道情況還不完全一致。van den Br?le 等[10]報道 Galectin-1 主要在前列腺癌癌巢周邊的基質中表達，而前列腺癌細胞卻無明顯表達，在正常組織基質中亦無表達或表達很弱；乳腺癌、卵巢癌的 Galectin-1 在其基質中表達[11-12]；童華生等[13]也發現 Galectin-1 表達于大腸癌組織細胞外基質，且其深層侵襲部位表達明顯高于淺層部位表達，而在相應的腫瘤細胞中卻未表達。Berberat 等[14]報道胰腺癌中 Galectin-1 在胰腺癌周圍成纖維細胞及基質中表達，在胰腺癌細胞中無表達。但有研究顯示 Galectin-1 蛋白不僅在胰腺癌基質中呈強陽性表達，在部分胰腺癌細胞中亦呈陽性染色[15]。本實驗通過 RT-PCR 方法檢測胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 是否有 Galectin-1 mRNA 的表達時，發現 3 種胰腺癌細胞株無 Galectin-1 mRNA 表達；用 ICC 也未發現胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 有 Galectin-1 蛋白的表達。對 40 例胰腺癌組織和 31 例正常胰腺組織進行 IHC 分析發現，正常胰腺組織中不表達 Galectin-1 蛋白，在胰腺癌細胞中亦無 Galectin-1 蛋白的表達，而在胰腺癌細胞周圍的成纖維細胞及基質中有 Galectin-1 蛋白的表達，且和胰腺癌的分化程度有關，低分化胰腺癌患者 Galectin-1 蛋白的表達高于高、中分化者（P<0.05）。本實驗的結果與 Berberat 等[14]的報道基本一致，而與 Shen 等[15]報道有一定差異，存在這種染色的差異可能一方面與實驗方法的敏感性及抗體不一有關；另一方面，由于本實驗標本例數及細胞株品種較少，結果可能存在一定的局限性，尚待進一步驗證。Galectin-1 在胰腺癌細胞外基質中的高表達，說明其在胰腺癌的侵襲轉移中可能起著重要作用。
綜上所述，Galectin-3 在正常胰腺組織中無表達，在胰腺癌組織中有強陽性表達，且均表達于胰腺癌細胞中；但其表達量和胰腺癌的分化程度無關。Galectin-1 在正常胰腺組織中無表達，在胰腺癌組織中有強陽性表達，且表達于胰腺癌細胞周圍的基質中，在胰腺癌細胞中無表達；其在胰腺癌中的表達和胰腺癌的病理分化程度有關，在低分化胰腺癌組織中表達量明顯高于高、中分化胰腺癌組織。
在我國，因腫瘤死亡的病例中有 2.26% 是由胰腺癌所致，且胰腺癌發病率呈逐年上升趨勢[1]。由于胰腺的解剖位置比較獨特，早期的胰腺癌往往無癥狀，加之缺乏有效敏感的診斷方法，胰腺癌早期不易被發現，患者一旦出現癥狀，腫瘤往往己經轉移。目前盡管對胰腺癌的流行病學和分子生物學的研究使我們對其發生發展有了一些認識，但胰腺癌的病因還不太清楚，因此，我們需要對胰腺癌的發生發展的相關機制作更深入的研究，為臨床早期發現及治療胰腺癌提供新的方法。Galectin-3 是半乳凝素家族中的一員，廣泛表達于正常組織和腫瘤組織中，參與多種生理和病理過程，包括細胞生長和凋亡、細胞黏附及新生血管形成和腫瘤浸潤與轉移等[2]。近年來越來越多的研究發現，很多腫瘤表達高水平的 Galectin-3，如胃癌、結腸癌、間變型大細胞淋巴瘤、甲狀腺癌、卵巢癌及黑色素瘤等[3]。因此，檢測 Galectin-3 水平可能對一些腫瘤的早期診斷及預后判斷具有一定的臨床價值。Galectin-1 是半乳糖凝集素家族中另一重要成員，Galectin-1 也表達于多種正常的細胞如內皮細胞、樹突狀細胞、巨噬細胞、神經纖維細胞和腫瘤組織如腎癌、胃癌、結腸癌、前列腺癌等，且在胸腺等免疫組織中含量豐富，可能與免疫有關。本研究通過培養人胰腺癌細胞 SW1990、PANC-1 和 ASPC-1 及收集臨床胰腺癌標本，采用逆轉錄聚合酶鏈反應（reverse transcriptase-polymerase chain reaction，RT-PCR）、免疫細胞化學（immunocytochemistry，ICC）、免疫組織化學（immunohistochemistry，IHC）等方法研究 Galectin-3 和 Galectin-1 在胰腺癌中的表達情況，為進一步研究其在胰腺癌發生發展中的作用提供依據。現報告如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
選擇我院病理科中于 2002 年—2009 年經手術切除、病理證實的 40 例胰腺癌組織標本和 31 例正常胰腺組織標本。胰腺癌中，男 24 例，女 16 例；年齡 39～78 歲，平均（58.0±6.7 歲）；病理分級：高分化 10 例，中分化 13 例，低分化 17 例。正常胰腺中，男 20 例，女 11 例；年齡 42～73 歲，平均（56.0±6.2 歲）。
1.2 儀器與試劑
主要儀器：二氧化碳恒溫培養箱、–80℃ 低溫冰箱（日本 Sanyo 公司）；臺式高速離心機、臺式低溫高速離心機（德國 Hettich 公司）；聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）擴增儀（美國 MJ Research 公司）；凝膠電泳攝像儀（日本松下公司）；穩壓穩流電泳儀（北京六一儀器廠）；倒置顯微鏡（日本奧林巴斯公司）。
主要試劑：Trizol Reagent（美國 Invitrogen 公司）；RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit、DreamTaqTM Green PCR Master Mix（2X）（加拿大 Fermentas 公司）；100 bp DNA Marker（上海捷瑞生物工程有限公司）；IHC 試劑盒（抗小鼠生物素化二抗）（上海明睿生物技術有限公司）；抗山羊免疫球蛋白G 二抗-辣根過氧化物酶（上海麥約爾生物技術有限公司）；鼠抗人 Galectin-3（美國 Santa 公司；羊抗人 Galectin-1（美國 R&D 公司）。
胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1（均購于中國科學院上海生命科學研究院）在含 10% 小牛血清、100 U/mL青霉素（山西振東泰盛注射用青霉素鈉）和 100 μg/mL 鏈霉素（山東瑞陽注射用硫酸鏈霉素）DMEM 完全培養基內，在 37℃、5% 二氧化碳飽和濕度恒溫箱中培養，待細胞單層貼壁生長至 80% 左右時用 0.25% 胰蛋白酶消化，按 1∶3 的比例傳代接種至新的培養瓶中繼續培養，備用。
1.3 方法
1.3.1 RT-PCR 檢測胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 中 Galectin-3 和 Galectin-1 mRNA 的表達
① 引物的設計和合成。根據 GeneBank 數據庫中提供的人 Galectin-3、Galectin-1、β-actin 的全長互補 DNA （complementary DNA，cDNA ）序列，基因編號分別為 NM_002306、NM_002305、NM_001101，經過 Primer 5.0 軟件設計引物，并經過 Blast 同源性檢索后，由 Invitrogen（上海）公司合成 3 對引物，其序列及擴增片段大小見表 1。② RT-PCR。各取 3 瓶處于對數生長期的 SW1990、PANC-1、ASPC-1 細胞，進行細胞總 RNA 的收集、RNA 定量與純度測定、cDNA 的合成、PCR 擴增、凝膠電泳法對 PCR 產物分析。
表1
Galectin-3、Galectin-1、β-actin 的引物序列及擴增片段大小
1.3.2 ICC 檢測胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 中Galectin-3 和 Galectin-1 蛋白的表達
各取 1 瓶 SW1990 、PANC-1、ASPC-1 細胞進行細胞爬片、固定、染色（按 IHC 試劑盒說明步驟完成），鏡下觀察各細胞株細胞質內及細胞膜出現棕黃色顆粒為表達陽性細胞，并用無錫朗珈病理圖文分析系統進行圖文處理。
1.3.3 IHC 檢測胰腺癌和正常胰腺組織中 Galectin-3 和 Galectin-1 蛋白的表達
所需組織經 4% 甲醛固定、LEICA 自動脫水機脫水、透明、浸蠟處理，包埋成蠟塊，切成厚度為 4～5 μm 的薄片，切片要求平整，盡量避免因刀的缺口造成組織劃痕，以免影響組織細胞的形態完整，出現非特異性著色。對切片脫蠟、抗原修復、染色（按 IHC 試劑盒說明步驟完成），鏡下觀察腫瘤細胞細胞質內及細胞膜出現棕黃色顆粒為表達陽性細胞。IHC 評分方法[4]：按染色強度評分，無色為 0 分，弱陽性為 1 分，中度陽性為 2 分，強陽性為 3 分；按陽性細胞率評分，腫瘤細胞內無陽性染色者為 0 分，陽性細胞率≤10% 為 1 分，11%～50% 為 2 分，51%～80% 為 3 分，>80% 為 4 分；將二者相乘得綜合 IHC 評分，0 分為－，1～4 分為+，5～8 分為++，9～12 分為+++。
1.4 統計學方法
用 SPSS 11.5 統計軟件分析。計量資料采用均數±標準差表示，兩組均數比較采用t 檢驗，多組均數比較采用單因素方差分析。等級資料采用例數表示，兩組比較采用 Wilcoxon 秩和檢驗，多組比較采用 Kruskal-Wallis 秩和檢驗。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 Galectin-3、Galectin-1 mRNA 在胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 中的表達
在胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 中，檢測到有 Galectin-3 mRNA 的表達，未檢測到 Galectin-1 mRNA 的表達。見圖 1。
2.2 Galectin-3、Galectin-1 蛋白在胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 中的表達
在胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 中， Galectin-3 蛋白均有表達，Galectin-1 蛋白未見表達。見圖 2。
圖1
SW1990、PANC-1、ASPC-1 中 Galectin-3 和 Galectin-1 mRNA 電泳圖
1： Marker；2、3、4：依次為 SW1990、PANC-1、ASPC-1 中 Galectin-3 mRNA；5、6、7：依次為 SW1990、PANC-1、ASPC-1 中 Galectin-1 mRNA
圖2
各胰腺癌細胞株中 Galectin-3 和 Galectin-1 蛋白的表達（ICC ×200）
圖3
正常胰腺和不同分化程度胰腺癌組織中 Galectin-3 和 Galectin-1 蛋白的表達（IHC ×200）
2.3 Galectin-3、Galectin-1 蛋白在胰腺癌和正常胰腺組織中的表達
31 例正常胰腺組織中 Galectin-3、Galectin-1 蛋白均無表達。而在 40 例胰腺癌組織中 Galectin-3、Galectin-1 蛋白均有表達，其中 Galectin-3 蛋白表達（+）9 例，（++）14 例，（+++）17 例，均表達于胰腺癌細胞中，而胰腺癌細胞周圍的基質中無表達； Galectin-1 蛋白表達（+）14 例，（++）12 例，（+++）14 例，但在 40 例胰腺癌組織標本的癌細胞中均未發現有 Galectin-1 蛋白表達，卻在癌細胞周圍的成纖維細胞中有 Galectin-1 蛋白的表達。見圖 3。
Galectin-3 蛋白在胰腺癌組織中的表達水平與胰腺癌的分化程度無關（P>0.05）。低、中、高分化程度的胰腺癌中 Galectin-1 蛋白表達水平差異無統計學意義（P>0.05），但可見低分化與高、中分化胰腺癌中 Galectin-1 蛋白表達水平的分布有所不同，合并高、中分化胰腺癌后進行分析，結果顯示，與高、中分化胰腺癌比較，低分化胰腺癌中 Galectin-1 蛋白表達水平較高，兩組間差異有統計學意義（P<0.05）。見表 2～4。
表2
Galectin-3 蛋白在不同分化程度胰腺癌組織表達（例）
表3
Galectin-1 蛋白在不同分化程度胰腺癌組織表達（例）
表4
Galectin-1 蛋白在低分化與高、中分化胰腺癌組織中的表達（例）
3 討論
Galectin-3 和 Galectin-1 是半乳凝素家族中的 2 個重要成員。Galectin-3 包括 2 個結合域：1 個糖結構識別域（carbohydrate-recognition domain，CRD）和 1 個特有的富含甘氨酸、脯氨酸和酪氨酸重復序列氨基（-NH2）末端結合域。氨基末端結合域由 110～150 個氨基酸殘基組成，為 CRD 與具有糖軛合物的細胞表面結合時發揮多種功能所必需，羧基末端的糖結合域包含約 135 個氨基酸殘基的 CRD[5]。Galectin-3 可廣泛表達于正常細胞（如巨噬細胞和單核細胞）、正常組織（如正常胃黏膜、結腸黏膜、乳腺上皮、前列腺）和腫瘤組織（如胃癌、結腸癌、乳腺癌、前列腺癌、間變型大細胞淋巴瘤、甲狀腺癌、肺癌、肝癌、膀胱癌及黑色素瘤等）中[6]，在多數腫瘤中可呈高表達，發揮著多種生物學作用，包括調節細胞的生長、凋亡、細胞黏附及參與新生血管形成及腫瘤浸潤與轉移等。研究發現，在甲狀腺癌組織中 Galectin-3 呈高表達，而在甲狀腺正常組織、癌旁組織及甲狀腺腺瘤中無 Galectin-3 的表達或者表達極弱[7]。同時，在惡性甲狀腺癌中能檢測到有 Galectin-3 mRNA 的高表達，而在正常組織和良性占位中檢測不到，且還發現 Galectin-3 的表達量與甲狀腺癌的發展階段相關，越到晚期，Galectin-3 的表達越高，說明 Galectin-3 在甲狀腺癌的發生發展中具有重要作用。然而 Idikio [8]研究發現，在正常乳腺組織中 Galectin-3 也是高表達的，但在乳腺癌組織中 Galectin-3 的表達量卻出現了下調現象，說明 Galectin-3 在各腫瘤中的表達情況是不一樣的。本實驗通過 RT-PCR 方法檢測到胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 有 Galectin-3 mRNA 的表達，用 ICC 也證實了胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 有 Galectin-3 蛋白的表達；對 40 例胰腺癌組織和 31 例正常胰腺組織進行 IHC 分析，發現正常胰腺組織中不表達 Galectin-3 蛋白，而在胰腺癌組織中有 Galectin-3 蛋白表達，且都表達在胰腺癌細胞中，其周圍基質無 Galectin-3 蛋白的表達。且 Galectin-3 蛋白在胰腺癌組織中的表達量隨著胰腺癌的病理分化程度的加深，其表達量無明顯的變化（P>0.05），說明胰腺癌細胞有 Galectin-3 有高表達，且 Galectin-3 可能在胰腺癌的發生發展具有重要作用，但和胰腺癌的病理分化程度無關系。
Galectin-1 表達于多種類型的細胞，如內皮細胞、樹突狀細胞、神經膠質瘤胸腺上皮細胞、巨噬細胞、成纖維細胞、骨髓基質細胞和腎癌細胞等。在胸腺、胎盤等免疫組織中含量比較豐富。很多研究發現與相應的正常組織相比，在許多腫瘤組織（如星形細胞瘤、黑色素瘤、結腸癌、乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌等）中 Galectin-1 的表達量上調[9]，但目前關于 Galectin-1 在腫瘤的何種組織成分中表達的這個問題的報道情況還不完全一致。van den Br?le 等[10]報道 Galectin-1 主要在前列腺癌癌巢周邊的基質中表達，而前列腺癌細胞卻無明顯表達，在正常組織基質中亦無表達或表達很弱；乳腺癌、卵巢癌的 Galectin-1 在其基質中表達[11-12]；童華生等[13]也發現 Galectin-1 表達于大腸癌組織細胞外基質，且其深層侵襲部位表達明顯高于淺層部位表達，而在相應的腫瘤細胞中卻未表達。Berberat 等[14]報道胰腺癌中 Galectin-1 在胰腺癌周圍成纖維細胞及基質中表達，在胰腺癌細胞中無表達。但有研究顯示 Galectin-1 蛋白不僅在胰腺癌基質中呈強陽性表達，在部分胰腺癌細胞中亦呈陽性染色[15]。本實驗通過 RT-PCR 方法檢測胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 是否有 Galectin-1 mRNA 的表達時，發現 3 種胰腺癌細胞株無 Galectin-1 mRNA 表達；用 ICC 也未發現胰腺癌細胞株 SW1990、PANC-1、ASPC-1 有 Galectin-1 蛋白的表達。對 40 例胰腺癌組織和 31 例正常胰腺組織進行 IHC 分析發現，正常胰腺組織中不表達 Galectin-1 蛋白，在胰腺癌細胞中亦無 Galectin-1 蛋白的表達，而在胰腺癌細胞周圍的成纖維細胞及基質中有 Galectin-1 蛋白的表達，且和胰腺癌的分化程度有關，低分化胰腺癌患者 Galectin-1 蛋白的表達高于高、中分化者（P<0.05）。本實驗的結果與 Berberat 等[14]的報道基本一致，而與 Shen 等[15]報道有一定差異，存在這種染色的差異可能一方面與實驗方法的敏感性及抗體不一有關；另一方面，由于本實驗標本例數及細胞株品種較少，結果可能存在一定的局限性，尚待進一步驗證。Galectin-1 在胰腺癌細胞外基質中的高表達，說明其在胰腺癌的侵襲轉移中可能起著重要作用。
綜上所述，Galectin-3 在正常胰腺組織中無表達，在胰腺癌組織中有強陽性表達，且均表達于胰腺癌細胞中；但其表達量和胰腺癌的分化程度無關。Galectin-1 在正常胰腺組織中無表達，在胰腺癌組織中有強陽性表達，且表達于胰腺癌細胞周圍的基質中，在胰腺癌細胞中無表達；其在胰腺癌中的表達和胰腺癌的病理分化程度有關，在低分化胰腺癌組織中表達量明顯高于高、中分化胰腺癌組織。
