注射用燈盞花素與常用溶媒配伍穩定性考察_《華西醫學》

作者：

 王霞 , 梅玲

成都市第五人民醫院藥劑科（成都，611130）;

關鍵詞：

燈盞花素野黃芩苷配制穩定性

DOI：

10.7507/1002-0179.20140089

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目的考察注射用燈盞花素與臨床常用溶媒的配伍穩定性。方法將注射用燈盞花素50 mg分別與100、250、500 mL三種規格的生理鹽水、5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液配伍，放置0、1、2、4、6 h后觀察配伍液的外觀、測定溶液的pH值、采用高效液相色譜法測定配伍液中有效成分的含量變化。使用SPSS 15.0軟件對采集的數據進行分析。結果供試品溶液在實驗條件下外觀無明顯變化；pH值在標準范圍內波動；與100 mL的生理鹽水、100 mL的10%葡萄糖注射液配伍，及與以上三種規格的5%葡萄糖注射液配伍，主成分的含量變化均顯著。結論注射用燈盞花素不宜與5%葡萄糖注射液配伍使用，最宜使用生理鹽水250 mL或500 mL兩種規格的溶媒進行配制，并在6 h內完成輸注。

引用本文： 王霞, 梅玲. 注射用燈盞花素與常用溶媒配伍穩定性考察. 華西醫學, 2014, 29(2): 293-296. doi: 10.7507/1002-0179.20140089 復制

燈盞花素為菊科植物短葶飛蓬[拉丁學名：Erigeron breviscapus（Vant.）Hand.-Mazz]全株植物中提取分離所得，具有散寒解表、祛風除濕、通絡止痛以及消積等功效^[1]。燈盞花素的主要活性成份為燈盞花乙素，又名野黃苓苷，結構式為4’，5，6-三羥基黃酮-7-O-葡萄糖醛酸苷。現代基礎藥理表明：燈盞花素能增加腦血流量，降低血管阻力，改善腦血液循環，抗氧自由基^[2]和抗血小板凝聚，主要用于中風及其后遺癥、冠心病、心絞痛心力衰竭及高血壓的治療。近年來有其治療骨性關節炎^[3]、肝損傷^[4]、肺纖維化、糖尿病周圍病變^[5]以及聯合用藥治療糖尿病腎病^[6]的報道，使得其在臨床上應用愈加廣泛。燈盞花素為中藥注射劑，對溶媒及溶媒規格的選擇存在多樣性。為此，我們對注射用燈盞花素與溶媒的配伍進行了穩定性檢測，為臨床有效使用注射用燈盞花素提供依據。

1 資料與方法

1.1 儀器

KQ3200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；高效液相色譜儀1200型（美國安捷倫公司）；UPT-I-10T型優譜UPT系列超純水器（成都超純科技有限公司）；BS124S型電子天平（北京賽多利斯科學儀器有限公司），Q/YXLG173型PHS-3E（上海精密科學儀器有限公司）；HHS型電熱水浴鍋（上海醫療器械廠）。

1.2 藥品與試劑

野黃芩苷對照品（成都植標化純有限公司，批號27740-01-8）；注射用燈盞花素（湖南恒生制藥有限公司，批號20121006）；10%葡萄糖注射液（四川科倫藥業，批號B13010901）；5%葡萄糖注射液（四川科倫藥業，批號：T13011901）；生理鹽水（四川科倫藥業，批號：B12112010）；色譜甲醇（美國Fisher公司），重蒸水。

1.3 溶液的制備

1.3.1 供試品溶液的制備

取注射用燈盞花素50 mg，分別加入100、250、500 mL的生理鹽水、5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液，混合均勻，所得9組溶液即為實驗用配伍溶液，避光密封保存，待用。

1.3.2 對照品溶液的制備

野黃芩苷對照品真空干燥24 h后，取4.998 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，加甲醇5 mL溶解，超聲處理（功率300 W，頻率50 kHz）30 min，取出放置室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，避光密封保存，即得。

1.4 配伍溶液的外觀性狀及pH值

取“1.3.1”項下溶液置室溫下，分別于0、1、2、4、6 h做外觀觀察及pH值檢測。pH值測定參考《中國藥典》2010年版二部附錄ⅥH。

1.5 燈盞花素高效液相色譜法（HPLC）測定方法的建立

1.5.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C-18色譜柱（250.0 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液（40︰60）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：335 nm。理論板數按野黃芩苷峰計算應不低于5 000。

1.5.2 線性關系考察

精密吸取“1.3.2”項下對照品溶液，分別自動進樣4、8、10、12、16、20 μL。以進樣量（x，μg）為橫坐標，峰面積（y）為縱坐標，進行線性回歸。

1.5.3 精密度實驗

精密吸取生理鹽水配伍溶液10 μL，連續進樣6次，以峰面積計算野黃芩苷的相對標準偏差（RSD%）。

1.5.4 加樣回收實驗

分別精密吸取已知含量的100 mL的生理鹽水、5%葡萄糖、10%葡萄糖配伍溶液1 mL，分別精密加入等量的野黃芩苷標準溶液1 mL混勻即得，平行測3次，取平均值。

1.6 配伍溶液中的含量測定

取“1.3.1”項下的配伍溶液，經0.45 μm濾膜濾過后，在上述色譜條件下，分別在0、1、2、4、6 h自動進樣10 μL，測定其峰面積。計算野黃芩苷含量。以0 h的含量為100，計算各時間點的相對百分含量。

1.7 統計學方法

采用SPSS 15.0軟件進行數據統計分析。實驗數據以均數 ± 標準差表示，統計方法為多重方差分析，P值＜0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 配伍溶液的外觀性狀及pH值變化

注射用燈盞花素在9組配伍溶液中放置6 h內溶液澄明，外觀未見沉淀生成，無氣泡產生，顏色無明顯變化。注射用燈盞花素與不同規格的生理鹽水、5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液配伍，放置0、1、2、4、6 h 后，pH值較穩定，均在6.88～7.11之間。見表 1。

表1 三種溶媒不同濃度配伍后各時間點pH值變化（n=3）

表選項

下載CSV

溶媒及規格	放置時間（h）
生理鹽水
100 mL	6.88 ± 0.05	6.82 ± 0.02	6.74 ± 0.04	6.86 ± 0.04	6.88 ± 0.02
250 mL	6.89 ± 0.03	6.85 ± 0.02	6.81 ± 0.04	6.88 ± 0.02	6.88 ± 0.05
500 mL	7.10 ± 0.02	6.85 ± 0.04	6.78 ± 0.05	6.88 ± 0.02	6.62 ± 0.05
5%葡萄糖注射液
100 mL	6.85 ± 0.05	6.81 ± 0.02	6.54 ± 0.05	6.86 ± 0.04	6.86 ± 0.02
250 mL	6.88 ± 0.02	6.86 ± 0.03	6.82 ± 0.02	6.89 ± 0.03	6.62 ± 0.02
500 mL	6.98 ± 0.04	6.89 ± 0.02	6.84 ± 0.05	6.88 ± 0.02	6.68 ± 0.04
10%葡萄糖注射液
100 mL	6.86 ± 0.04	6.80 ± 0.02	6.51 ± 0.05	6.85 ± 0.05	6.88 ± 0.02
250 mL	6.89 ± 0.05	6.87 ± 0.05	6.83 ± 0.05	6.88 ± 0.03	6.65 ± 0.02
500 mL	7.11 ± 0.03	6.89 ± 0.05	6.82 ± 0.02	6.89 ± 0.02	6.78 ± 0.04

2.2 配伍溶液中有效成分的穩定性考察

2.2.1 色譜條件

系統適應性：注射用燈盞花素、野黃芩苷色譜圖見圖 1，其主峰分離度好，色譜條件良好，適用于野黃芩苷的測定。

圖1 注射液用燈盞花素及野黃芩苷的HPLC圖

1：注射用燈盞花素；2：野黃芩苷

圖選項

下載全尺寸圖像

下載幻燈片

2.2.2 線性關系考察

標準曲線方程及相關系數為：y=2 862.5x+46.857，r=0.999 5，線性范圍：1.999～9.996 μg，見圖 2。野黃芩苷進樣量在1.999～9.996 μg時，峰面積與進樣量有良好的線性關系。

圖2 野黃芩苷的標準曲線圖

圖選項

下載全尺寸圖像

下載幻燈片

2.2.3 精密度實驗

以峰面積計算野黃芩苷RSD%為1.34，儀器精密度符合要求。

2.2.4 回收率實驗

野黃芩苷的回收率分別為100.44%、97.67%、98.00%，其RSD%分別為2.88、2.01、3.16，均符合實驗要求。

2.2.5 配伍溶液中的含量測定

注射用燈盞花素與葡萄糖和氯化鈉注射液配伍后6 h內，野黃芩苷的含量均有所變化，其中與100 mL生理鹽水配伍在時間點2、6 h時野黃芩苷的含量下降了5.04%，與100、250、500 mL的5%葡萄糖注射液配伍在時間點4 h時野黃芩苷含量分別降低4.61%、5.44%和4.08%，與100 mL的10%葡萄糖注射液配伍時也略有波動。各時間點的相對百分含量見表 2。

表2 三種溶媒配伍后各時間點不同濃度野黃芩苷相對百分含量（n=3，%）

表選項

下載CSV

溶媒及規格	放置時間（h）
生理鹽水
100 mL	100.00	97.27	94.96	97.06	94.96
250 mL	100.00	97.55	99.78	99.78	99.00
500 mL	100.00	99.42	99.30	99.88	100.70
5%葡萄糖注射液
100 mL	100.00	99.37	96.23	95.39	97.48
250 mL	100.00	98.37	95.31	94.56	95.78
500 mL	100.00	99.42	99.17	95.92	97.76
10%葡萄糖注射液
100 mL	100.00	99.55	95.85	101.73	99.69
250 mL	100.00	100.00	99.41	99.52	99.29
500 mL	100.00	99.67	99.48	99.89	99.11

3 討論

燈盞花素主要成分為燈盞花甲素和燈盞花乙素，燈盞花乙素即野黃芩苷（C22H18O12）。有實驗研究表明燈盞花素中的活性成分為野黃芩苷^[7]，故我們選擇野黃芩苷作為目標有效成分進行檢測。2010版《中國藥典》規定：燈盞花素提取物按干燥品計算，含野黃芩苷不得低于90.0%（供口服用）或98.0%（供注射用）^[8]。野黃芩苷幾乎不溶于水，但可溶于甲醇，故在制備對照品時選擇甲醇進行溶解。

野黃芩苷為黃酮苷類化合物，因分子中具有多個羥基和1個糖苷鍵而呈現酸堿兩性。由表 1可知，注射用燈盞花素與不同體積的生理鹽水、5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液配伍，放置0、1、2、4、6 h后，其配伍液外觀顏色及透明度無明顯變化，pH值范圍在6.88～7.11，均符合《中國藥典》中注射用燈盞花素的pH值范圍^[7]，因此上述配伍溶液外觀穩定、pH值較穩定。

野黃芩苷為黃芩苷的類似物，黃芩苷在水溶液中極易發生β-糖苷鍵水解，導致其相鄰的3個酚羥基被氧化成醌式結構而失效^[9]。野黃芩苷也存在類似的結構而具有潛在的不穩定性。實驗結果顯示：注射用燈盞花素與100 mL的生理鹽水、5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液配伍時，野黃芩苷處于較高濃度狀態，其含量測定結果均有較大的變化，可能與野黃芩苷的溶解性、電離能力和油水分配系數等^[10]有關，故建議臨床上避免配制高濃度的燈盞花素使用。

注射用燈盞花素與3種不同濃度的5%葡萄糖注射液配伍，野黃芩苷在1 h后的含量變化均較大，說明與5%葡萄糖注射液配伍存在不穩定性。因生理鹽水的pH值范圍通常在4.5～7.0，葡萄糖注射液pH值通常在3.2～5.5，說明書上規定燈盞花素的配伍pH值范圍應不低于4.2，而葡萄糖的pH值因不同廠家不同批次有所不同，難以保證其pH值在規定范圍內，臨床上也有燈盞花素與5%葡萄糖注射液配伍時有時發生渾濁、析出晶體^[11]的現象，故建議臨床上最好選擇氯化鈉配伍使用，并盡量在6 h內完成輸液。

燈盞花素在臨床上應用有多種劑型：片劑、膠囊^[12]、緩釋片^[13]、微丸^[14]、緩釋固體分散劑^[15]，而注射劑以有效、迅速、方便不能口服的重癥患者和急救的特點更為臨床所接受。但隨著燈盞花素臨床應用范圍的擴大，各種不良反應頻發：如胃腸道系統、中樞及外周神經系統、全身性損害^[16]。因配伍不當、藥物濃度過高、pH值范圍選擇不當、配伍溶液放置時間過長等導致的不良反應居多。本研究通過注射用燈盞花素與臨床常見溶媒的配伍穩定性考察，旨在為臨床用藥方面提供參考，結果顯示注射用燈盞花素不宜與5%葡萄糖注射液配伍使用，最宜使用生理鹽水250 mL或500 mL兩種規格的溶媒進行配伍，并在6 h內完成輸注。