引用本文： 戴林桐, 徐德. 白細胞介素-6表達與耳廓假性囊腫發病的關系. 華西醫學, 2014, 29(11): 2107-2109. doi: 10.7507/1002-0179.20140634 復制
耳廓假性囊腫（PCA）是耳鼻喉科常見病，Engel[1]首次報道迄今，經過國內外許多學者眾多研究，其病因仍不能明確。有研究報道該病發生與外傷有關，耳廓軟骨內損傷，從而導致局部炎癥反應[2, 3]。Ming等[4]在研究中發現在囊腫外壁軟骨膜的結締組織中有炎癥反應，主要以淋巴細胞為主的單核細胞浸潤。推測炎癥反應是PCA發病的“扳機點”，炎性細胞釋放細胞因子造成軟骨內變性、壞死，軟骨膜分離形成PCA。本研究對納入標準的68例PCA患者血清及囊液和60例健康人血清分別利用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）測定白細胞介素（IL）-6水平，并選擇10例PCA患者囊壁組織經免疫組織化學二抗-酶標多聚體（Envision）二步法檢測囊壁組織中的IL-6，以探討IL-6表達在PCA發病中所起的作用。
1 資料與方法
1.1 一般資料
68例耳廓假性囊腫患者系本院2010年9月－2013年6月門診患者，其中男56例，年齡23～65歲，平均（42.6 ± 11.0）歲；女12例，年齡28～54歲，平均（39.7 ± 10.3）歲。均為單耳發病（右耳39例，左耳29例），病程2 d～3個月。另選擇60例同期于我院參加體檢的健康人為對照者。其中男49例，年齡31～68歲，平均（41.3 ± 9.1）歲；女11例，年齡35～62歲，平均（40.4 ± 8.0）歲。
1.2 方法
用無菌空針抽取囊液，同時采患者靜脈血3 mL。用ELISA法檢測PCA患者血清、囊液中IL-6水平（檢測試劑盒由欣博盛生物科技有限公司提供，檢測儀器為Bio-Tek酶標儀）。用相同方法檢測60例健康對照者血清中IL-6水平。
選取10例PCA患者采用局部浸潤麻醉，沿囊腫外周做切口，切開皮膚及皮下組織，沿外側軟骨膜表面分離，充分暴露囊腫外壁，切取外側壁軟骨組織。取正常人耳廓軟骨組織10例。囊壁組織中及正常耳廓軟骨組織的IL-6用免疫組織化學Envision二步法檢測，并從每張切片中選取一有代表性區域，用顯微圖像分析系統（Image-Pro Plus）以序列方式連續取20個高倍視野（×400倍）。免疫組織化學陽性標準：陽性細胞為呈棕褐色的陽性反應產物。分別對切片免疫組織化學染色細胞質中的陽性表達進行定量分析，計算每視野陽性染色的吸光度[A，舊稱光密度（OD）]值。
1.3 統計學方法
采用SPSS 19.0軟件整理錄入資料。計量資料以均數±標準差表示，組間比較采用t檢驗。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 ELISA法檢測PCA患者血清、囊液中IL-6水平
以標準品濃度為橫坐標、A值為縱坐標繪制多項回歸曲線，得到標準曲線（圖 1）。根據公式求出各樣本中相對IL-6濃度，取平均值。健康者血清、患者血清、患者囊液IL-6濃度分別為（1.14 ± 0.58）、（1.23 ± 0.54）、（5.29 ± 1.26）pg/mL，患者血清與健康者血清IL-6水平差異無統計學意義（P=0.388），患者囊液與健康者血清IL-6水平差異有統計學意義（P＜0.001），且患者囊液與患者血清IL-6水平差異也有統計學意義（P＜0.001）。
圖1
IL-6 ELISA檢測時的標準曲線 a. 健康者血清樣品 b. 患者血清樣品 c. 患者囊液樣品
2.2 免疫組織化學Envision二步法檢測囊壁組織中的IL-6表達
IL-6在健康者軟骨呈低表達（圖 2），在PCA患者囊腫外壁表達則明顯增多（圖 3）。用顯微圖像分析系統對免疫陽性細胞分析測定計算出健康者耳廓軟骨組織平均A值為（0.172 9 ± 0.032 4），PCA囊壁組織平均A值為（0.312 8 ± 0.041 7），差異有統計學意義（P＜0.01）。
圖2
IL-6在正常軟骨的表達（Envision×400） ? ?圖 3 IL-6在PCA囊壁的表達（Envision×400）
3 討論
PCA是耳科常見疾病，又名耳廓漿液性軟骨膜炎、耳廓非化膿性軟骨膜炎、耳廓軟骨間積液等。發病年齡以30～50歲居多[5]，男性多于女性[6]，多發生于單側耳廓，但也有文獻報道雙耳廓發病的病例[7-9]。
PCA病因不明，可能與外傷、自身免疫反應、炎癥和細胞因子、胚胎發育因素等有關[10-12]。臨床表現為耳廓前外側面上方局限性囊腫樣隆起，內含無菌漿液性滲出物[13]。該病治療方法眾多，但治療最大的并發癥就是易復發[14-16]。本研究初步探討PCA的發病機制，并對臨床治療PCA作出理論指導。
隨著分子生物醫學及檢測技術的快速發展，免疫炎性反應在PCA的發病機制中的作用日益受到人們的重視。細胞因子的研究是當今免疫學和分子生物學研究最為活躍的領域之一。細胞因子是軟骨基質的崩解、吸收、破壞過程中的重要炎性介質。IL-6是細胞因子網絡中一種多功能介素，是體液免疫和細胞免疫的重要調節劑。IL-6基因位于第7號染色體上，屬于糖蛋白。IL的細胞內信號傳導途徑主要有3種：JAK-STAT路徑、RAS-MAPK路徑及磷脂酞肌醇路徑，其中JAK-STAT為細胞因子特有的信號傳導方式。不同的IL受體與相應的IL或其配體結合，通過蛋白酪氨酸激酶JAK的作用使受體自身和胞內底物磷酸化，從而激活STAT家族7個成員中的一個或多個（STAT l～6、DSTAT）。激活的STAT再通過同源二聚體磷酸化轉移到核內，結合到特定的DNA元件上，調控基因的轉錄。IL-6能促進B細胞中免疫球蛋白的分化，刺激T細胞增殖和細胞毒性T細胞分化，從而誘導急性期反應蛋白的產生[17]。
本實驗使用ELISE法測定IL-6在健康者血清、PCA患者血清和囊液中的濃度分別為（1.14 ± 0.58）、（1.23 ± 0.54）和（5.29 ± 1.26）pg/mL。患者血清與健康者血清IL-6水平差異無統計學意義（P=0.388），而患者囊液與健康者血清IL-6水平差異有統計學意義（P＜0.001）。同時采用免疫組織化學方法觀察了IL-6在PCA囊壁組織在耳廓軟骨組織中的表達情況，發現IL-6在PCA囊壁組織中的表達明顯高于健康者耳廓軟骨組織。這一結果與Yamamoto等[18]的研究一致。PCA囊壁組織高表達的IL-6能通過增加膠原酶的釋放而加強軟骨外基質降解，且IL-6與IL-1相互誘生，共同參加細胞因子的網絡作用，IL-6誘導產生IL-1，而IL-1可破壞軟骨并刺激軟骨合成蛋白酶和前列腺素E2，同時IL-1還可誘導產生IL-6。Mohtai等[19]發現IL-1可以誘導正常軟骨細胞表達IL-6 mRNA，IL-6可誘導蛋白質溶酶合成。
綜上所述，我們推斷IL-6的高表達導致PCA患者的局部免疫炎性反應，對PCA的發病起到了一定作用。但目前仍不十分清楚是免疫障礙導致了耳廓軟骨局部損傷，還是先有耳廓軟骨局部損傷后導致IL-6濃度的變化。
耳廓假性囊腫（PCA）是耳鼻喉科常見病，Engel[1]首次報道迄今，經過國內外許多學者眾多研究，其病因仍不能明確。有研究報道該病發生與外傷有關，耳廓軟骨內損傷，從而導致局部炎癥反應[2, 3]。Ming等[4]在研究中發現在囊腫外壁軟骨膜的結締組織中有炎癥反應，主要以淋巴細胞為主的單核細胞浸潤。推測炎癥反應是PCA發病的“扳機點”，炎性細胞釋放細胞因子造成軟骨內變性、壞死，軟骨膜分離形成PCA。本研究對納入標準的68例PCA患者血清及囊液和60例健康人血清分別利用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）測定白細胞介素（IL）-6水平，并選擇10例PCA患者囊壁組織經免疫組織化學二抗-酶標多聚體（Envision）二步法檢測囊壁組織中的IL-6，以探討IL-6表達在PCA發病中所起的作用。
1 資料與方法
1.1 一般資料
68例耳廓假性囊腫患者系本院2010年9月－2013年6月門診患者，其中男56例，年齡23～65歲，平均（42.6 ± 11.0）歲；女12例，年齡28～54歲，平均（39.7 ± 10.3）歲。均為單耳發病（右耳39例，左耳29例），病程2 d～3個月。另選擇60例同期于我院參加體檢的健康人為對照者。其中男49例，年齡31～68歲，平均（41.3 ± 9.1）歲；女11例，年齡35～62歲，平均（40.4 ± 8.0）歲。
1.2 方法
用無菌空針抽取囊液，同時采患者靜脈血3 mL。用ELISA法檢測PCA患者血清、囊液中IL-6水平（檢測試劑盒由欣博盛生物科技有限公司提供，檢測儀器為Bio-Tek酶標儀）。用相同方法檢測60例健康對照者血清中IL-6水平。
選取10例PCA患者采用局部浸潤麻醉，沿囊腫外周做切口，切開皮膚及皮下組織，沿外側軟骨膜表面分離，充分暴露囊腫外壁，切取外側壁軟骨組織。取正常人耳廓軟骨組織10例。囊壁組織中及正常耳廓軟骨組織的IL-6用免疫組織化學Envision二步法檢測，并從每張切片中選取一有代表性區域，用顯微圖像分析系統（Image-Pro Plus）以序列方式連續取20個高倍視野（×400倍）。免疫組織化學陽性標準：陽性細胞為呈棕褐色的陽性反應產物。分別對切片免疫組織化學染色細胞質中的陽性表達進行定量分析，計算每視野陽性染色的吸光度[A，舊稱光密度（OD）]值。
1.3 統計學方法
采用SPSS 19.0軟件整理錄入資料。計量資料以均數±標準差表示，組間比較采用t檢驗。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 ELISA法檢測PCA患者血清、囊液中IL-6水平
以標準品濃度為橫坐標、A值為縱坐標繪制多項回歸曲線，得到標準曲線（圖 1）。根據公式求出各樣本中相對IL-6濃度，取平均值。健康者血清、患者血清、患者囊液IL-6濃度分別為（1.14 ± 0.58）、（1.23 ± 0.54）、（5.29 ± 1.26）pg/mL，患者血清與健康者血清IL-6水平差異無統計學意義（P=0.388），患者囊液與健康者血清IL-6水平差異有統計學意義（P＜0.001），且患者囊液與患者血清IL-6水平差異也有統計學意義（P＜0.001）。
圖1
IL-6 ELISA檢測時的標準曲線 a. 健康者血清樣品 b. 患者血清樣品 c. 患者囊液樣品
2.2 免疫組織化學Envision二步法檢測囊壁組織中的IL-6表達
IL-6在健康者軟骨呈低表達（圖 2），在PCA患者囊腫外壁表達則明顯增多（圖 3）。用顯微圖像分析系統對免疫陽性細胞分析測定計算出健康者耳廓軟骨組織平均A值為（0.172 9 ± 0.032 4），PCA囊壁組織平均A值為（0.312 8 ± 0.041 7），差異有統計學意義（P＜0.01）。
圖2
IL-6在正常軟骨的表達（Envision×400） ? ?圖 3 IL-6在PCA囊壁的表達（Envision×400）
3 討論
PCA是耳科常見疾病，又名耳廓漿液性軟骨膜炎、耳廓非化膿性軟骨膜炎、耳廓軟骨間積液等。發病年齡以30～50歲居多[5]，男性多于女性[6]，多發生于單側耳廓，但也有文獻報道雙耳廓發病的病例[7-9]。
PCA病因不明，可能與外傷、自身免疫反應、炎癥和細胞因子、胚胎發育因素等有關[10-12]。臨床表現為耳廓前外側面上方局限性囊腫樣隆起，內含無菌漿液性滲出物[13]。該病治療方法眾多，但治療最大的并發癥就是易復發[14-16]。本研究初步探討PCA的發病機制，并對臨床治療PCA作出理論指導。
隨著分子生物醫學及檢測技術的快速發展，免疫炎性反應在PCA的發病機制中的作用日益受到人們的重視。細胞因子的研究是當今免疫學和分子生物學研究最為活躍的領域之一。細胞因子是軟骨基質的崩解、吸收、破壞過程中的重要炎性介質。IL-6是細胞因子網絡中一種多功能介素，是體液免疫和細胞免疫的重要調節劑。IL-6基因位于第7號染色體上，屬于糖蛋白。IL的細胞內信號傳導途徑主要有3種：JAK-STAT路徑、RAS-MAPK路徑及磷脂酞肌醇路徑，其中JAK-STAT為細胞因子特有的信號傳導方式。不同的IL受體與相應的IL或其配體結合，通過蛋白酪氨酸激酶JAK的作用使受體自身和胞內底物磷酸化，從而激活STAT家族7個成員中的一個或多個（STAT l～6、DSTAT）。激活的STAT再通過同源二聚體磷酸化轉移到核內，結合到特定的DNA元件上，調控基因的轉錄。IL-6能促進B細胞中免疫球蛋白的分化，刺激T細胞增殖和細胞毒性T細胞分化，從而誘導急性期反應蛋白的產生[17]。
本實驗使用ELISE法測定IL-6在健康者血清、PCA患者血清和囊液中的濃度分別為（1.14 ± 0.58）、（1.23 ± 0.54）和（5.29 ± 1.26）pg/mL。患者血清與健康者血清IL-6水平差異無統計學意義（P=0.388），而患者囊液與健康者血清IL-6水平差異有統計學意義（P＜0.001）。同時采用免疫組織化學方法觀察了IL-6在PCA囊壁組織在耳廓軟骨組織中的表達情況，發現IL-6在PCA囊壁組織中的表達明顯高于健康者耳廓軟骨組織。這一結果與Yamamoto等[18]的研究一致。PCA囊壁組織高表達的IL-6能通過增加膠原酶的釋放而加強軟骨外基質降解，且IL-6與IL-1相互誘生，共同參加細胞因子的網絡作用，IL-6誘導產生IL-1，而IL-1可破壞軟骨并刺激軟骨合成蛋白酶和前列腺素E2，同時IL-1還可誘導產生IL-6。Mohtai等[19]發現IL-1可以誘導正常軟骨細胞表達IL-6 mRNA，IL-6可誘導蛋白質溶酶合成。
綜上所述，我們推斷IL-6的高表達導致PCA患者的局部免疫炎性反應，對PCA的發病起到了一定作用。但目前仍不十分清楚是免疫障礙導致了耳廓軟骨局部損傷，還是先有耳廓軟骨局部損傷后導致IL-6濃度的變化。
