引用本文： 陳其霞, 羅嵐, 王婷婷, 安靜娜, 李冬冬, 陶傳敏. 國產風疹病毒免疫球蛋白M抗體檢測試劑與進口試劑的性能比較. 華西醫學, 2017, 32(1): 67-69. doi: 10.7507/1002-0179.201507164 復制
風疹病毒（rubella virus，RV）是單鏈的 RNA 病毒，屬于披膜病毒科。風疹是由 RV 引起的一種病毒性傳染病，臨床癥狀通常較輕，包括發熱、皮疹、鼻炎、結膜炎，常伴有淋巴結腫大。但孕婦在妊娠前 3 個月感染 RV，RV 很有可能通過胎盤感染胎兒，導致早產、流產、死產或先天性風疹綜合征（congenital rubella syndrome，CRS）[1]。有研究顯示，不良妊娠的發生率與孕婦宮內風疹病毒感染有顯著關系[2]。故孕婦早期常規篩查，根據篩查診斷結果進行有針對性的處理可以有效阻斷母嬰傳播，保護胎兒并可預防或減少后遺癥發生。所以，準確快速的 RV 免疫球蛋白 M（immunoglobulin M，IgM）抗體檢測技術對判斷 RV 感染十分重要。最近，某國產試劑公司采用化學發光法的原理研制出了一種 RV IgM 抗體測定試劑盒。化學發光法靈敏度和特異度均較高，且操作簡便快速，可隨時添加檢測，越來越多地在臨床中應用。本研究對選取的 356 例樣本同時用該國產 RV IgM 試劑盒和意大利索靈公司的 RV IgM 檢測試劑盒進行測定，并對檢測結果進行分析比較，評價該國產 RV IgM 抗體化學發光檢測試劑盒的診斷效能，以確定其與國際醫學界普遍使用和認可的意大利索靈公司 RV IgM 抗體化學發光檢測試劑盒是否等效。現報告如下。
1 材料與方法
1.1 標本來源
來源于 2014 年 1 月—3 月四川大學華西醫院檢測 RV IgM 抗體的臨床樣本 356 例。納入標準：臨床婦產科、皮膚科、感染科等送檢驗科檢測 RV IgM 抗體的隨機樣本；以育齡婦女為主，也包括疑似感染癥狀/體征、相似癥狀的其他人群。排除標準：提取超過 30 h 的血液樣本、嚴重溶血、有凝塊或長菌的樣本。考慮到不同人群的差異，樣本要盡量覆蓋各類適用人群，故 RV IgM 抗體陽性樣本例數不少于 30 例，總數不少于 300 例；以育齡婦女及孕婦的樣本為主，也要有少數具有感染癥狀/體征，或相似癥狀的患者樣本。
1.2 儀器與試劑
1.2.1 評價試劑 國產 RV IgM 抗體化學發光檢測試劑盒（四川邁克生物科技股份有限公司，批號 0613011）及配套校準品和質控品。結果判斷：S/CO<0.9為陰性；S/CO≥1.1為陽性；0.9≤S/CO<1.1為可疑（灰區）。
1.2.2 比對試劑 意大利索靈公司的 RV IgM 抗體化學發光檢測試劑盒（批號 037094X，）及配套校準品和質控品。測定原理為化學發光法。結果判斷：樣本 IgM 濃度<20 AU/mL 為陰性；樣本 IgM 濃度>25 AU/mL 為陽性；樣本濃度在 20～25 AU/mL 之間為可疑。
1.2.3 第三方驗證試劑 Trinity Biotech Plc 的 RV IgM 抗體檢測試劑盒（批號 051）。測定原理為酶聯免疫吸附測定法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）。按試劑說明書操作，IgM 結果判斷：免疫狀態指數（immune status index，ISR）≤0.90為陰性；ISR≥1.10為陽性；ISR 在 0.91～1.09 之間為可疑。
1.2.4 檢測儀器 評價試劑檢測采用全自動化學發光免疫測定儀 IS1200（四川邁克生物科技股份有限公司），比對試劑檢測采用意大利索靈公司生產的全自動化學發光免疫測定儀 Liaison。第三方驗證試劑測定采用美國 THERMO MK3 酶標儀。
1.3 操作流程
對 356 例樣本編號后，將每個樣本分為 2 份（來自同一份樣本的編號相同）。比對系統和評價系統試驗操作人員取同編號的樣本各 1 份，按各自的試劑說明書測定，分別記錄結果。匯總后比較分析 2 種試劑盒測定結果，若有結果不一致的樣本使用第三方試劑進行第三方驗證。
1.4 統計學方法
采用 MedCalc Version 11.4.2.0 統計軟件進行數據處理和統計分析。定性分析：比較評價試劑與比對試劑的符合率。并采用 Kappa 分析，比較評價試劑和比對試劑的一致性。Kappa 檢驗分析標準，根據邊緣概率的計算，Kappa 值的范圍值應在–1～1 之間。Kappa≥0.8 為兩者具有高度一致性；0.8>Kappa≥0.4 為兩者具有中度一致性；Kappa<0.4 為兩者不一致。比較評價試劑與比對試劑的受試者工作特征（receiver operator characteristic，ROC）曲線下面積，檢測其檢驗效能。
2 結果
2.1 評價試劑和比對試劑 RV IgM 檢測結果比較
評價試劑和比對試劑同時檢測了 356 例 RV IgM 樣本，312 例為陰性，38 例為陽性，6 例測定結果不符（評價試劑均為陽性，比對試劑均為陰性），見表 1。Kappa 系數為 0.917（P<0.05），顯示評價試劑和比對試劑一致性程度極高。陽性符合率為 100.00% [95%CI（90.82%，100.00%）]，陰性符合率為 98.11% [95%CI（95.95%，99.13%）]，總符合率為 98.31% [95%CI（87.59%，100.00%）]。
表1
評價試劑和比對試劑的 RV IgM 檢測結果比較（例）
2.2 不符樣本的第三方驗證
采用第三方試劑對測定結果不符的 6 例樣本進行測定，評價試劑檢測均為陽性，第三方試劑檢測均為陰性。將比對測定結果進行驗證后的結果比較，見表 2。評價試劑盒的靈敏度為 100.00% [95%CI（90.82%，100.00%）]，特異度為 98.11% [95%CI（95.95%，99.13%）]，陽性預測值為 86.36% [95%CI（72.65%，94.83%）]，陰性預測值為 100.00% [95%CI（98.82%，100.00%）]。
表2
IgM 經第三方驗證后的統計結果（例）
2.3 評價試劑和比對試劑 RV IgM 的 ROC 曲線比較
評價試劑和比對試劑的 ROC 曲線下面積分別為 0.991 和 1.000（圖 1）。2 種試劑的診斷性能（準確性）比較差異無統計學意義（P = 0.055）。
圖1
評價試劑和比對試劑 RV IgM 的 ROC 曲線
3 討論
有研究顯示，我國 RV 易感率較高，為 12.63%，而其易感率在 35～39 歲年齡組最高，為 22.53%[3]，同時也有報道稱，10～19 歲年齡組發病率最高[4]。孕婦感染 RV 后，病毒通過胎盤感染胎兒，導致死產、流產或出生后嬰兒先天性疾病[5]，嚴重感染可導致 CRS，妊娠 4～6 周時感染 CRS 的發生率為 100%，7～12 周為 80%，13～16 周為 45%～50%，17～20 周為 6%，20 周后則為 0[6]。由于 RV 的臨床癥狀缺乏特異性，與其他病毒感染或過敏性反應引起的皮疹類似，故 CRS 的診斷主要依靠臨床表現結合實驗室檢查[7]。根據世界衛生組織推薦 CRS 檢測病例定義[8]，血液檢測 RV IgM 抗體陽性具有實驗室診斷價值。RV IgM 抗體一般在感染后 2 周血清中出現，在皮疹出現后 2 周達高峰，持續時間短暫，孕婦若合并宮內感染，血清中可持續檢測到 RV IgM 抗體。RV IgM 抗體檢測方法較多，目前國內常用的是 ELISA，但其試劑品牌較多，不同品牌之間試劑檢測結果差異較大[9-10]，且缺乏統一的標準，需要標準化。而化學發光免疫分析具有較高的靈敏度和特異度，且操作簡便快速，易于標準化操作，所需標本量少等諸多特點，成為目前市場最受歡迎的技術。
該國產試劑盒采用磁粒子化學發光免疫分析法，利用捕獲法原理進行檢測。本研究通過與國際醫學界普遍使用和認可的意大利索靈公司的 RV IgM 抗體化學發光檢測試劑盒比較，得到 2 種方法的陽性符合率為 100.00% [95%CI（90.82%，100.00%）]，陰性符合率為 98.11% [95%CI（95.95%，99.13%）]，總符合率為 98.31% [95%CI（87.59%，100.00%）]。顯示出該國產試劑盒的性能與意大利索靈公司的試劑盒高度一致，符合率高。經第三方試劑驗證后得出，靈敏度為 100.00% [95%CI（90.82%，100.00%）]，特異度為 98.11% [95%CI（95.95%，99.13%）]，陽性預測值為 86.36% [95%CI（72.65%，94.83%）]，陰性預測值為 100.00% [95%CI（98.82%，100.00%）]，靈敏度和特異度均較理想。
綜上所述，該國產 RV IgM 抗體化學發光檢測試劑盒與比對試劑的檢測結果高度一致，IgM 預測陽性的能力略優于比對試劑，但預測陰性的能力稍劣于比對試劑。作為優生優育項目，假陽性能用其他檢驗方法和臨床癥狀體征予以識別，因此對患者的風險要小于假陰性。能夠滿足醫療衛生機構用于 RV 感染診斷或免疫狀態監測的要求。本研究為國內首次評價國產 RV IgM 抗體化學發光法檢測試劑盒的診斷效能，同時該試劑盒相對進口試劑盒，成本更加低廉，能為各醫療機構提供更多的選擇。
風疹病毒（rubella virus，RV）是單鏈的 RNA 病毒，屬于披膜病毒科。風疹是由 RV 引起的一種病毒性傳染病，臨床癥狀通常較輕，包括發熱、皮疹、鼻炎、結膜炎，常伴有淋巴結腫大。但孕婦在妊娠前 3 個月感染 RV，RV 很有可能通過胎盤感染胎兒，導致早產、流產、死產或先天性風疹綜合征（congenital rubella syndrome，CRS）[1]。有研究顯示，不良妊娠的發生率與孕婦宮內風疹病毒感染有顯著關系[2]。故孕婦早期常規篩查，根據篩查診斷結果進行有針對性的處理可以有效阻斷母嬰傳播，保護胎兒并可預防或減少后遺癥發生。所以，準確快速的 RV 免疫球蛋白 M（immunoglobulin M，IgM）抗體檢測技術對判斷 RV 感染十分重要。最近，某國產試劑公司采用化學發光法的原理研制出了一種 RV IgM 抗體測定試劑盒。化學發光法靈敏度和特異度均較高，且操作簡便快速，可隨時添加檢測，越來越多地在臨床中應用。本研究對選取的 356 例樣本同時用該國產 RV IgM 試劑盒和意大利索靈公司的 RV IgM 檢測試劑盒進行測定，并對檢測結果進行分析比較，評價該國產 RV IgM 抗體化學發光檢測試劑盒的診斷效能，以確定其與國際醫學界普遍使用和認可的意大利索靈公司 RV IgM 抗體化學發光檢測試劑盒是否等效。現報告如下。
1 材料與方法
1.1 標本來源
來源于 2014 年 1 月—3 月四川大學華西醫院檢測 RV IgM 抗體的臨床樣本 356 例。納入標準：臨床婦產科、皮膚科、感染科等送檢驗科檢測 RV IgM 抗體的隨機樣本；以育齡婦女為主，也包括疑似感染癥狀/體征、相似癥狀的其他人群。排除標準：提取超過 30 h 的血液樣本、嚴重溶血、有凝塊或長菌的樣本。考慮到不同人群的差異，樣本要盡量覆蓋各類適用人群，故 RV IgM 抗體陽性樣本例數不少于 30 例，總數不少于 300 例；以育齡婦女及孕婦的樣本為主，也要有少數具有感染癥狀/體征，或相似癥狀的患者樣本。
1.2 儀器與試劑
1.2.1 評價試劑 國產 RV IgM 抗體化學發光檢測試劑盒（四川邁克生物科技股份有限公司，批號 0613011）及配套校準品和質控品。結果判斷：S/CO<0.9為陰性；S/CO≥1.1為陽性；0.9≤S/CO<1.1為可疑（灰區）。
1.2.2 比對試劑 意大利索靈公司的 RV IgM 抗體化學發光檢測試劑盒（批號 037094X，）及配套校準品和質控品。測定原理為化學發光法。結果判斷：樣本 IgM 濃度<20 AU/mL 為陰性；樣本 IgM 濃度>25 AU/mL 為陽性；樣本濃度在 20～25 AU/mL 之間為可疑。
1.2.3 第三方驗證試劑 Trinity Biotech Plc 的 RV IgM 抗體檢測試劑盒（批號 051）。測定原理為酶聯免疫吸附測定法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）。按試劑說明書操作，IgM 結果判斷：免疫狀態指數（immune status index，ISR）≤0.90為陰性；ISR≥1.10為陽性；ISR 在 0.91～1.09 之間為可疑。
1.2.4 檢測儀器 評價試劑檢測采用全自動化學發光免疫測定儀 IS1200（四川邁克生物科技股份有限公司），比對試劑檢測采用意大利索靈公司生產的全自動化學發光免疫測定儀 Liaison。第三方驗證試劑測定采用美國 THERMO MK3 酶標儀。
1.3 操作流程
對 356 例樣本編號后，將每個樣本分為 2 份（來自同一份樣本的編號相同）。比對系統和評價系統試驗操作人員取同編號的樣本各 1 份，按各自的試劑說明書測定，分別記錄結果。匯總后比較分析 2 種試劑盒測定結果，若有結果不一致的樣本使用第三方試劑進行第三方驗證。
1.4 統計學方法
采用 MedCalc Version 11.4.2.0 統計軟件進行數據處理和統計分析。定性分析：比較評價試劑與比對試劑的符合率。并采用 Kappa 分析，比較評價試劑和比對試劑的一致性。Kappa 檢驗分析標準，根據邊緣概率的計算，Kappa 值的范圍值應在–1～1 之間。Kappa≥0.8 為兩者具有高度一致性；0.8>Kappa≥0.4 為兩者具有中度一致性；Kappa<0.4 為兩者不一致。比較評價試劑與比對試劑的受試者工作特征（receiver operator characteristic，ROC）曲線下面積，檢測其檢驗效能。
2 結果
2.1 評價試劑和比對試劑 RV IgM 檢測結果比較
評價試劑和比對試劑同時檢測了 356 例 RV IgM 樣本，312 例為陰性，38 例為陽性，6 例測定結果不符（評價試劑均為陽性，比對試劑均為陰性），見表 1。Kappa 系數為 0.917（P<0.05），顯示評價試劑和比對試劑一致性程度極高。陽性符合率為 100.00% [95%CI（90.82%，100.00%）]，陰性符合率為 98.11% [95%CI（95.95%，99.13%）]，總符合率為 98.31% [95%CI（87.59%，100.00%）]。
表1
評價試劑和比對試劑的 RV IgM 檢測結果比較（例）
2.2 不符樣本的第三方驗證
采用第三方試劑對測定結果不符的 6 例樣本進行測定，評價試劑檢測均為陽性，第三方試劑檢測均為陰性。將比對測定結果進行驗證后的結果比較，見表 2。評價試劑盒的靈敏度為 100.00% [95%CI（90.82%，100.00%）]，特異度為 98.11% [95%CI（95.95%，99.13%）]，陽性預測值為 86.36% [95%CI（72.65%，94.83%）]，陰性預測值為 100.00% [95%CI（98.82%，100.00%）]。
表2
IgM 經第三方驗證后的統計結果（例）
2.3 評價試劑和比對試劑 RV IgM 的 ROC 曲線比較
評價試劑和比對試劑的 ROC 曲線下面積分別為 0.991 和 1.000（圖 1）。2 種試劑的診斷性能（準確性）比較差異無統計學意義（P = 0.055）。
圖1
評價試劑和比對試劑 RV IgM 的 ROC 曲線
3 討論
有研究顯示，我國 RV 易感率較高，為 12.63%，而其易感率在 35～39 歲年齡組最高，為 22.53%[3]，同時也有報道稱，10～19 歲年齡組發病率最高[4]。孕婦感染 RV 后，病毒通過胎盤感染胎兒，導致死產、流產或出生后嬰兒先天性疾病[5]，嚴重感染可導致 CRS，妊娠 4～6 周時感染 CRS 的發生率為 100%，7～12 周為 80%，13～16 周為 45%～50%，17～20 周為 6%，20 周后則為 0[6]。由于 RV 的臨床癥狀缺乏特異性，與其他病毒感染或過敏性反應引起的皮疹類似，故 CRS 的診斷主要依靠臨床表現結合實驗室檢查[7]。根據世界衛生組織推薦 CRS 檢測病例定義[8]，血液檢測 RV IgM 抗體陽性具有實驗室診斷價值。RV IgM 抗體一般在感染后 2 周血清中出現，在皮疹出現后 2 周達高峰，持續時間短暫，孕婦若合并宮內感染，血清中可持續檢測到 RV IgM 抗體。RV IgM 抗體檢測方法較多，目前國內常用的是 ELISA，但其試劑品牌較多，不同品牌之間試劑檢測結果差異較大[9-10]，且缺乏統一的標準，需要標準化。而化學發光免疫分析具有較高的靈敏度和特異度，且操作簡便快速，易于標準化操作，所需標本量少等諸多特點，成為目前市場最受歡迎的技術。
該國產試劑盒采用磁粒子化學發光免疫分析法，利用捕獲法原理進行檢測。本研究通過與國際醫學界普遍使用和認可的意大利索靈公司的 RV IgM 抗體化學發光檢測試劑盒比較，得到 2 種方法的陽性符合率為 100.00% [95%CI（90.82%，100.00%）]，陰性符合率為 98.11% [95%CI（95.95%，99.13%）]，總符合率為 98.31% [95%CI（87.59%，100.00%）]。顯示出該國產試劑盒的性能與意大利索靈公司的試劑盒高度一致，符合率高。經第三方試劑驗證后得出，靈敏度為 100.00% [95%CI（90.82%，100.00%）]，特異度為 98.11% [95%CI（95.95%，99.13%）]，陽性預測值為 86.36% [95%CI（72.65%，94.83%）]，陰性預測值為 100.00% [95%CI（98.82%，100.00%）]，靈敏度和特異度均較理想。
綜上所述，該國產 RV IgM 抗體化學發光檢測試劑盒與比對試劑的檢測結果高度一致，IgM 預測陽性的能力略優于比對試劑，但預測陰性的能力稍劣于比對試劑。作為優生優育項目，假陽性能用其他檢驗方法和臨床癥狀體征予以識別，因此對患者的風險要小于假陰性。能夠滿足醫療衛生機構用于 RV 感染診斷或免疫狀態監測的要求。本研究為國內首次評價國產 RV IgM 抗體化學發光法檢測試劑盒的診斷效能，同時該試劑盒相對進口試劑盒，成本更加低廉，能為各醫療機構提供更多的選擇。
