引用本文： 李峻, 柳飛, 孫倩倩, 王雙, 向兵. 羅格列酮對老年糖尿病大鼠認知障礙改善的作用機制研究. 華西醫學, 2014, 29(9): 1642-1646. doi: 10.7507/1002-0179.20140504 復制
老年糖尿病指60歲以后發病或60歲以前發病而延續到60歲以后的糖尿病。認知障礙是老年糖尿病的重要慢性并發癥，病情加重可進展為癡呆，從而降低患者的生活質量，增加患者病死率，其發生機制尚未闡明。既往有研究表明以C反應蛋白（CRP）為代表的炎癥因子引起的炎癥反應損傷與認知障礙有密切關系[1-3]。羅格列酮是一種新型的噻唑烷二酮類胰島素增敏劑，主要通過結合和活化過氧化物酶體增殖物激活的受體γ （PPARγ） 而增強細胞對胰島素作用的敏感性，減輕胰島素抵抗。既往研究顯示，羅格列酮可通過激活PPARγ保護大鼠海馬神經元[4]；應用羅格列酮預防治療后，散發性老年癡呆模型大鼠的認知及學習記憶能力明顯提高，但詳細機制有待進一步研究[5]。本研究旨在觀察糖尿病大鼠血清CRP水平的變化及與認知功能的相關性；羅格列酮干預對其血清CRP水平、認知功能及海馬區域核轉錄因子-κB（NF-κB）、白細胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）表達的影響，進一步探討老年糖尿病認知障礙的發病機制及羅格列酮的預防和治療作用機制。
1 材料與方法
1.1 實驗動物
選用清潔級、雄性20～22月齡老年Wistar大鼠30只，體質量200～250 g，分籠飼養，自由給水。
1.2 試劑和藥物
羅格列酮片（批號：100902，成都恒瑞制藥有限公司）；鏈脲估菌素STZ（美國Sigma公司）；LifeScan血糖儀（美國強生公司，型號：One Touch Ultra Smart TM）；Morris水迷宮及水迷宮記錄分析系統（中國醫學科學院藥物研究所研制）；酶聯免疫吸附法（ELISA） 試劑盒（美國R&D Systems公司）；Trizol（美國Invitrogen公司）；IL-6、TNF-α引物合成以及探針修飾（上海生工生物工程有限公司）；Taq DNA聚合酶鏈式反應（PCR）反應試劑盒（TAKARA大連寶生）； NF-κB/p65一抗（美國Santa Cruz公司）。
1.3 動物模型建立和分組
30只老年Wistar大鼠首先按照體質量進行匹配，體質量相近的5只大鼠為一個配伍組，再將每個配伍組的大鼠按1︰4隨機分配到對照組和模型組，即對照組6只，模型組24只。模型組大鼠以STZ檸檬酸緩沖液55 mg/kg一次性空腹腹腔注射，以自由正常飲食飼養。48～72 h后尾靜脈采血測血糖，連續3次血糖＞16.6 mmol/L為糖尿病成模標準。對照組予以腹腔注射等量生理鹽水。
模型組大鼠糖尿病成模后再隨機分為糖尿病組和羅格列酮組，每組各12只。造模成功1周后，羅格列酮組大鼠每天予羅格列酮無菌水混懸液（4 mg/kg）灌胃，糖尿病組、對照組大鼠均予等量無菌水灌胃，共8周。分別于成模后2、4、8周檢測各組大鼠體質量和血糖。
1.4 檢測指標
1.4.1 Morris水迷宮實驗
Morris水迷宮操作系統，包括直徑150 cm的圓形水池，直徑10 cm、高15 cm的平臺（平臺表面低于水面2 cm），水迷宮記錄分析系統。灌胃8周后，訓練4 d。第5天進行隱藏平臺獲得實驗，分析處理潛伏期，考察學習能力。第6天撤去平臺，進行空間搜索實驗-去除平臺觀察2 min內大鼠在中心區停留時間百分比和通過原平臺位置次數，測試記憶能力。
1.4.2 血清hs-CRP測量
完成Morris水迷宮實驗后，各組鼠右心房采血，常用ELISA法測量血清高敏CRP（hs-CRP）。
1.4.3 蛋白質印跡法
檢測海馬組織NF-κB/p65 冰臺上迅速分離各組大鼠一側的海馬，按2.5 mL/g腦質量加入相當體積的冰生理鹽水，用勻漿器將組織研磨，然后冰浴下超聲波粉碎制成勻漿備用。放射免疫沉淀試驗裂解液提取海馬組織總蛋白，二喹啉甲酸法測定蛋白濃度。將100 μg蛋白加入12%聚丙烯酰胺凝膠，電泳后將蛋白轉至聚偏二氟乙烯膜膜上，5%脫脂奶封閉后加入小鼠抗大鼠磷酸化NF-κB/p65的一抗，4℃孵育過夜。漂洗后加入二抗辣根過氧化物酶標記的羊抗小鼠免疫球蛋白G，1︰2 000稀釋，室溫孵育2 h，電化學發光、顯影和定影，凝膠圖像分析結果。
1.4.4 實時熒光定量PCR（real-time PCR）檢測海馬組織IL-6、TNF-α表達
Trizol提取海馬組織總RNA，取RNA樣品1 μL定量，測量260/280 nm 的吸光度[A，舊稱光密度（OD）]值，以A260nm/A280nm判斷其純度，控制比值為1.9～2.1。Real-time PCR按TAKARA大連寶生公司SYBR? PrimerScriptTMRT-PCR Kit試劑盒說明操作。取1 μg總RNA進行逆轉錄，PCR反應總體系25 μL包括上下游引物各1μL（0.4 μm），SYBR? Premix Ex TaqTMⅡ（2×）12.5 μL，雙蒸水8.5 μL，cDNA標本2 μL。IL-6、TNF-α引物序列、反應條件參照文獻[6]。使用基于內參照GAPDH的相對定量分析，目的基因mRNA表達量用2-ΔΔCT計算轉錄水平差異。
1.5 統計學方法
應用SPSS 11.5軟件進行統計學分析，數據均以均數±標準差表示，組間比較采用單因素方差分析，多重比較采用SNK-q檢驗，P值＜0.05為有統計學意義。
2 結果
2.1 各組大鼠一般情況
造模前，3組大鼠的體質量、血糖水平基本一致（P＞0.05）。造模成功后，糖尿病組以及羅格列酮組血糖水平均高于正常對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。造模成功后8周，糖尿病組及羅格列酮組體質量低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。糖尿病組與羅格列酮組相比，體質量、血糖水平差異無統計學意義（P＞0.05）。見表 1、2。
表1
各組大鼠體質量變化（
表2
各組大鼠血糖變化（2.2 Morris水迷宮測試結果
隱藏平臺獲得實驗中，與對照組比較，糖尿病組逃避潛伏期增加，差異有統計學意義（P＜0.05）。羅格列酮組較糖尿病組逃避潛伏期明顯縮短（P＜0.05），見圖 1a。空間搜索實驗中，與對照組比較，糖尿病組大鼠2 min內中心區停留時間百分比和通過原平臺位置次數明顯下降，差異有統計學意義（P＜0.05）；羅格列酮組的該2項指標較糖尿病組明顯增加，差異有統計學意義（P＜0.05），見圖 1b、1c。
圖1
羅格列酮對老年糖尿病大鼠認知功能的改善作用 *與對照組比較，P＜0.05； *與糖尿病組比較，P＜0.05 1a. 各組大鼠逃避潛伏期 1b. 各組大鼠原平臺象限活動時間 1c. 各組大鼠穿過原平臺位置次數
2.3 各組大鼠血清hs-CRP測定結果
成模后8周，糖尿病組與對照組相比，血清hs-CRP水平升高，差異有統計學意義（P＜0.01）。與糖尿病組相比，羅格列酮組的血清hs-CRP水平降低，差異有統計學意義（P＜0.05）。見圖 2。
圖2
羅格列酮降低老年糖尿病大鼠血清hs-CRP水平 *與對照組比較，P＜0.05；#與糖尿病組比較，P＜0.05
2.4 各組大鼠海馬組織NF-κB信號表達
成模后8周，與對照組相比，糖尿病組的海馬組織NF-κB信號激活（P＜0.01）。而與糖尿病組相比，羅格列酮組NF-κB信號則有所抑制，差異有統計學意義（P＜0.05）。見圖 3。
圖3
羅格列酮對老年糖尿病大鼠海馬組織NF-κB信號的作用 *與對照組比較，P＜0.05；#與糖尿病組比較，P＜0.05 3a. 蛋白質印跡法檢測各組大鼠海馬組織 NF-κB/p65 （p-p65）的表達 3b. 半定量分析各組大鼠海馬組織NF-κB/p65 （p-p65）的表達
2.5 各組大鼠海馬組織IL-6、TNF-α表達
與對照組相比，糖尿病組的海馬組織IL-6、TNF-α表達均升高（P＜0.01）。與糖尿病組相比，羅格列酮組IL-6、TNF-α表達均降低，差異有統計學意義（P＜0.05）。見圖 4。
圖4
羅格列酮對老年糖尿病大鼠海馬組織IL-6、TNF-α表達的作用 *與對照組比較，P＜0.05；#與糖尿病組比較，P＜0.05 4a. 各組大鼠海馬組織IL-6 mRNA的表達 4b. 各組大鼠海馬組織TNF-α mRNA的表達
3 討論
老年糖尿病是老年人最常見的疾病之一。歐美流行病學資料顯示，在所有人群中，糖尿病的患病率都是隨年齡增大而增加[7]。國內的資料也顯示，目前我國糖尿病患者已超過4 000萬，各年齡段中以老年發病率最高，約42.7% [8]。認知障礙是糖尿病的主要并發癥之一。Cukierman等[9]對25個前瞻性研究進行系統評價，結果表明糖尿病患者在隨訪期間比非糖尿病參與者認知障礙增加1.2～1.5倍，并強調老年糖尿病認知障礙風險增加。
目前，糖尿病認知功能障礙發病機制尚未完全闡明。既往研究認為其可能機制包括代謝失調、血管因素、神經生長因子缺乏、細胞存活傳導信息通路障礙、神經細胞凋亡等。近年來炎癥因子導致的炎癥損傷機制在糖尿病認知障礙發病機制中的作用已越來越受到重視。在炎癥因子中，目前研究最多的是CRP。老年糖尿病絕大多數為2 型糖尿病，許多研究顯示2型糖尿病及其并發癥中hs-CRP的水平明顯升高[10, 11]，提示CRP在糖尿病及其并發癥的發病機制中起相應的作用。CRP與認知障礙的關系也有相關報道。Komulaineu等 [12]對97例年齡為60～70歲的老年婦女隨訪12年結果表明：血清hs-CRP濃度越高，隨訪期間老年婦女記憶越差。Lin等[13]對大鼠腦室內注射CRP后證實引起大鼠學習和記憶功能損害，觸發類似阿爾茨海默病（AD）的癡呆。Bi等[14]則在轉基因小鼠和PC12細胞株的研究中證實CRP觸發AD發病 。但既往的研究并未闡明糖尿病狀態下升高的hs-CRP 與認知障礙之間的聯系，其作用機制更未見報道。本研究結果顯示老年糖尿病大鼠成模后血清hs-CRP水平明顯高于正常對照組（P＜0.01）。這與既往的研究結果一致。同時，本研究還應用Morris水迷宮測試老年糖尿病大鼠學習記憶功能變化，并與正常組相比較，發現老年糖尿病大鼠逃避潛伏期延長，中心區停留時間百分比和通過原平臺位置次數明顯下降，提示老年糖尿病大鼠出現認知功能障礙。在分子病理水平，本研究發現老年糖尿病大鼠海馬組織NF-κB信號激活并上調炎癥因子IL-6、TNF-α表達。在糖尿病腎病小鼠模型中，我們以前的研究發現血清hs-CRP水平升高激活腎組織NF-κB信號并上調IL-6、TNF-α表達，導致腎臟損害發生發展[15]。由此，我們推測老年糖尿病大鼠升高的血清hs-CRP水平通過激活海馬組織NF-κB信號，上調IL-6、TNF-α表達，導致認知功能障礙。
既往有研究報道，PPARγ激動劑對腦缺血再灌注損傷有腦保護作用[16]。羅格列酮是噻唑烷二酮類中與PPARγ親和力最強且毒副作用較小的激動劑。上世紀90年代被美國食品藥品監督管理局批準上市治療2型糖尿病。近20年來，不斷發現羅格列酮更多的藥理作用，如抗炎、抗氧化、對心血管及神經系統的保護作用等。Pathan等[17]的研究表明羅格列酮可以減輕高脂飼料喂養引起的大鼠記憶功能下降；Pedersen等[18]觀察了羅格列酮對Tg2576小鼠（一種AD模型小鼠）的作用，表明羅格列酮可以改善Tg2576小鼠的記憶能力。國內研究也顯示羅格列酮改善STZ誘導的糖尿病小鼠認知障礙[19]。本研究結果同樣顯示羅格列酮改善老年糖尿病大鼠認知障礙。另一方面，本研究結果還顯示羅格列酮下調糖尿病大鼠血清hs-CRP水平，這也與國內外研究結果一致[20-22]。在分子病理水平，本研究發現羅格列酮抑制老年糖尿病大鼠海馬組織NF-κB信號激活，下調IL-6、TNF-α表達。基于海馬在認知功能中的重要性，我們推測羅格列酮可能通過下調血清hs-CRP水平，抑制海馬組織NF-κB信號，下調IL-6、TNF-α表達，減輕炎癥因子介導的損傷，從而改善老年糖尿病大鼠的認知障礙。
綜上所述，老年糖尿病腦組織炎癥因子及信號通路激活，是導致認知障礙的重要病理生理機制。羅格列酮干預能改善糖尿病大鼠的認知功能，發揮腦保護作用。推測其機制可能與下調血清CRP水平，抑制海馬組織NF-κB信號激活，降低IL-6、TNF-α表達，減輕炎癥損傷有關。進一步探討羅格列酮改善糖尿病認知障礙的作用機制，有助于糖尿病認知障礙的防治。
老年糖尿病指60歲以后發病或60歲以前發病而延續到60歲以后的糖尿病。認知障礙是老年糖尿病的重要慢性并發癥，病情加重可進展為癡呆，從而降低患者的生活質量，增加患者病死率，其發生機制尚未闡明。既往有研究表明以C反應蛋白（CRP）為代表的炎癥因子引起的炎癥反應損傷與認知障礙有密切關系[1-3]。羅格列酮是一種新型的噻唑烷二酮類胰島素增敏劑，主要通過結合和活化過氧化物酶體增殖物激活的受體γ （PPARγ） 而增強細胞對胰島素作用的敏感性，減輕胰島素抵抗。既往研究顯示，羅格列酮可通過激活PPARγ保護大鼠海馬神經元[4]；應用羅格列酮預防治療后，散發性老年癡呆模型大鼠的認知及學習記憶能力明顯提高，但詳細機制有待進一步研究[5]。本研究旨在觀察糖尿病大鼠血清CRP水平的變化及與認知功能的相關性；羅格列酮干預對其血清CRP水平、認知功能及海馬區域核轉錄因子-κB（NF-κB）、白細胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）表達的影響，進一步探討老年糖尿病認知障礙的發病機制及羅格列酮的預防和治療作用機制。
1 材料與方法
1.1 實驗動物
選用清潔級、雄性20～22月齡老年Wistar大鼠30只，體質量200～250 g，分籠飼養，自由給水。
1.2 試劑和藥物
羅格列酮片（批號：100902，成都恒瑞制藥有限公司）；鏈脲估菌素STZ（美國Sigma公司）；LifeScan血糖儀（美國強生公司，型號：One Touch Ultra Smart TM）；Morris水迷宮及水迷宮記錄分析系統（中國醫學科學院藥物研究所研制）；酶聯免疫吸附法（ELISA） 試劑盒（美國R&D Systems公司）；Trizol（美國Invitrogen公司）；IL-6、TNF-α引物合成以及探針修飾（上海生工生物工程有限公司）；Taq DNA聚合酶鏈式反應（PCR）反應試劑盒（TAKARA大連寶生）； NF-κB/p65一抗（美國Santa Cruz公司）。
1.3 動物模型建立和分組
30只老年Wistar大鼠首先按照體質量進行匹配，體質量相近的5只大鼠為一個配伍組，再將每個配伍組的大鼠按1︰4隨機分配到對照組和模型組，即對照組6只，模型組24只。模型組大鼠以STZ檸檬酸緩沖液55 mg/kg一次性空腹腹腔注射，以自由正常飲食飼養。48～72 h后尾靜脈采血測血糖，連續3次血糖＞16.6 mmol/L為糖尿病成模標準。對照組予以腹腔注射等量生理鹽水。
模型組大鼠糖尿病成模后再隨機分為糖尿病組和羅格列酮組，每組各12只。造模成功1周后，羅格列酮組大鼠每天予羅格列酮無菌水混懸液（4 mg/kg）灌胃，糖尿病組、對照組大鼠均予等量無菌水灌胃，共8周。分別于成模后2、4、8周檢測各組大鼠體質量和血糖。
1.4 檢測指標
1.4.1 Morris水迷宮實驗
Morris水迷宮操作系統，包括直徑150 cm的圓形水池，直徑10 cm、高15 cm的平臺（平臺表面低于水面2 cm），水迷宮記錄分析系統。灌胃8周后，訓練4 d。第5天進行隱藏平臺獲得實驗，分析處理潛伏期，考察學習能力。第6天撤去平臺，進行空間搜索實驗-去除平臺觀察2 min內大鼠在中心區停留時間百分比和通過原平臺位置次數，測試記憶能力。
1.4.2 血清hs-CRP測量
完成Morris水迷宮實驗后，各組鼠右心房采血，常用ELISA法測量血清高敏CRP（hs-CRP）。
1.4.3 蛋白質印跡法
檢測海馬組織NF-κB/p65 冰臺上迅速分離各組大鼠一側的海馬，按2.5 mL/g腦質量加入相當體積的冰生理鹽水，用勻漿器將組織研磨，然后冰浴下超聲波粉碎制成勻漿備用。放射免疫沉淀試驗裂解液提取海馬組織總蛋白，二喹啉甲酸法測定蛋白濃度。將100 μg蛋白加入12%聚丙烯酰胺凝膠，電泳后將蛋白轉至聚偏二氟乙烯膜膜上，5%脫脂奶封閉后加入小鼠抗大鼠磷酸化NF-κB/p65的一抗，4℃孵育過夜。漂洗后加入二抗辣根過氧化物酶標記的羊抗小鼠免疫球蛋白G，1︰2 000稀釋，室溫孵育2 h，電化學發光、顯影和定影，凝膠圖像分析結果。
1.4.4 實時熒光定量PCR（real-time PCR）檢測海馬組織IL-6、TNF-α表達
Trizol提取海馬組織總RNA，取RNA樣品1 μL定量，測量260/280 nm 的吸光度[A，舊稱光密度（OD）]值，以A260nm/A280nm判斷其純度，控制比值為1.9～2.1。Real-time PCR按TAKARA大連寶生公司SYBR? PrimerScriptTMRT-PCR Kit試劑盒說明操作。取1 μg總RNA進行逆轉錄，PCR反應總體系25 μL包括上下游引物各1μL（0.4 μm），SYBR? Premix Ex TaqTMⅡ（2×）12.5 μL，雙蒸水8.5 μL，cDNA標本2 μL。IL-6、TNF-α引物序列、反應條件參照文獻[6]。使用基于內參照GAPDH的相對定量分析，目的基因mRNA表達量用2-ΔΔCT計算轉錄水平差異。
1.5 統計學方法
應用SPSS 11.5軟件進行統計學分析，數據均以均數±標準差表示，組間比較采用單因素方差分析，多重比較采用SNK-q檢驗，P值＜0.05為有統計學意義。
2 結果
2.1 各組大鼠一般情況
造模前，3組大鼠的體質量、血糖水平基本一致（P＞0.05）。造模成功后，糖尿病組以及羅格列酮組血糖水平均高于正常對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。造模成功后8周，糖尿病組及羅格列酮組體質量低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。糖尿病組與羅格列酮組相比，體質量、血糖水平差異無統計學意義（P＞0.05）。見表 1、2。
表1
各組大鼠體質量變化（
表2
各組大鼠血糖變化（2.2 Morris水迷宮測試結果
隱藏平臺獲得實驗中，與對照組比較，糖尿病組逃避潛伏期增加，差異有統計學意義（P＜0.05）。羅格列酮組較糖尿病組逃避潛伏期明顯縮短（P＜0.05），見圖 1a。空間搜索實驗中，與對照組比較，糖尿病組大鼠2 min內中心區停留時間百分比和通過原平臺位置次數明顯下降，差異有統計學意義（P＜0.05）；羅格列酮組的該2項指標較糖尿病組明顯增加，差異有統計學意義（P＜0.05），見圖 1b、1c。
圖1
羅格列酮對老年糖尿病大鼠認知功能的改善作用 *與對照組比較，P＜0.05； *與糖尿病組比較，P＜0.05 1a. 各組大鼠逃避潛伏期 1b. 各組大鼠原平臺象限活動時間 1c. 各組大鼠穿過原平臺位置次數
2.3 各組大鼠血清hs-CRP測定結果
成模后8周，糖尿病組與對照組相比，血清hs-CRP水平升高，差異有統計學意義（P＜0.01）。與糖尿病組相比，羅格列酮組的血清hs-CRP水平降低，差異有統計學意義（P＜0.05）。見圖 2。
圖2
羅格列酮降低老年糖尿病大鼠血清hs-CRP水平 *與對照組比較，P＜0.05；#與糖尿病組比較，P＜0.05
2.4 各組大鼠海馬組織NF-κB信號表達
成模后8周，與對照組相比，糖尿病組的海馬組織NF-κB信號激活（P＜0.01）。而與糖尿病組相比，羅格列酮組NF-κB信號則有所抑制，差異有統計學意義（P＜0.05）。見圖 3。
圖3
羅格列酮對老年糖尿病大鼠海馬組織NF-κB信號的作用 *與對照組比較，P＜0.05；#與糖尿病組比較，P＜0.05 3a. 蛋白質印跡法檢測各組大鼠海馬組織 NF-κB/p65 （p-p65）的表達 3b. 半定量分析各組大鼠海馬組織NF-κB/p65 （p-p65）的表達
2.5 各組大鼠海馬組織IL-6、TNF-α表達
與對照組相比，糖尿病組的海馬組織IL-6、TNF-α表達均升高（P＜0.01）。與糖尿病組相比，羅格列酮組IL-6、TNF-α表達均降低，差異有統計學意義（P＜0.05）。見圖 4。
圖4
羅格列酮對老年糖尿病大鼠海馬組織IL-6、TNF-α表達的作用 *與對照組比較，P＜0.05；#與糖尿病組比較，P＜0.05 4a. 各組大鼠海馬組織IL-6 mRNA的表達 4b. 各組大鼠海馬組織TNF-α mRNA的表達
3 討論
老年糖尿病是老年人最常見的疾病之一。歐美流行病學資料顯示，在所有人群中，糖尿病的患病率都是隨年齡增大而增加[7]。國內的資料也顯示，目前我國糖尿病患者已超過4 000萬，各年齡段中以老年發病率最高，約42.7% [8]。認知障礙是糖尿病的主要并發癥之一。Cukierman等[9]對25個前瞻性研究進行系統評價，結果表明糖尿病患者在隨訪期間比非糖尿病參與者認知障礙增加1.2～1.5倍，并強調老年糖尿病認知障礙風險增加。
目前，糖尿病認知功能障礙發病機制尚未完全闡明。既往研究認為其可能機制包括代謝失調、血管因素、神經生長因子缺乏、細胞存活傳導信息通路障礙、神經細胞凋亡等。近年來炎癥因子導致的炎癥損傷機制在糖尿病認知障礙發病機制中的作用已越來越受到重視。在炎癥因子中，目前研究最多的是CRP。老年糖尿病絕大多數為2 型糖尿病，許多研究顯示2型糖尿病及其并發癥中hs-CRP的水平明顯升高[10, 11]，提示CRP在糖尿病及其并發癥的發病機制中起相應的作用。CRP與認知障礙的關系也有相關報道。Komulaineu等 [12]對97例年齡為60～70歲的老年婦女隨訪12年結果表明：血清hs-CRP濃度越高，隨訪期間老年婦女記憶越差。Lin等[13]對大鼠腦室內注射CRP后證實引起大鼠學習和記憶功能損害，觸發類似阿爾茨海默病（AD）的癡呆。Bi等[14]則在轉基因小鼠和PC12細胞株的研究中證實CRP觸發AD發病 。但既往的研究并未闡明糖尿病狀態下升高的hs-CRP 與認知障礙之間的聯系，其作用機制更未見報道。本研究結果顯示老年糖尿病大鼠成模后血清hs-CRP水平明顯高于正常對照組（P＜0.01）。這與既往的研究結果一致。同時，本研究還應用Morris水迷宮測試老年糖尿病大鼠學習記憶功能變化，并與正常組相比較，發現老年糖尿病大鼠逃避潛伏期延長，中心區停留時間百分比和通過原平臺位置次數明顯下降，提示老年糖尿病大鼠出現認知功能障礙。在分子病理水平，本研究發現老年糖尿病大鼠海馬組織NF-κB信號激活并上調炎癥因子IL-6、TNF-α表達。在糖尿病腎病小鼠模型中，我們以前的研究發現血清hs-CRP水平升高激活腎組織NF-κB信號并上調IL-6、TNF-α表達，導致腎臟損害發生發展[15]。由此，我們推測老年糖尿病大鼠升高的血清hs-CRP水平通過激活海馬組織NF-κB信號，上調IL-6、TNF-α表達，導致認知功能障礙。
既往有研究報道，PPARγ激動劑對腦缺血再灌注損傷有腦保護作用[16]。羅格列酮是噻唑烷二酮類中與PPARγ親和力最強且毒副作用較小的激動劑。上世紀90年代被美國食品藥品監督管理局批準上市治療2型糖尿病。近20年來，不斷發現羅格列酮更多的藥理作用，如抗炎、抗氧化、對心血管及神經系統的保護作用等。Pathan等[17]的研究表明羅格列酮可以減輕高脂飼料喂養引起的大鼠記憶功能下降；Pedersen等[18]觀察了羅格列酮對Tg2576小鼠（一種AD模型小鼠）的作用，表明羅格列酮可以改善Tg2576小鼠的記憶能力。國內研究也顯示羅格列酮改善STZ誘導的糖尿病小鼠認知障礙[19]。本研究結果同樣顯示羅格列酮改善老年糖尿病大鼠認知障礙。另一方面，本研究結果還顯示羅格列酮下調糖尿病大鼠血清hs-CRP水平，這也與國內外研究結果一致[20-22]。在分子病理水平，本研究發現羅格列酮抑制老年糖尿病大鼠海馬組織NF-κB信號激活，下調IL-6、TNF-α表達。基于海馬在認知功能中的重要性，我們推測羅格列酮可能通過下調血清hs-CRP水平，抑制海馬組織NF-κB信號，下調IL-6、TNF-α表達，減輕炎癥因子介導的損傷，從而改善老年糖尿病大鼠的認知障礙。
綜上所述，老年糖尿病腦組織炎癥因子及信號通路激活，是導致認知障礙的重要病理生理機制。羅格列酮干預能改善糖尿病大鼠的認知功能，發揮腦保護作用。推測其機制可能與下調血清CRP水平，抑制海馬組織NF-κB信號激活，降低IL-6、TNF-α表達，減輕炎癥損傷有關。進一步探討羅格列酮改善糖尿病認知障礙的作用機制，有助于糖尿病認知障礙的防治。
