引用本文： 李樹華, 董釧, 王杰. Livin與胱天蛋白酶-3在中耳膽脂瘤中的表達及臨床意義. 華西醫學, 2015, 30(6): 1083-1086. doi: 10.7507/1002-0179.20150311 復制
中耳膽脂瘤是一種常見病，其主要表現為中耳腔存在大量的增殖角化鱗狀上皮和鄰近骨質的破壞、吸收及角化細胞凋亡，導致腔內角化碎屑的堆積，男性患者多于女性患者。細胞凋亡與凋亡抑制在腫瘤的發生、發展中起著重要作用，現已成為當今醫學研究的熱點話題。凋亡抑制蛋白是近年來備受矚目的一類凋亡抑制蛋白家族。其中Livin是最新發現的一種凋亡抑制蛋白，在細胞凋亡中有較強的抑制作用。胱天蛋白酶（Caspase）是一類是天冬氨酸特異性的半胱氨酸蛋白水解酶，其中Caspase-3是該家族成員中最重要的效應型因子，主要作用是引起細胞凋亡。大多數觸發細胞凋亡的因素，最終均需要通Caspase-3介導。查閱大量文獻，目前Livin與Caspase-3在中耳膽脂瘤中的報道在國內外都較少。因此我們設立此課題，旨在探討Livin與Caspase-3在中耳膽脂瘤上皮組織和外耳道正常皮膚組織中的表達情況，分析其臨床意義及相互作用機制，為以后的進一步研究奠定基礎。
1 資料與方法
1.1 一般資料
收集綿陽市中心醫院耳鼻咽喉頭頸外科2013年4月－2014年3月收治的中耳膽脂瘤患者手術標本51例，其中男37例，女14例；年齡10～56歲，平均40歲；病程6個月～20年。全部患者術前經顳骨高分辨CT檢查及術后病理檢查證實為中耳膽脂瘤。采用開放式乳突改良根治手術或完璧式乳突根治手術采集中耳膽脂瘤組織標本和外耳道后壁正常皮膚標本，迅速固定。所有患者均簽署知情同意書。
1.2 主要實驗試劑
兔抗人Livin多克隆抗體（武漢博士德生物工程公司），兔抗人Caspase-3多克隆抗體（武漢博士德生物工程公司）；免疫組織化學染色即用型快速免疫組織化學MaxVisionTM試劑盒（福州邁新生物技術有限公司）；二氨基聯苯胺（DAB）顯色劑（北京中杉金橋生物技術有限公司）。
1.3 免疫組織化學儀器
全自動組織脫水機ZT-12J購自英國；TB-718D2包埋機購自湖南；AS325切片機購自英國；GZX-DH電熱恒溫干燥箱購自上海；光學顯微鏡購自日本；另外有不銹鋼壓力鍋、電磁爐、染色缸、濕盒、微量移液器等。
1.4 主要步驟
采用免疫組織化學鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結法（SP法）。所有標本均經10%甲醛固定24 h，常規石蠟包埋，4 μm連續切片，脫蠟，染色前用微波爐進行抗原修復，磷酸鹽緩沖液沖洗，DAB顯色，蘇木精復染，操作嚴格按照說明書進行。
1.5 結果判斷標準
與1位病理醫師一起獨立觀察每張切片中隨機檢測5個視野（每個視野中觀察的細胞數不少于200個）。免疫組織化學結果判定：免疫組織化學陽性表達均為黃棕色顆粒。參考Fujimura等[1]判斷標準，每例在400倍光學顯微鏡下隨機選擇不重疊的 5個視野，根據腫瘤細胞染色程度按及陽性細胞百分率進行評分，按陽性細胞數所占的百分比，無陽性細胞，計0分；陽性細胞數≤25%，計1分；陽性細胞數25%～50%計2分；陽性細胞數＞50%計3分。再根據染色強度，細胞無顯色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分，以兩項分數相加為總分：0～1分為陰性（?），2～3分為陽性（+），4～6分為強陽性（++）。
1.6 統計學方法
采用SPSS 17.0統計軟件，免疫組織化學所得結果為定性資料，采用χ2檢驗進行組間比較并分析其相關性。雙側檢驗水準α=0.05。
2 結果
Livin蛋白在中耳膽脂瘤上皮細胞主要表達于基底層和基底上層，陽性表達率為66.67%（圖 1）；在正常皮膚組織中由基底層向外至角質層細胞中均有不同程度染色，但較稀疏，陽性表達率為29.41%（圖 2）；兩組比較差異有統計學意義（P＜0.05）。Caspase-3蛋白中耳在膽脂瘤組織中主要分布在顆粒層和棘層，陽性表達率為76.41%（圖 3）；在正常皮膚組織中基底層向外至角質層細胞中均有不同程度染色，但也較稀疏，陽性表達率為21.57%（圖 4）；兩組比較差異有統計學意義（P＜0.05）。見表 1。Livin蛋白與Caspase-3蛋白在膽脂瘤上皮組織中的表達均為陽性31例，均為陰性9例，兩者呈正相關（r=0.49，P＜0.05）。
表1
Livin蛋白和Caspase-3蛋白在膽脂瘤上皮組織和外耳道正常皮膚組織中的表達（n=51）
3 討論
中耳膽脂瘤作為一個獨立的病理類型，在發生學上與化膿性中耳炎的細菌感染之間無直接聯系[2]。膽脂瘤是一種能產生角蛋白的鱗狀上皮在中耳、上鼓室、乳突、巖尖的聚集，可以進一步限定為：獨立生長、代替中耳黏膜、吸收骨質的三圍上皮結構。它不是一種腫瘤，但由于破壞吸收顱底骨質，可侵入顱內，引起嚴重并發癥。中耳膽脂瘤是由于鼓膜、外耳道的復層鱗狀上皮組織經穿孔向中耳腔內生長堆積成團，其外層由纖維組織包圍，內包含脫落壞死上皮、角化物和膽固醇結晶。主要特點是上皮細胞有高度增殖能力，但細胞增殖旺盛的同時，細胞的凋亡也加速。有研究表明，膽脂瘤的病理機制可能是細胞增殖與凋亡失衡的過程，并與多種細胞因子異常表達有關[3]。
近年來國內外學者越來越關注膽脂瘤中耳炎的發生、發展，并做了大量細胞凋亡調控因子與膽脂瘤相關性的研究，把中耳膽脂瘤的病因及發病機制的研究帶到了一個新的領域[4]。Albino等[5]采用特異性的單克隆抗體檢測P53蛋白在膽脂瘤上皮細胞中的表達情況；Kojima等[6]證實B淋巴細胞瘤-2基因家族（Bcl-2）中Bcl-XL蛋白在膽脂瘤上皮組織中具有誘導凋亡的作用，在膽脂瘤上皮組織中呈現高表達狀態；李冬等[7]研究表明凋亡抑制蛋白Bcl-2和Survivin在膽脂瘤上皮組織中呈高表達狀態； Olszewska等[8]在研究成人膽脂瘤凋亡發病機制中發現Ap02.7在膽脂瘤上皮細胞凋亡過程中發揮著重要的作用；關芳靈等[9] 研究X連鎖凋亡抑制蛋白在膽脂瘤中的表達及其與細胞凋亡的關系中發現凋亡抑制蛋白XIAP在中耳膽脂瘤中是低表達或不表達。大量關于細胞調控基因在膽脂瘤上皮組織中的表達情況的相關研究表明，膽脂瘤細胞凋亡過程是多基因相關作用并且共同完成的，而非相互獨立。
Livin蛋白是近年來新發現的一種凋亡抑制蛋白，與Survivin蛋白具有同源性。Lin等[10]在人胎腎互補DNA文庫的分離中最早得到該基因。Livin蛋白抑制凋亡的機制源于其特殊結構域：N端為IAP家族特征性的桿狀病毒IAP重復序列（BIR）結構域；在C端為含有一個RING環指結構的羧基端的環狀指樣結構區域。研究表明：Livin在正常成人的大多數組織中不表達[10]，而在表皮、淋巴結、脾臟等細胞中低表達，在胎兒的腦、胸腺、腎臟和肝等組織中高表達[11]，Livin蛋白在多種腫瘤細胞細胞質中呈高表達，如黑色素瘤、肺癌、胃腸癌、胰腺癌、膀胱癌、前列腺癌等[12]。凋亡抑制蛋白在中耳膽脂瘤的研究越來越受到關注。彭麗等[13]在中耳膽脂瘤上皮中Livin、p73的表達與其發生關系研究，表明Livin在中耳膽脂瘤的異常表達可能在膽脂瘤的發生、發展過程中起相應作用，可能參與膽脂瘤上皮的凋亡調控過程。楊寧等[14]在凋亡抑制蛋白Livin及Survivin在中耳膽脂瘤上皮的表達及意義研究中，發現Livin及Survivin在中耳膽脂瘤中的表達明顯下調，可能與膽脂瘤上皮細胞凋亡有關；伍千元等[15]在進行Survivin及Livin在中耳膽脂瘤組織中的表達及相關性研究中也印證了上述觀點。
Caspase是天冬氨酸特異性的半胱氨酸蛋白水解酶，Caspase家族是直接導致細胞凋亡的蛋白酶系統，其解級聯反應是細胞凋亡的核心機制，是細胞凋亡的中心環節和執行者，在細胞凋亡機制網絡中占重要地位。而Caspase-3是Caspase家族中最重要的效應因子，是細胞凋亡網絡中的主要樞紐，其介導的細胞凋亡在腫瘤發生和發展中起重要作用。國內學者也做了一些相關研究。郝艷等[16]在研究NF-κBP65和Caspase-3在中耳膽脂瘤中的表達中認為Caspase-3可能參與了中耳膽脂瘤上皮細胞的增殖及過度凋亡的調控；潘松林等[17]研究細胞外凋亡途徑與中耳膽脂瘤細胞凋亡，證實Caspase-3在中耳膽脂瘤的發生發展過程中也起著重要作用。Livin主要是通過Caspase途徑和非Caspase途徑發揮抗凋亡作用的（主要是前者）[18]。Livin蛋白可以通過抑制Caspase途徑來發揮抗凋亡的作用，其能夠與激活型的Caspase（主要是Caspase-3和Caspase-7）特異性結合，抑制其酶解級聯反應，從而到達凋亡抑制的目的。
目前關于Livin蛋白與Caspase-3蛋白在中耳膽脂瘤上皮組織中的研究鮮見。本實驗采用SP免疫組織化學方法在蛋白水平上檢測Livin蛋白與Caspase-3蛋白在中耳膽脂瘤上皮組織及正常外耳道上皮組織中的表達情況，探討兩者在中耳膽脂瘤的發生、發展中的相關性，分析其發病機制。本研究結果顯示，Livin蛋白在中耳膽脂瘤上皮細胞主要表達于基底層和基底上層，陽性表達率為66.67%；在正常皮膚組織中由基底層向外至角質層細胞中均有不同程度染色，但較稀疏，陽性表達率為29.41%；兩組比較差異有統計學意義（P＜0.05），與Park等[19]的研究結果一致。Caspase-3在中耳膽脂瘤組織中主要分布在顆粒層和棘層，陽性表達率為76.41%；在正常皮膚組織中基底層向外至角質層細胞中均有不同程度染色，但也較稀疏，陽性表達率為21.57%；兩組比較差異有統計學意義（P＜0.05）。實驗表明：在中耳膽脂瘤上皮組織中也存在明顯的細胞凋亡和抑制細胞凋亡的基因。通過分析，中耳膽脂瘤上皮組織中存在凋亡和抗凋亡作用增強，而在正常上皮組織中細胞凋亡和抗凋亡作用可能處于某種平衡狀態。
本研究結果顯示，Livin和Caspase-3在中耳膽脂瘤上皮組織中的表達呈正相關（r=0.49，P＜0.05）。表明中耳膽脂瘤上皮組織中，抗凋亡作用增強的同時，凋亡作用也增強，且具有明顯的相關性。因此我們可以認為，在正常狀態下，Livin的抗凋亡和Caspase-3的凋亡是相互作用，并且處于相對平衡狀態。而在某種異常情況下，可能導致兩者原有平衡發生紊亂，導致Caspase-3的凋亡作用增強，加之膽脂瘤部分上皮細胞的增殖及細胞凋亡的加速，周而復始，促進了膽脂瘤角蛋白碎渭堆積，使膽脂瘤不斷增大，引發中耳膽脂瘤的發生。
綜上所述，正常的細胞抗凋亡作用和凋亡作用可能處于相對平衡的狀態，而細胞凋亡功能的異常將導致中耳膽脂瘤的發生、發展以及免疫功能的異常。本研究通過檢測Livin蛋白與Caspase-3 蛋白在中耳膽脂瘤上皮組織及正常外耳道上皮組織中的的表達情況以及相關性分析，認為兩者之間原有的平衡被打破，導致凋亡-抗凋亡作用增強，在中耳膽脂瘤的發生、發展中發揮著重要作用。本實驗僅從蛋白水平上分析了兩者在中耳膽脂瘤上皮組織中的表達情況及相關性，以后的工作中我們還應加大樣本含量以及從基因水平上了解其表達情況，進一步分析探討Livin和Caspase-3在中耳膽脂瘤的相互作用機制，為降低中耳膽脂瘤的發病率和開辟新的治療手段提供科學依據。
中耳膽脂瘤是一種常見病，其主要表現為中耳腔存在大量的增殖角化鱗狀上皮和鄰近骨質的破壞、吸收及角化細胞凋亡，導致腔內角化碎屑的堆積，男性患者多于女性患者。細胞凋亡與凋亡抑制在腫瘤的發生、發展中起著重要作用，現已成為當今醫學研究的熱點話題。凋亡抑制蛋白是近年來備受矚目的一類凋亡抑制蛋白家族。其中Livin是最新發現的一種凋亡抑制蛋白，在細胞凋亡中有較強的抑制作用。胱天蛋白酶（Caspase）是一類是天冬氨酸特異性的半胱氨酸蛋白水解酶，其中Caspase-3是該家族成員中最重要的效應型因子，主要作用是引起細胞凋亡。大多數觸發細胞凋亡的因素，最終均需要通Caspase-3介導。查閱大量文獻，目前Livin與Caspase-3在中耳膽脂瘤中的報道在國內外都較少。因此我們設立此課題，旨在探討Livin與Caspase-3在中耳膽脂瘤上皮組織和外耳道正常皮膚組織中的表達情況，分析其臨床意義及相互作用機制，為以后的進一步研究奠定基礎。
1 資料與方法
1.1 一般資料
收集綿陽市中心醫院耳鼻咽喉頭頸外科2013年4月－2014年3月收治的中耳膽脂瘤患者手術標本51例，其中男37例，女14例；年齡10～56歲，平均40歲；病程6個月～20年。全部患者術前經顳骨高分辨CT檢查及術后病理檢查證實為中耳膽脂瘤。采用開放式乳突改良根治手術或完璧式乳突根治手術采集中耳膽脂瘤組織標本和外耳道后壁正常皮膚標本，迅速固定。所有患者均簽署知情同意書。
1.2 主要實驗試劑
兔抗人Livin多克隆抗體（武漢博士德生物工程公司），兔抗人Caspase-3多克隆抗體（武漢博士德生物工程公司）；免疫組織化學染色即用型快速免疫組織化學MaxVisionTM試劑盒（福州邁新生物技術有限公司）；二氨基聯苯胺（DAB）顯色劑（北京中杉金橋生物技術有限公司）。
1.3 免疫組織化學儀器
全自動組織脫水機ZT-12J購自英國；TB-718D2包埋機購自湖南；AS325切片機購自英國；GZX-DH電熱恒溫干燥箱購自上海；光學顯微鏡購自日本；另外有不銹鋼壓力鍋、電磁爐、染色缸、濕盒、微量移液器等。
1.4 主要步驟
采用免疫組織化學鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結法（SP法）。所有標本均經10%甲醛固定24 h，常規石蠟包埋，4 μm連續切片，脫蠟，染色前用微波爐進行抗原修復，磷酸鹽緩沖液沖洗，DAB顯色，蘇木精復染，操作嚴格按照說明書進行。
1.5 結果判斷標準
與1位病理醫師一起獨立觀察每張切片中隨機檢測5個視野（每個視野中觀察的細胞數不少于200個）。免疫組織化學結果判定：免疫組織化學陽性表達均為黃棕色顆粒。參考Fujimura等[1]判斷標準，每例在400倍光學顯微鏡下隨機選擇不重疊的 5個視野，根據腫瘤細胞染色程度按及陽性細胞百分率進行評分，按陽性細胞數所占的百分比，無陽性細胞，計0分；陽性細胞數≤25%，計1分；陽性細胞數25%～50%計2分；陽性細胞數＞50%計3分。再根據染色強度，細胞無顯色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分，以兩項分數相加為總分：0～1分為陰性（?），2～3分為陽性（+），4～6分為強陽性（++）。
1.6 統計學方法
采用SPSS 17.0統計軟件，免疫組織化學所得結果為定性資料，采用χ2檢驗進行組間比較并分析其相關性。雙側檢驗水準α=0.05。
2 結果
Livin蛋白在中耳膽脂瘤上皮細胞主要表達于基底層和基底上層，陽性表達率為66.67%（圖 1）；在正常皮膚組織中由基底層向外至角質層細胞中均有不同程度染色，但較稀疏，陽性表達率為29.41%（圖 2）；兩組比較差異有統計學意義（P＜0.05）。Caspase-3蛋白中耳在膽脂瘤組織中主要分布在顆粒層和棘層，陽性表達率為76.41%（圖 3）；在正常皮膚組織中基底層向外至角質層細胞中均有不同程度染色，但也較稀疏，陽性表達率為21.57%（圖 4）；兩組比較差異有統計學意義（P＜0.05）。見表 1。Livin蛋白與Caspase-3蛋白在膽脂瘤上皮組織中的表達均為陽性31例，均為陰性9例，兩者呈正相關（r=0.49，P＜0.05）。
表1
Livin蛋白和Caspase-3蛋白在膽脂瘤上皮組織和外耳道正常皮膚組織中的表達（n=51）
3 討論
中耳膽脂瘤作為一個獨立的病理類型，在發生學上與化膿性中耳炎的細菌感染之間無直接聯系[2]。膽脂瘤是一種能產生角蛋白的鱗狀上皮在中耳、上鼓室、乳突、巖尖的聚集，可以進一步限定為：獨立生長、代替中耳黏膜、吸收骨質的三圍上皮結構。它不是一種腫瘤，但由于破壞吸收顱底骨質，可侵入顱內，引起嚴重并發癥。中耳膽脂瘤是由于鼓膜、外耳道的復層鱗狀上皮組織經穿孔向中耳腔內生長堆積成團，其外層由纖維組織包圍，內包含脫落壞死上皮、角化物和膽固醇結晶。主要特點是上皮細胞有高度增殖能力，但細胞增殖旺盛的同時，細胞的凋亡也加速。有研究表明，膽脂瘤的病理機制可能是細胞增殖與凋亡失衡的過程，并與多種細胞因子異常表達有關[3]。
近年來國內外學者越來越關注膽脂瘤中耳炎的發生、發展，并做了大量細胞凋亡調控因子與膽脂瘤相關性的研究，把中耳膽脂瘤的病因及發病機制的研究帶到了一個新的領域[4]。Albino等[5]采用特異性的單克隆抗體檢測P53蛋白在膽脂瘤上皮細胞中的表達情況；Kojima等[6]證實B淋巴細胞瘤-2基因家族（Bcl-2）中Bcl-XL蛋白在膽脂瘤上皮組織中具有誘導凋亡的作用，在膽脂瘤上皮組織中呈現高表達狀態；李冬等[7]研究表明凋亡抑制蛋白Bcl-2和Survivin在膽脂瘤上皮組織中呈高表達狀態； Olszewska等[8]在研究成人膽脂瘤凋亡發病機制中發現Ap02.7在膽脂瘤上皮細胞凋亡過程中發揮著重要的作用；關芳靈等[9] 研究X連鎖凋亡抑制蛋白在膽脂瘤中的表達及其與細胞凋亡的關系中發現凋亡抑制蛋白XIAP在中耳膽脂瘤中是低表達或不表達。大量關于細胞調控基因在膽脂瘤上皮組織中的表達情況的相關研究表明，膽脂瘤細胞凋亡過程是多基因相關作用并且共同完成的，而非相互獨立。
Livin蛋白是近年來新發現的一種凋亡抑制蛋白，與Survivin蛋白具有同源性。Lin等[10]在人胎腎互補DNA文庫的分離中最早得到該基因。Livin蛋白抑制凋亡的機制源于其特殊結構域：N端為IAP家族特征性的桿狀病毒IAP重復序列（BIR）結構域；在C端為含有一個RING環指結構的羧基端的環狀指樣結構區域。研究表明：Livin在正常成人的大多數組織中不表達[10]，而在表皮、淋巴結、脾臟等細胞中低表達，在胎兒的腦、胸腺、腎臟和肝等組織中高表達[11]，Livin蛋白在多種腫瘤細胞細胞質中呈高表達，如黑色素瘤、肺癌、胃腸癌、胰腺癌、膀胱癌、前列腺癌等[12]。凋亡抑制蛋白在中耳膽脂瘤的研究越來越受到關注。彭麗等[13]在中耳膽脂瘤上皮中Livin、p73的表達與其發生關系研究，表明Livin在中耳膽脂瘤的異常表達可能在膽脂瘤的發生、發展過程中起相應作用，可能參與膽脂瘤上皮的凋亡調控過程。楊寧等[14]在凋亡抑制蛋白Livin及Survivin在中耳膽脂瘤上皮的表達及意義研究中，發現Livin及Survivin在中耳膽脂瘤中的表達明顯下調，可能與膽脂瘤上皮細胞凋亡有關；伍千元等[15]在進行Survivin及Livin在中耳膽脂瘤組織中的表達及相關性研究中也印證了上述觀點。
Caspase是天冬氨酸特異性的半胱氨酸蛋白水解酶，Caspase家族是直接導致細胞凋亡的蛋白酶系統，其解級聯反應是細胞凋亡的核心機制，是細胞凋亡的中心環節和執行者，在細胞凋亡機制網絡中占重要地位。而Caspase-3是Caspase家族中最重要的效應因子，是細胞凋亡網絡中的主要樞紐，其介導的細胞凋亡在腫瘤發生和發展中起重要作用。國內學者也做了一些相關研究。郝艷等[16]在研究NF-κBP65和Caspase-3在中耳膽脂瘤中的表達中認為Caspase-3可能參與了中耳膽脂瘤上皮細胞的增殖及過度凋亡的調控；潘松林等[17]研究細胞外凋亡途徑與中耳膽脂瘤細胞凋亡，證實Caspase-3在中耳膽脂瘤的發生發展過程中也起著重要作用。Livin主要是通過Caspase途徑和非Caspase途徑發揮抗凋亡作用的（主要是前者）[18]。Livin蛋白可以通過抑制Caspase途徑來發揮抗凋亡的作用，其能夠與激活型的Caspase（主要是Caspase-3和Caspase-7）特異性結合，抑制其酶解級聯反應，從而到達凋亡抑制的目的。
目前關于Livin蛋白與Caspase-3蛋白在中耳膽脂瘤上皮組織中的研究鮮見。本實驗采用SP免疫組織化學方法在蛋白水平上檢測Livin蛋白與Caspase-3蛋白在中耳膽脂瘤上皮組織及正常外耳道上皮組織中的表達情況，探討兩者在中耳膽脂瘤的發生、發展中的相關性，分析其發病機制。本研究結果顯示，Livin蛋白在中耳膽脂瘤上皮細胞主要表達于基底層和基底上層，陽性表達率為66.67%；在正常皮膚組織中由基底層向外至角質層細胞中均有不同程度染色，但較稀疏，陽性表達率為29.41%；兩組比較差異有統計學意義（P＜0.05），與Park等[19]的研究結果一致。Caspase-3在中耳膽脂瘤組織中主要分布在顆粒層和棘層，陽性表達率為76.41%；在正常皮膚組織中基底層向外至角質層細胞中均有不同程度染色，但也較稀疏，陽性表達率為21.57%；兩組比較差異有統計學意義（P＜0.05）。實驗表明：在中耳膽脂瘤上皮組織中也存在明顯的細胞凋亡和抑制細胞凋亡的基因。通過分析，中耳膽脂瘤上皮組織中存在凋亡和抗凋亡作用增強，而在正常上皮組織中細胞凋亡和抗凋亡作用可能處于某種平衡狀態。
本研究結果顯示，Livin和Caspase-3在中耳膽脂瘤上皮組織中的表達呈正相關（r=0.49，P＜0.05）。表明中耳膽脂瘤上皮組織中，抗凋亡作用增強的同時，凋亡作用也增強，且具有明顯的相關性。因此我們可以認為，在正常狀態下，Livin的抗凋亡和Caspase-3的凋亡是相互作用，并且處于相對平衡狀態。而在某種異常情況下，可能導致兩者原有平衡發生紊亂，導致Caspase-3的凋亡作用增強，加之膽脂瘤部分上皮細胞的增殖及細胞凋亡的加速，周而復始，促進了膽脂瘤角蛋白碎渭堆積，使膽脂瘤不斷增大，引發中耳膽脂瘤的發生。
綜上所述，正常的細胞抗凋亡作用和凋亡作用可能處于相對平衡的狀態，而細胞凋亡功能的異常將導致中耳膽脂瘤的發生、發展以及免疫功能的異常。本研究通過檢測Livin蛋白與Caspase-3 蛋白在中耳膽脂瘤上皮組織及正常外耳道上皮組織中的的表達情況以及相關性分析，認為兩者之間原有的平衡被打破，導致凋亡-抗凋亡作用增強，在中耳膽脂瘤的發生、發展中發揮著重要作用。本實驗僅從蛋白水平上分析了兩者在中耳膽脂瘤上皮組織中的表達情況及相關性，以后的工作中我們還應加大樣本含量以及從基因水平上了解其表達情況，進一步分析探討Livin和Caspase-3在中耳膽脂瘤的相互作用機制，為降低中耳膽脂瘤的發病率和開辟新的治療手段提供科學依據。
