引用本文: 何健, 潘明志, 黃蕤, 唐恭順. 放射免疫法血清甲狀腺球蛋白檢測對免疫分析法血清甲狀腺球蛋白檢測的輔助作用. 華西醫學, 2014, 29(8): 1479-1482. doi: 10.7507/1002-0179.20140454 復制
血清甲狀腺球蛋白(Tg)是隨訪分化型甲狀腺癌(DTC)復發、轉移的關鍵標志物[1]。目前各醫院普遍采用免疫分析法(IMA)測定血清Tg值(Tg-IMA)。DTC患者血清中的內源性甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)使Tg-IMA降低甚至呈假陰性,因此有人提出恢復傳統的放射免疫法(RIA)測定血清Tg值(Tg-RIA)[1-3]。RIA對內源性TgAb干擾的耐受性較好[4]。
同時測定Tg-RIA、Tg-IMA可發現Tg-IMA假陰性,但文獻較少。本研究收集2012年9月-12月四川大學華西醫院核醫學科55例DTC隨訪患者的血清樣本,比較Tg-IMA、Tg-RIA一致性,評價Tg-RIA隨訪DTC的補充價值,報告如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
DTC住院患者55例,均已行甲狀腺全切術、中央區淋巴結清掃術,其中39例患者行頸側區淋巴結清除術。術后病理診斷為甲狀腺乳頭狀癌(PTC) 48例,濾泡狀癌1例,混合性癌6例。術后分期,Ⅰ期13例,Ⅱ期5例,Ⅲ期7例,Ⅳ期30例。隨訪時危險度分層為:高危21例,中危25例,低危9例。55例患者中,20例系首次隨訪(術后、清除甲狀腺治療后6~12個月),35例系第2~7次隨訪[術后、碘131(131I)治療后1~19年]。患者入院前低碘飲食3周,停服甲狀腺激素3周。每例患者收集血清2份,1份由醫院臨床檢驗中心常規測定Tg-IMA,另1份凍存于?20℃冰箱。待收集完成55例DTC血清后,訂購RIA試劑盒一次測定完畢Tg-RIA值。
1.2 血清Tg值測定
Tg-IMA:采用瑞士羅氏公司MODULAR E 170電化學發光系統測定血清Tg值。其原理可簡述為,過量生物素化單抗捕獲血清中的Tg,釕復合物標記的單抗再與Tg結合,形成“生物素化單抗-Tg-釕單抗”復合物;鏈酶親和素微球吸附復合物中生物素,電化學發光法測定復合物中的釕(Ⅱ)計數。微球計數率越高,血清中Tg含量越高。廠家提供的Tg測定下限為0.1 μg/L,功能靈敏度1 μg/L。
Tg-RIA試劑盒購自中國原子能科學研究院同位素研究所,由成都市第二人民醫院核醫學科完成檢測。其原理簡述為:血清中Tg與試劑中恒量125I-Tg競爭結合有限恒量的動物TgAb位點,血清Tg濃度越高,125I-Tg-TgAb沉淀放射性計數率越少。廠家提供的檢測低限1 μg/L,批內變異系數3.2%~6.8%,批間變異系數4.7%~8.5%。
1.3 Tg值定性界定
根據2009年美國甲狀腺協會(ATA)《甲狀腺結節和分化型甲狀腺癌診療指南》及國內核醫學專家共識,清除全部甲狀腺(手術和131I去除治療后)的DTC患者,在促甲狀腺素(TSH)刺激狀態下(TSH>30 mU/L),體內血清Tg>1 μg/L定義為Tg陽性,<1 μg/L為Tg陰性,1~10 μg/L為低濃度陽性,Tg>10 μg/L為強陽性。以血清Tg值1 μg/L作為DTC復發、轉移的閾值判斷55例患者Tg-IMA、Tg-RIA陰、陽性。
1.4 統計學方法
采用SPSS 11.0軟件完成Kappa檢驗,評價Tg-IMA、Tg-RIA一致性;并計算Tg-IMA、Tg-RIA相關性。P值<0.05有統計學意義。對Tg-IMA、Tg-RIA不一致的病例進行描述性研究,以出院診斷作為診斷標準評價Tg-IMA、Tg-RIA的可信度。出院診斷主要依據Tg-IMA、診斷劑量的131I全身顯像(D-WBS)結果,參考頸部超聲、胸部CT,同時參考上次隨訪資料。
2 結果
2.1 Tg-IMA與Tg-RIA的一致性及相關性
55例DTC隨訪患者中,Tg-IMA、Tg-RIA均陽性者16例,均陰性者18例;Tg-IMA陽性、Tg-RIA陰性12例;Tg-IMA陰性、Tg-RIA陽性9例。兩者相關性好(r=0.918,P=0.000),一致性差(Kappa=0.238,P=0.076)。相關性見圖 1。

2.2 Tg-IMA假陰性,Tg-RIA真陽性
2例DTC患者Tg-IMA<0.1 μg/L、Tg-RIA陽性,考慮為Tg-IMA假陰性。其中1例為DTC肺轉移和頸淋巴結轉移,給予200 mCi 131I治療;治療劑量的131I全身顯像(T-WBS)示雙肺轉移。另外1例結合前2次131I治療時Tg-IMA、D-WBS認為頸部淋巴結轉移未徹底治愈,給予150 mCi 131I治療;治療劑量的T-WBS陰性,考慮病灶太小。見表 1。

2.3 Tg-RIA假陽性可能
8例患者Tg-RIA陽性、Tg-IMA陰性,未進行131I治療。其中3例影像學檢查正常,Tg-IMA陰性,診斷為治愈,明確判定為Tg-RIA假陽性。2例彩色多普勒超聲發現頸部淋巴結腫大,雖Tg-IMA陰性,不能除外頸部淋巴結轉移。2例胸部CT發現肺結節,雖Tg-IMA陰性,不能除外肺轉移。1例因頸部淋巴結轉移多次行131I治療,此次隨訪雖Tg-IMA陰性,但TgAb高濃度陽性,因此最終診斷為“可能治愈”。
2.4 Tg-RIA假陰性
5例患者Tg-IMA陽性(1.37~14.38 μg/L)、Tg-RIA<1 μg/L,考慮為Tg-RIA假陰性,綜合分析診斷為轉移,給予131I治療。1例因頸部淋巴結轉移131I治療效果不佳而再次手術,此次入院尋求131I治療,超聲仍然發現左鎖骨上窩淋巴結,傾向于轉移灶,臨床綜合分析考慮PTC頸淋巴結轉移。1例因胸部CT發現PTC肺轉移灶縮小、Tg-IMA陽性給予131I治療。1例胸部CT發現雙肺淡薄小片影傾向于肺轉移,結合Tg-IMA診斷為肺轉移。1例超聲發現頸部淋巴結,Tg-IMA陽性,綜合考慮診斷頸部淋巴結轉移。5例中4例T-WBS陰性,考慮病灶太小,攝取131I太少,不否定肺轉移或頸部淋巴結轉移。
2.5 Tg-IMA低濃度陽性
4例Tg-IMA低濃度陽性(1.07~4.09 μg/L)、Tg-RIA測不出,未治療,繼續隨訪。該4例患者D-WBS、頸部彩色多普勒超聲、胸部CT均陰性,腫瘤殘留或轉移的證據不足。見表 2。

2.6 對TgAb的耐受性
本組55例DTC患者中,11例TgAb強陽性(瑞士羅氏公司MODULAR E 170電化學發光檢測以TgAb>115 kU/L為強陽性),其中Tg-IMA僅2例陽性;而Tg-RIA 9例陽性(>1 μg/L),其中6例Tg-RIA>6 μg/L。這6例中,2例Tg-RIA陽性、Tg-IMA假陰性,給予131I治療;1例Tg-RIA、Tg-IMA均陽性,給予131I治療;1例肺轉移、頸部淋巴結融合成團者被要求再次手術,其Tg-RIA、Tg-IMA均陽性;另2例轉移依據不足,隨訪。見表 3。

3 討論
隨訪DTC主要依賴血清Tg [5-14],TgAb干擾可致Tg-IMA假陰性,此時Tg-RIA可補充Tg-IMA的不足。Weightman等[15]報道2例Tg-IMA假陰性患者,其TgAb分別為319、500 kU/L,組織學確認分別為頸部淋巴結轉移、縱隔轉移。本研究中2例Tg-IMA假陰性患者TgAb分別為>4 000、1 400 kU/L,1例T-WBS診斷為肺轉移,1例T-WBS陰性考慮轉移灶太小最終仍臨床診斷轉移。我們與Weightman等[15]均發現TgAb強陽性伴隨Tg-IMA假陽性,提示TgAb干擾起主要作用。我們之前研究發現,多克隆的TgAb對Tg-IMA的干擾呈非參數相關,且有個體差異[1-3]。
臨床情況頗為復雜,Tg-IMA低濃度陽性仍考慮轉移或腫瘤殘留可能,此時Tg-RIA或許能提供補充。本組4例患者Tg-IMA介于1.07~4.09 μg/L,Tg-RIA未能幫助評價有無轉移。Persoon等[16]報道1例DTC,其Tg-IMA為1.4 μg/L,Tg-RIA也未能提供幫助,需繼續隨訪。我們認為這兩項研究的樣本量都不夠大。此時隨訪常采用Tg-IMA倍增時間,若Tg-IMA倍增時間<1年則考慮復發或轉移[17]。
Tg-RIA陽性、Tg-IMA陰性:可能是Tg-RIA假陽性或Tg-IMA假陰性。Weightman等[15]報道2例DTC,其Tg-RIA分別為7.2、42 μg/L,有待隨訪后再定論。Persoon等[16]報道7例DTC患者Tg-RIA陽性(1~6.5 μg/L),其中2例隨訪判斷為腫瘤,5例隨訪1~29年無腫瘤證據。本研究中8例類似患者臨床最終診斷5例不能除外轉移,3例無轉移依據,但需要繼續隨訪。實驗過程中我們發現,Tg-RIA試劑盒靈敏度不夠常是Tg-RIA低濃度陽性的主要原因。因此常首先考慮重復實驗或采用雙份標本甚至3份標本實驗。
有人期待外周血Tg mRNA測定彌補Tg-IMA假陰性問題,但結果讓人失望[18]。判斷TgAb干擾建立了Tg回收率、TgAb濃度兩個認識階段。2009年的ATA指南推薦測定Tg-IMA的同時測定TgAb,并將TgAb作為替代標志物。我們與Spencer等[4]、Weightman等[15]的研究表明,同時測定Tg-IMA、Tg-RIA可更加直接地判斷TgAb干擾并排除Tg-IMA假陰性。可見Tg-RIA是Tg-IMA的補充標志物。因此我們建議DTC患者甲狀腺去除治療后,血清TgAb強陽性(>115 kU/L)、Tg-IMA陰性時補充測定Tg-RIA。
血清甲狀腺球蛋白(Tg)是隨訪分化型甲狀腺癌(DTC)復發、轉移的關鍵標志物[1]。目前各醫院普遍采用免疫分析法(IMA)測定血清Tg值(Tg-IMA)。DTC患者血清中的內源性甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)使Tg-IMA降低甚至呈假陰性,因此有人提出恢復傳統的放射免疫法(RIA)測定血清Tg值(Tg-RIA)[1-3]。RIA對內源性TgAb干擾的耐受性較好[4]。
同時測定Tg-RIA、Tg-IMA可發現Tg-IMA假陰性,但文獻較少。本研究收集2012年9月-12月四川大學華西醫院核醫學科55例DTC隨訪患者的血清樣本,比較Tg-IMA、Tg-RIA一致性,評價Tg-RIA隨訪DTC的補充價值,報告如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
DTC住院患者55例,均已行甲狀腺全切術、中央區淋巴結清掃術,其中39例患者行頸側區淋巴結清除術。術后病理診斷為甲狀腺乳頭狀癌(PTC) 48例,濾泡狀癌1例,混合性癌6例。術后分期,Ⅰ期13例,Ⅱ期5例,Ⅲ期7例,Ⅳ期30例。隨訪時危險度分層為:高危21例,中危25例,低危9例。55例患者中,20例系首次隨訪(術后、清除甲狀腺治療后6~12個月),35例系第2~7次隨訪[術后、碘131(131I)治療后1~19年]。患者入院前低碘飲食3周,停服甲狀腺激素3周。每例患者收集血清2份,1份由醫院臨床檢驗中心常規測定Tg-IMA,另1份凍存于?20℃冰箱。待收集完成55例DTC血清后,訂購RIA試劑盒一次測定完畢Tg-RIA值。
1.2 血清Tg值測定
Tg-IMA:采用瑞士羅氏公司MODULAR E 170電化學發光系統測定血清Tg值。其原理可簡述為,過量生物素化單抗捕獲血清中的Tg,釕復合物標記的單抗再與Tg結合,形成“生物素化單抗-Tg-釕單抗”復合物;鏈酶親和素微球吸附復合物中生物素,電化學發光法測定復合物中的釕(Ⅱ)計數。微球計數率越高,血清中Tg含量越高。廠家提供的Tg測定下限為0.1 μg/L,功能靈敏度1 μg/L。
Tg-RIA試劑盒購自中國原子能科學研究院同位素研究所,由成都市第二人民醫院核醫學科完成檢測。其原理簡述為:血清中Tg與試劑中恒量125I-Tg競爭結合有限恒量的動物TgAb位點,血清Tg濃度越高,125I-Tg-TgAb沉淀放射性計數率越少。廠家提供的檢測低限1 μg/L,批內變異系數3.2%~6.8%,批間變異系數4.7%~8.5%。
1.3 Tg值定性界定
根據2009年美國甲狀腺協會(ATA)《甲狀腺結節和分化型甲狀腺癌診療指南》及國內核醫學專家共識,清除全部甲狀腺(手術和131I去除治療后)的DTC患者,在促甲狀腺素(TSH)刺激狀態下(TSH>30 mU/L),體內血清Tg>1 μg/L定義為Tg陽性,<1 μg/L為Tg陰性,1~10 μg/L為低濃度陽性,Tg>10 μg/L為強陽性。以血清Tg值1 μg/L作為DTC復發、轉移的閾值判斷55例患者Tg-IMA、Tg-RIA陰、陽性。
1.4 統計學方法
采用SPSS 11.0軟件完成Kappa檢驗,評價Tg-IMA、Tg-RIA一致性;并計算Tg-IMA、Tg-RIA相關性。P值<0.05有統計學意義。對Tg-IMA、Tg-RIA不一致的病例進行描述性研究,以出院診斷作為診斷標準評價Tg-IMA、Tg-RIA的可信度。出院診斷主要依據Tg-IMA、診斷劑量的131I全身顯像(D-WBS)結果,參考頸部超聲、胸部CT,同時參考上次隨訪資料。
2 結果
2.1 Tg-IMA與Tg-RIA的一致性及相關性
55例DTC隨訪患者中,Tg-IMA、Tg-RIA均陽性者16例,均陰性者18例;Tg-IMA陽性、Tg-RIA陰性12例;Tg-IMA陰性、Tg-RIA陽性9例。兩者相關性好(r=0.918,P=0.000),一致性差(Kappa=0.238,P=0.076)。相關性見圖 1。

2.2 Tg-IMA假陰性,Tg-RIA真陽性
2例DTC患者Tg-IMA<0.1 μg/L、Tg-RIA陽性,考慮為Tg-IMA假陰性。其中1例為DTC肺轉移和頸淋巴結轉移,給予200 mCi 131I治療;治療劑量的131I全身顯像(T-WBS)示雙肺轉移。另外1例結合前2次131I治療時Tg-IMA、D-WBS認為頸部淋巴結轉移未徹底治愈,給予150 mCi 131I治療;治療劑量的T-WBS陰性,考慮病灶太小。見表 1。

2.3 Tg-RIA假陽性可能
8例患者Tg-RIA陽性、Tg-IMA陰性,未進行131I治療。其中3例影像學檢查正常,Tg-IMA陰性,診斷為治愈,明確判定為Tg-RIA假陽性。2例彩色多普勒超聲發現頸部淋巴結腫大,雖Tg-IMA陰性,不能除外頸部淋巴結轉移。2例胸部CT發現肺結節,雖Tg-IMA陰性,不能除外肺轉移。1例因頸部淋巴結轉移多次行131I治療,此次隨訪雖Tg-IMA陰性,但TgAb高濃度陽性,因此最終診斷為“可能治愈”。
2.4 Tg-RIA假陰性
5例患者Tg-IMA陽性(1.37~14.38 μg/L)、Tg-RIA<1 μg/L,考慮為Tg-RIA假陰性,綜合分析診斷為轉移,給予131I治療。1例因頸部淋巴結轉移131I治療效果不佳而再次手術,此次入院尋求131I治療,超聲仍然發現左鎖骨上窩淋巴結,傾向于轉移灶,臨床綜合分析考慮PTC頸淋巴結轉移。1例因胸部CT發現PTC肺轉移灶縮小、Tg-IMA陽性給予131I治療。1例胸部CT發現雙肺淡薄小片影傾向于肺轉移,結合Tg-IMA診斷為肺轉移。1例超聲發現頸部淋巴結,Tg-IMA陽性,綜合考慮診斷頸部淋巴結轉移。5例中4例T-WBS陰性,考慮病灶太小,攝取131I太少,不否定肺轉移或頸部淋巴結轉移。
2.5 Tg-IMA低濃度陽性
4例Tg-IMA低濃度陽性(1.07~4.09 μg/L)、Tg-RIA測不出,未治療,繼續隨訪。該4例患者D-WBS、頸部彩色多普勒超聲、胸部CT均陰性,腫瘤殘留或轉移的證據不足。見表 2。

2.6 對TgAb的耐受性
本組55例DTC患者中,11例TgAb強陽性(瑞士羅氏公司MODULAR E 170電化學發光檢測以TgAb>115 kU/L為強陽性),其中Tg-IMA僅2例陽性;而Tg-RIA 9例陽性(>1 μg/L),其中6例Tg-RIA>6 μg/L。這6例中,2例Tg-RIA陽性、Tg-IMA假陰性,給予131I治療;1例Tg-RIA、Tg-IMA均陽性,給予131I治療;1例肺轉移、頸部淋巴結融合成團者被要求再次手術,其Tg-RIA、Tg-IMA均陽性;另2例轉移依據不足,隨訪。見表 3。

3 討論
隨訪DTC主要依賴血清Tg [5-14],TgAb干擾可致Tg-IMA假陰性,此時Tg-RIA可補充Tg-IMA的不足。Weightman等[15]報道2例Tg-IMA假陰性患者,其TgAb分別為319、500 kU/L,組織學確認分別為頸部淋巴結轉移、縱隔轉移。本研究中2例Tg-IMA假陰性患者TgAb分別為>4 000、1 400 kU/L,1例T-WBS診斷為肺轉移,1例T-WBS陰性考慮轉移灶太小最終仍臨床診斷轉移。我們與Weightman等[15]均發現TgAb強陽性伴隨Tg-IMA假陽性,提示TgAb干擾起主要作用。我們之前研究發現,多克隆的TgAb對Tg-IMA的干擾呈非參數相關,且有個體差異[1-3]。
臨床情況頗為復雜,Tg-IMA低濃度陽性仍考慮轉移或腫瘤殘留可能,此時Tg-RIA或許能提供補充。本組4例患者Tg-IMA介于1.07~4.09 μg/L,Tg-RIA未能幫助評價有無轉移。Persoon等[16]報道1例DTC,其Tg-IMA為1.4 μg/L,Tg-RIA也未能提供幫助,需繼續隨訪。我們認為這兩項研究的樣本量都不夠大。此時隨訪常采用Tg-IMA倍增時間,若Tg-IMA倍增時間<1年則考慮復發或轉移[17]。
Tg-RIA陽性、Tg-IMA陰性:可能是Tg-RIA假陽性或Tg-IMA假陰性。Weightman等[15]報道2例DTC,其Tg-RIA分別為7.2、42 μg/L,有待隨訪后再定論。Persoon等[16]報道7例DTC患者Tg-RIA陽性(1~6.5 μg/L),其中2例隨訪判斷為腫瘤,5例隨訪1~29年無腫瘤證據。本研究中8例類似患者臨床最終診斷5例不能除外轉移,3例無轉移依據,但需要繼續隨訪。實驗過程中我們發現,Tg-RIA試劑盒靈敏度不夠常是Tg-RIA低濃度陽性的主要原因。因此常首先考慮重復實驗或采用雙份標本甚至3份標本實驗。
有人期待外周血Tg mRNA測定彌補Tg-IMA假陰性問題,但結果讓人失望[18]。判斷TgAb干擾建立了Tg回收率、TgAb濃度兩個認識階段。2009年的ATA指南推薦測定Tg-IMA的同時測定TgAb,并將TgAb作為替代標志物。我們與Spencer等[4]、Weightman等[15]的研究表明,同時測定Tg-IMA、Tg-RIA可更加直接地判斷TgAb干擾并排除Tg-IMA假陰性。可見Tg-RIA是Tg-IMA的補充標志物。因此我們建議DTC患者甲狀腺去除治療后,血清TgAb強陽性(>115 kU/L)、Tg-IMA陰性時補充測定Tg-RIA。