引用本文： 陳姣, 金詠梅, 鄭沁, 史青, 陳杏園, 粟軍. 急性白血病細胞髓過氧化物酶染色與細胞質髓過氧化物酶診斷意義比較. 華西醫學, 2017, 32(7): 1019-1023. doi: 10.7507/1002-0179.201609066 復制
急性白血病是一種或多種造血干細胞及祖細胞惡變，失去其正常的增殖、分化及成熟的能力，并逐步取代骨髓經血液浸潤至全身組織及器官的一種疾病，分為急性淋巴細胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）和急性非淋巴細胞白血病（acute non-lymphocytic leukemia，ANLL）。急性白血病的準確分型對預后、治療等方面有重要意義[1]。血細胞中的過氧化物酶（peroxidase，POX）主要為髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO），MPO 是人類中性粒細胞含量最多的一種蛋白質，MPO 的檢出對白血病分型具有重要意義。MPO 的檢測方法通常有細胞化學染色和流式細胞術 2 種方法，細胞化學染色檢測的是細胞中的 POX（主要為 MPO），流式細胞術檢測的是細胞質的 MPO（cytoplasm myeloperoxidase，cMPO），兩種方法可以相互補充、相互印證[2]。細胞化學染色鏡檢是最常用的分類方法，其中 POX 染色一直是白血病細胞形態學分類和診斷的重要方法，POX 染色方法有多種，如二氨基聯苯胺法、二鹽酸聯苯胺法等[3]。流式細胞術是最重要的白血病分型方式，尤其是在微小殘留細胞白血病和混合型白血病中，cMPO 是最主要的表面標記抗體[4-5]。本研究旨在通過對急性白血病細胞化學染色檢測 POX 與流式細胞術檢測其 cMPO 的陽性率及陽性積分結果的比較，探討兩種方法檢測 MPO 在白血病分型的差異及互補意義，為白血病分型提供依據。現報告如下。
1 材料與方法
1.1 標本來源
納入 2014 年 1 月—2016 年 5 月在四川大學華西醫院初診的 575 例急性白血病患者，其中男303 例，女 272 例；年齡 12～87 歲，平均（44.03±17.06）歲，中位年齡 49 歲。所有患者均為首次發病未經治療，急性白血病診斷依據臨床表現、形態學、細胞化學染色、細胞免疫分型及遺傳學檢查綜合分析。其中 ALL 148 例，ANLL 427 例[髓系與淋巴系混合白血病 4 例，急性髓系白血病（acute myelocytic leukemia，AML）423 例]。AML 中微分化型（M0）11 例，未分化型（M1）81 例，伴成熟型（M2）142 例，急性早幼粒細胞白血病（M3）47 例，急性粒-單核細胞白血病（M4）87 例，急性單核細胞白血病（M5）43 例，急性紅白血病（M6）4 例，其他確定是髓系白血病但不明確具體分型的共 8 例。
1.2 細胞化學染色
干燥的骨髓片滴加 A 液（快速染液 A，主要成分為曙紅）覆蓋標本，再加 B 液（快速染液 B，主要成分為天青）混勻（A 液∶B 液=1∶1），進行核染色 30～60 s，流水沖洗，甩干；滴加工作液于涂片上，工作液為 1.0 mL C 液（碘化鉀溶液）和 200 μL D 液（WG 溶液，主要成分為瑞姬染料）混合，要求 2 h 內使用，染色 40～60 s 后傾去（不用水洗），濾紙吸干，進行鏡檢。試劑均購自珠海貝索生物技術有限公司。細胞質中有紅棕色至藍黑色顆粒為陽性，其中細胞質為紅棕色為弱陽性；細胞質呈紫黑色或藍黑色顆粒狀，可充滿整個細胞質甚至覆蓋細胞核，為強陽性。陰性反應時細胞質為藍色，無陽性顆粒。細胞核著色均為均勻紫紅色。計數陽性細胞百分數及陽性積分。POX 結果積分方式為：3%≤陽性率<25% 積 1 分，25%≤陽性率<50% 積 2 分，50%≤陽性率≤100% 積 3 分；陽性率<3% 積 0 分。
1.3 流式細胞儀免疫分型
調整待檢標本為 1×106 個細胞/mL 的細胞懸液，標識 2 根試管，分別加入美國 BD 公司熒光標記抗體：多甲藻黃素-葉綠素-蛋白質復合物（peridinin-chlorophyll-protein complex，PerCP）標記的抗 CD45 單克隆抗體（CD45-PerCP）、異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，FITC）標記的抗 CD34 單克隆抗體（CD34-FITC）、別藻青蛋白（allophycocyanin，APC）標記的抗 CD117 單克隆抗體（CD117-APC）及其同型對照各 20 μL，細胞懸液 20 μL，混勻后避光放置 30 min，溶血劑溶血后 300× g 離心 5 min，棄上清液，加入 300 μL 磷酸鹽緩沖液+40 μL 破膜劑（美國 BD 公司），混勻后避光放置 30 min，洗滌離心去上清液，加入細胞質抗體 cMPO-FITC 及其同型對照各 20 μL，混勻后避光孵育 30 min，300× g 離心 5 min，棄上清液，使用美國 BD 公司 FALSCantoII 流式細胞儀檢測。cMPO 結果以熒光強度“high positive”“positive”“dim”為陽性，積分分別為 3、2、1 分；熒光強度“negative”為陰性，積分為 0 分。
1.4 統計學方法
應用 SPSS 20.0 軟件進行統計學分析。計數資料和等級資料采用例數表示，陽性率的比較使用配對 χ2 檢驗，陽性積分比較使用 Wilcoxon 符號秩和檢驗。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 ALL 與 ANLL 中 POX、cMPO 陽性率及陽性積分
ALL 細胞用細胞化學染色檢測 POX 與流式細胞術檢測 cMPO 陽性率和陽性積分差異均有統計學意義（P<0.05），POX 明顯較高。ANLL 細胞 POX、cMPO 陽性率差異有統計學意義（P<0.05），cMPO 陽性率較高；但 POX 陽性積分和 cMPO 陽性積分差異無統計學意義（P>0.05）。見表 1、2。
表1
ALL 與 ANLL 細胞中 POX、cMPO 陽性率比較[例（%）]
表2
ALL 與 ANLL 細胞中 POX、cMPO 陽性積分比較（例）
2.2 不同類型髓系白血病細胞 POX、cMPO 陽性率及陽性積分
M1 的細胞化學染色 POX 陽性率和流式細胞術 cMPO 陽性率差異有統計學意義（P=0.006），cMPO 陽性率明顯高于 POX 陽性率；但細胞化學染色 POX 陽性積分明顯高于流式細胞術 cMPO 陽性積分（P=0.001）。M2、M3、M4、M5 的 POX、cMPO 陽性率及陽性積分差異均無統計學意義（P>0.05）。M0、M6 和其他類型（確定為 AML 但不明確具體分型）的數量較少，未進行分析。見表 3、4。
表3
各亞型 AML 細胞中 POX、cMPO 陽性率比較[例（%）]
表4
各亞型 AML 細胞中 MPO、cMPO 陽性積分比較（例）
3 討論
急性白血病的分型對其預后及治療具有重大意義。MPO 是人類中性粒細胞含量最多的一種蛋白質，MPO 的檢出對白血病分型具有重要意義，MPO 的檢測方法通常有細胞化學染色和流式細胞術 2 種方法，細胞化學染色檢測的是細胞中的 POX（主要為 MPO），流式細胞術檢測的是 cMPO。MPO-463G>A 多態性與白血病的發生風險沒有相關性[6]。POX 染色是輔助判斷急性白血病細胞類型首選的最重要的細胞化學染色，正常情況下，粒細胞系統中中性粒細胞除早期原始粒細胞外，下階段細胞均為陽性反應，嗜酸性粒細胞反應最強，嗜堿性粒細胞為陰性；單核細胞系統中部分呈弱陽性反應，部分可呈陰性反應；淋巴細胞、漿細胞、紅細胞、巨核細胞均為陰性反應，這些特征可以輔助判斷急性白血病細胞類型。但是染色涂片中的細胞結構不如瑞氏染色清楚，在一定程度上干擾了白血病細胞的辨認，所以 POX 陽性率與真值之間存在一定的誤差，同時由于存在雜質的沉淀，會出現假陽性。POX 染色測定 MPO 的敏感性明顯低于流式細胞術對 cMPO 的測定，所以 POX 染色陰性的患者并不等于白血病細胞不存在此酶，需要流式細胞術進行確認。
流式細胞術是采用各種抗血細胞表面分化抗原的單克隆抗體，借助各種熒光染料，通過測定熒光強度可測出血細胞表達的各種抗原的水平，可協助白血病及淋巴瘤的免疫分型。MPO 存在于多種血細胞中，是人類中性粒細胞含量最多的一種蛋白質，流式細胞術通過標記 cMPO 檢測其表達水平。流式細胞術具有自動化程度高、分析速度快、重復性好、敏感度高、特異性強等特點，臨床應用較廣泛。但也有較多的因素可影響流式細胞分析的準確度，其中最重要的就是非線性問題，在樣品中加入內標或生物活細胞可對其準確度進行有效監測。
本次研究中，分別使用細胞化學染色及流式細胞術檢測急性白血病患者白血病細胞中 POX 及 cMPO 的陽性率，并比較兩種方法 POX 陽性細胞積分與 cMPO 陽性細胞積分的差異性。研究顯示，在 ALL 中 POX 陽性率達 8.78%，而流式細胞術檢測 ALL 患者 cMPO 均為陰性，正常情況下，原始淋巴細胞及幼稚淋巴細胞 POX 均呈陰性，但 ALL 患者骨髓中可殘留少許的原始粒細胞出現 POX 陽性，故 FAB 分型[1976 年法國（Franch）、美國（American）和英國（Britain）3 國血細胞形態學專家討論、制訂了關于急性白血病的分型診斷標準，簡稱 FAB 分型]規定 ALL 患者 POX 的陽性率<3%[7]。分析其原因，細胞化學染色是在顯微鏡下直觀觀察細胞質內含物顏色，而流式細胞術檢測中陰陽性設門帶有一定的主觀性，對于陽性率<3% 的 ALL 而言，POX 結果顯示少量的陽性而 cMPO 結果直接報告為陰性。在 ANLL 中 POX 陽性率為 87.12%，cMPO 陽性率為 90.87%，雖然二者陽性率差異有統計學意義，但是陽性積分差異無統計學意義，說明兩種方法在檢測髓系白血病細胞時的陽性程度是沒有差別的。對于 POX 陰性的細胞應結合流式細胞術 cMPO 來進行確認。
本研究中，對于 4 例髓系與淋巴系混合的急性白血病，細胞化學染色未檢測出 POX 陽性，而流式細胞術方法 cMPO 陽性，雖然因病例數較少無法進一步分析，但與相關報道結論一致[5]，顯示流式細胞術對混合表型的急性白血病的分型準確度較高。
M1 的細胞化學染色 POX 陽性率和流式細胞術 cMPO 陽性率差異有統計學意義（P<0.05），cMPO 陽性率明顯高于 POX 陽性率，但細胞化學染色 POX 陽性細胞積分明顯高于流式細胞術 cMPO 陽性積分，可能是一方面由于細胞較原始，POX 形成較少，缺乏下階段粒細胞作為對照，流式細胞術比細胞化學染色敏感性較高。另一方面可以與 POX 染色特異性低于 cMPO，某些雜質存在導致非特異性染色有關。
本研究顯示，各亞型中 M3 的 POX、cMPO 陽性率最高，POX 陽性率為 97.87%，流式細胞術 cMPO 陽性率為 100.00%，但兩種方法的陽性率及陽性細胞積分均無差異。另有研究顯示，M3 的 POX 染色陽性率為 99.7%，流式細胞術測 M3 中 cMPO 陽性率為 96.6%[8]。M3v 形態學上與典型 M3 有很大不同，易與 M2b、M4 或 M5 混淆，需要結合臨床特征、遺傳、免疫表型等進行綜合分析[9]。
M4、M5 的 POX、cMPO 陽性率及陽性細胞積分差異均無統計學意義（P>0.05），近年來，有不少關于 POX 陰性的 M5 的報道，骨髓中原始、幼稚、成熟單核細胞 POX 100% 陰性，但外周血的成熟粒細胞 POX 染色為陽性，可能是單核細胞中 POX 缺乏，但非特異性酯酶已形成所致。
目前已禁止女性技術人員暴露于芳香族烴基包括聯苯胺中，有研究表明，已研究出一種不含芳香族的標準化試劑盒來替代基于派洛寧和 α-萘酚的試劑來測量原始細胞 POX 活性并與基于派洛寧和 α-萘酚的試劑的檢測結果有良好的相關性[10]。有研究分別采用聯苯胺法及碘化鉀-吡啰紅 B 法（potassium iodide-pyronine B，KI-PYB）行 POX 染色，并將檢測結果與流式細胞儀檢測結果比較，分析結果示兩種染色方法差異無統計學意義，且與流式細胞儀檢測結果一致性高[11]。KI-PYB 法 POX 染色技術可消除過氧化氫對染色結果的影響，比常規的基于聯苯胺的方法更好，兩種方法陽性檢出率無明顯差異[3]。溫度可以影響 POX 染色的陽性率，大部分的 POX 染色是在寬的溫度范圍內，在 50℃ 時陽性率最高，在較低的溫度下 POX 染色強度低得多，可能出現假陰性，POX 染色的最佳溫度是 37℃[12]。
流式細胞術對于紅白血病和微小殘留細胞白血病的檢測有更優越的價值[13-14]。與流式細胞術和細胞化學染色檢測 AML 中 MPO 相比，免疫組織化學法標記 MPO 靈敏度更高[15]。但免疫組織化學法由于操作復雜、檢測時間長等，在臨床上并未廣泛應用。流式細胞術檢測對急性白血病分型和亞型診斷有重要意義，可提供客觀而精確的依據，彌補并糾正形態學分型的不足與誤診。
世界衛生組織發布的流式細胞術和組織化學染色檢測 MPO 的閾值分別為 10% 和 3%，有研究表明，調整流式細胞術檢測 MPO 的閾值可以影響其靈敏度和特異度，舍棄 28% 的閾值可提高 97.4% 的靈敏度和 96.1% 的特異度，各個實驗室可根據自身情況進行評估后進行閾值的設定[2, 16]。
綜上所述，細胞化學 POX 染色與流式細胞術檢測 cMPO 的陽性率及陽性細胞積分在急性白血病尤其 AML 中差異不大，前者成本低，儀器依賴性小，操作方便快捷，后者成本較高，需要高成本儀器，對結果分析技術人員要求高，可以根據實際情況和對敏感性的要求選擇適合的試驗方法。最優方案是兩種方法相互補充，以形態學作為基礎，細胞免疫學作為輔助，同時進一步結合臨床表現、遺傳學檢查等因素綜合分析，進行血液系統疾病的診斷。
急性白血病是一種或多種造血干細胞及祖細胞惡變，失去其正常的增殖、分化及成熟的能力，并逐步取代骨髓經血液浸潤至全身組織及器官的一種疾病，分為急性淋巴細胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）和急性非淋巴細胞白血病（acute non-lymphocytic leukemia，ANLL）。急性白血病的準確分型對預后、治療等方面有重要意義[1]。血細胞中的過氧化物酶（peroxidase，POX）主要為髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO），MPO 是人類中性粒細胞含量最多的一種蛋白質，MPO 的檢出對白血病分型具有重要意義。MPO 的檢測方法通常有細胞化學染色和流式細胞術 2 種方法，細胞化學染色檢測的是細胞中的 POX（主要為 MPO），流式細胞術檢測的是細胞質的 MPO（cytoplasm myeloperoxidase，cMPO），兩種方法可以相互補充、相互印證[2]。細胞化學染色鏡檢是最常用的分類方法，其中 POX 染色一直是白血病細胞形態學分類和診斷的重要方法，POX 染色方法有多種，如二氨基聯苯胺法、二鹽酸聯苯胺法等[3]。流式細胞術是最重要的白血病分型方式，尤其是在微小殘留細胞白血病和混合型白血病中，cMPO 是最主要的表面標記抗體[4-5]。本研究旨在通過對急性白血病細胞化學染色檢測 POX 與流式細胞術檢測其 cMPO 的陽性率及陽性積分結果的比較，探討兩種方法檢測 MPO 在白血病分型的差異及互補意義，為白血病分型提供依據。現報告如下。
1 材料與方法
1.1 標本來源
納入 2014 年 1 月—2016 年 5 月在四川大學華西醫院初診的 575 例急性白血病患者，其中男303 例，女 272 例；年齡 12～87 歲，平均（44.03±17.06）歲，中位年齡 49 歲。所有患者均為首次發病未經治療，急性白血病診斷依據臨床表現、形態學、細胞化學染色、細胞免疫分型及遺傳學檢查綜合分析。其中 ALL 148 例，ANLL 427 例[髓系與淋巴系混合白血病 4 例，急性髓系白血病（acute myelocytic leukemia，AML）423 例]。AML 中微分化型（M0）11 例，未分化型（M1）81 例，伴成熟型（M2）142 例，急性早幼粒細胞白血病（M3）47 例，急性粒-單核細胞白血病（M4）87 例，急性單核細胞白血病（M5）43 例，急性紅白血病（M6）4 例，其他確定是髓系白血病但不明確具體分型的共 8 例。
1.2 細胞化學染色
干燥的骨髓片滴加 A 液（快速染液 A，主要成分為曙紅）覆蓋標本，再加 B 液（快速染液 B，主要成分為天青）混勻（A 液∶B 液=1∶1），進行核染色 30～60 s，流水沖洗，甩干；滴加工作液于涂片上，工作液為 1.0 mL C 液（碘化鉀溶液）和 200 μL D 液（WG 溶液，主要成分為瑞姬染料）混合，要求 2 h 內使用，染色 40～60 s 后傾去（不用水洗），濾紙吸干，進行鏡檢。試劑均購自珠海貝索生物技術有限公司。細胞質中有紅棕色至藍黑色顆粒為陽性，其中細胞質為紅棕色為弱陽性；細胞質呈紫黑色或藍黑色顆粒狀，可充滿整個細胞質甚至覆蓋細胞核，為強陽性。陰性反應時細胞質為藍色，無陽性顆粒。細胞核著色均為均勻紫紅色。計數陽性細胞百分數及陽性積分。POX 結果積分方式為：3%≤陽性率<25% 積 1 分，25%≤陽性率<50% 積 2 分，50%≤陽性率≤100% 積 3 分；陽性率<3% 積 0 分。
1.3 流式細胞儀免疫分型
調整待檢標本為 1×106 個細胞/mL 的細胞懸液，標識 2 根試管，分別加入美國 BD 公司熒光標記抗體：多甲藻黃素-葉綠素-蛋白質復合物（peridinin-chlorophyll-protein complex，PerCP）標記的抗 CD45 單克隆抗體（CD45-PerCP）、異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，FITC）標記的抗 CD34 單克隆抗體（CD34-FITC）、別藻青蛋白（allophycocyanin，APC）標記的抗 CD117 單克隆抗體（CD117-APC）及其同型對照各 20 μL，細胞懸液 20 μL，混勻后避光放置 30 min，溶血劑溶血后 300× g 離心 5 min，棄上清液，加入 300 μL 磷酸鹽緩沖液+40 μL 破膜劑（美國 BD 公司），混勻后避光放置 30 min，洗滌離心去上清液，加入細胞質抗體 cMPO-FITC 及其同型對照各 20 μL，混勻后避光孵育 30 min，300× g 離心 5 min，棄上清液，使用美國 BD 公司 FALSCantoII 流式細胞儀檢測。cMPO 結果以熒光強度“high positive”“positive”“dim”為陽性，積分分別為 3、2、1 分；熒光強度“negative”為陰性，積分為 0 分。
1.4 統計學方法
應用 SPSS 20.0 軟件進行統計學分析。計數資料和等級資料采用例數表示，陽性率的比較使用配對 χ2 檢驗，陽性積分比較使用 Wilcoxon 符號秩和檢驗。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 ALL 與 ANLL 中 POX、cMPO 陽性率及陽性積分
ALL 細胞用細胞化學染色檢測 POX 與流式細胞術檢測 cMPO 陽性率和陽性積分差異均有統計學意義（P<0.05），POX 明顯較高。ANLL 細胞 POX、cMPO 陽性率差異有統計學意義（P<0.05），cMPO 陽性率較高；但 POX 陽性積分和 cMPO 陽性積分差異無統計學意義（P>0.05）。見表 1、2。
表1
ALL 與 ANLL 細胞中 POX、cMPO 陽性率比較[例（%）]
表2
ALL 與 ANLL 細胞中 POX、cMPO 陽性積分比較（例）
2.2 不同類型髓系白血病細胞 POX、cMPO 陽性率及陽性積分
M1 的細胞化學染色 POX 陽性率和流式細胞術 cMPO 陽性率差異有統計學意義（P=0.006），cMPO 陽性率明顯高于 POX 陽性率；但細胞化學染色 POX 陽性積分明顯高于流式細胞術 cMPO 陽性積分（P=0.001）。M2、M3、M4、M5 的 POX、cMPO 陽性率及陽性積分差異均無統計學意義（P>0.05）。M0、M6 和其他類型（確定為 AML 但不明確具體分型）的數量較少，未進行分析。見表 3、4。
表3
各亞型 AML 細胞中 POX、cMPO 陽性率比較[例（%）]
表4
各亞型 AML 細胞中 MPO、cMPO 陽性積分比較（例）
3 討論
急性白血病的分型對其預后及治療具有重大意義。MPO 是人類中性粒細胞含量最多的一種蛋白質，MPO 的檢出對白血病分型具有重要意義，MPO 的檢測方法通常有細胞化學染色和流式細胞術 2 種方法，細胞化學染色檢測的是細胞中的 POX（主要為 MPO），流式細胞術檢測的是 cMPO。MPO-463G>A 多態性與白血病的發生風險沒有相關性[6]。POX 染色是輔助判斷急性白血病細胞類型首選的最重要的細胞化學染色，正常情況下，粒細胞系統中中性粒細胞除早期原始粒細胞外，下階段細胞均為陽性反應，嗜酸性粒細胞反應最強，嗜堿性粒細胞為陰性；單核細胞系統中部分呈弱陽性反應，部分可呈陰性反應；淋巴細胞、漿細胞、紅細胞、巨核細胞均為陰性反應，這些特征可以輔助判斷急性白血病細胞類型。但是染色涂片中的細胞結構不如瑞氏染色清楚，在一定程度上干擾了白血病細胞的辨認，所以 POX 陽性率與真值之間存在一定的誤差，同時由于存在雜質的沉淀，會出現假陽性。POX 染色測定 MPO 的敏感性明顯低于流式細胞術對 cMPO 的測定，所以 POX 染色陰性的患者并不等于白血病細胞不存在此酶，需要流式細胞術進行確認。
流式細胞術是采用各種抗血細胞表面分化抗原的單克隆抗體，借助各種熒光染料，通過測定熒光強度可測出血細胞表達的各種抗原的水平，可協助白血病及淋巴瘤的免疫分型。MPO 存在于多種血細胞中，是人類中性粒細胞含量最多的一種蛋白質，流式細胞術通過標記 cMPO 檢測其表達水平。流式細胞術具有自動化程度高、分析速度快、重復性好、敏感度高、特異性強等特點，臨床應用較廣泛。但也有較多的因素可影響流式細胞分析的準確度，其中最重要的就是非線性問題，在樣品中加入內標或生物活細胞可對其準確度進行有效監測。
本次研究中，分別使用細胞化學染色及流式細胞術檢測急性白血病患者白血病細胞中 POX 及 cMPO 的陽性率，并比較兩種方法 POX 陽性細胞積分與 cMPO 陽性細胞積分的差異性。研究顯示，在 ALL 中 POX 陽性率達 8.78%，而流式細胞術檢測 ALL 患者 cMPO 均為陰性，正常情況下，原始淋巴細胞及幼稚淋巴細胞 POX 均呈陰性，但 ALL 患者骨髓中可殘留少許的原始粒細胞出現 POX 陽性，故 FAB 分型[1976 年法國（Franch）、美國（American）和英國（Britain）3 國血細胞形態學專家討論、制訂了關于急性白血病的分型診斷標準，簡稱 FAB 分型]規定 ALL 患者 POX 的陽性率<3%[7]。分析其原因，細胞化學染色是在顯微鏡下直觀觀察細胞質內含物顏色，而流式細胞術檢測中陰陽性設門帶有一定的主觀性，對于陽性率<3% 的 ALL 而言，POX 結果顯示少量的陽性而 cMPO 結果直接報告為陰性。在 ANLL 中 POX 陽性率為 87.12%，cMPO 陽性率為 90.87%，雖然二者陽性率差異有統計學意義，但是陽性積分差異無統計學意義，說明兩種方法在檢測髓系白血病細胞時的陽性程度是沒有差別的。對于 POX 陰性的細胞應結合流式細胞術 cMPO 來進行確認。
本研究中，對于 4 例髓系與淋巴系混合的急性白血病，細胞化學染色未檢測出 POX 陽性，而流式細胞術方法 cMPO 陽性，雖然因病例數較少無法進一步分析，但與相關報道結論一致[5]，顯示流式細胞術對混合表型的急性白血病的分型準確度較高。
M1 的細胞化學染色 POX 陽性率和流式細胞術 cMPO 陽性率差異有統計學意義（P<0.05），cMPO 陽性率明顯高于 POX 陽性率，但細胞化學染色 POX 陽性細胞積分明顯高于流式細胞術 cMPO 陽性積分，可能是一方面由于細胞較原始，POX 形成較少，缺乏下階段粒細胞作為對照，流式細胞術比細胞化學染色敏感性較高。另一方面可以與 POX 染色特異性低于 cMPO，某些雜質存在導致非特異性染色有關。
本研究顯示，各亞型中 M3 的 POX、cMPO 陽性率最高，POX 陽性率為 97.87%，流式細胞術 cMPO 陽性率為 100.00%，但兩種方法的陽性率及陽性細胞積分均無差異。另有研究顯示，M3 的 POX 染色陽性率為 99.7%，流式細胞術測 M3 中 cMPO 陽性率為 96.6%[8]。M3v 形態學上與典型 M3 有很大不同，易與 M2b、M4 或 M5 混淆，需要結合臨床特征、遺傳、免疫表型等進行綜合分析[9]。
M4、M5 的 POX、cMPO 陽性率及陽性細胞積分差異均無統計學意義（P>0.05），近年來，有不少關于 POX 陰性的 M5 的報道，骨髓中原始、幼稚、成熟單核細胞 POX 100% 陰性，但外周血的成熟粒細胞 POX 染色為陽性，可能是單核細胞中 POX 缺乏，但非特異性酯酶已形成所致。
目前已禁止女性技術人員暴露于芳香族烴基包括聯苯胺中，有研究表明，已研究出一種不含芳香族的標準化試劑盒來替代基于派洛寧和 α-萘酚的試劑來測量原始細胞 POX 活性并與基于派洛寧和 α-萘酚的試劑的檢測結果有良好的相關性[10]。有研究分別采用聯苯胺法及碘化鉀-吡啰紅 B 法（potassium iodide-pyronine B，KI-PYB）行 POX 染色，并將檢測結果與流式細胞儀檢測結果比較，分析結果示兩種染色方法差異無統計學意義，且與流式細胞儀檢測結果一致性高[11]。KI-PYB 法 POX 染色技術可消除過氧化氫對染色結果的影響，比常規的基于聯苯胺的方法更好，兩種方法陽性檢出率無明顯差異[3]。溫度可以影響 POX 染色的陽性率，大部分的 POX 染色是在寬的溫度范圍內，在 50℃ 時陽性率最高，在較低的溫度下 POX 染色強度低得多，可能出現假陰性，POX 染色的最佳溫度是 37℃[12]。
流式細胞術對于紅白血病和微小殘留細胞白血病的檢測有更優越的價值[13-14]。與流式細胞術和細胞化學染色檢測 AML 中 MPO 相比，免疫組織化學法標記 MPO 靈敏度更高[15]。但免疫組織化學法由于操作復雜、檢測時間長等，在臨床上并未廣泛應用。流式細胞術檢測對急性白血病分型和亞型診斷有重要意義，可提供客觀而精確的依據，彌補并糾正形態學分型的不足與誤診。
世界衛生組織發布的流式細胞術和組織化學染色檢測 MPO 的閾值分別為 10% 和 3%，有研究表明，調整流式細胞術檢測 MPO 的閾值可以影響其靈敏度和特異度，舍棄 28% 的閾值可提高 97.4% 的靈敏度和 96.1% 的特異度，各個實驗室可根據自身情況進行評估后進行閾值的設定[2, 16]。
綜上所述，細胞化學 POX 染色與流式細胞術檢測 cMPO 的陽性率及陽性細胞積分在急性白血病尤其 AML 中差異不大，前者成本低，儀器依賴性小，操作方便快捷，后者成本較高，需要高成本儀器，對結果分析技術人員要求高，可以根據實際情況和對敏感性的要求選擇適合的試驗方法。最優方案是兩種方法相互補充，以形態學作為基礎，細胞免疫學作為輔助，同時進一步結合臨床表現、遺傳學檢查等因素綜合分析，進行血液系統疾病的診斷。
