引用本文： 王朱健, 周旻, 吉建, 沈健, 湯荔, 曹文俊, 徐格致. 眼弓蛔蟲病患者眼內液與血清犬弓蛔蟲特異性IgG抗體檢測. 中華眼底病雜志, 2015, 31(1): 41-44. doi: 10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2015.01.011 復制
眼弓蛔蟲病是主要由犬或貓的蛔蟲幼蟲侵犯眼內組織引起的感染性疾病，可造成嚴重的視力損害，甚至致盲[1-3]。臨床上對其診斷主要依賴特征性的臨床癥狀，但部分患者臨床表現并不典型且缺少特異性，容易誤診或漏診，利用實驗室檢查來輔助診斷有重要的臨床意義。目前實驗室檢查的主要方法是以犬弓蛔蟲幼蟲排泌抗原包被固相，檢測血清中針對幼蟲的特異性抗體[4]。然而有部分患者血清的弓蛔蟲IgG抗體表現為陰性或低滴度，為臨床診斷帶來困難。有研究發現，眼內液的弓蛔蟲IgG抗體陽性可作為實驗診斷的重要依據[5, 6]。為驗證眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG抗體檢測在眼弓蛔蟲病實驗診斷中的價值，我們對一組眼弓蛔蟲病患者的血清及眼內液樣本同時進行了犬弓蛔蟲特異性IgG抗體水平檢測。現將結果報道如下。
1 對象和方法
2009年11月至2014年7月在復旦大學附屬眼耳鼻喉科醫院眼科確診為眼弓蛔蟲病的50例患者50只眼(眼弓蛔蟲病組)納入本研究。其中，男性32例，占64.00%；女性18例，占36.00%；年齡2～35歲，平均年齡11.44歲，中位年齡8.5歲。以年齡≥18歲為成年。未成年患者41例，占82.00%；成年患者9例，占18.00%。未成年患者發病率較成年患者偏高，差異有統計學意義(χ2=38.44，P＜0.05)。未成年患者中男性發病率明顯高于女性，差異也有統計學意義(χ2=9.558，P＜0.05)(表 1)。患者病程為＜1周~10年，平均病程為(10.6±19.7)個月。45例患者能明確其常住地區，其中常住在鄉村地區40例，占88.89%；華東地區46例，占92.00%，華中地區4例，占8.00%。38例患者有貓狗接觸史，占76.00%。
表1
未成年與成年患者一般情況比較
所有患者均符合眼弓蛔蟲病的診斷標準，即后極部或周邊部肉芽腫伴玻璃體牽引條索，或中至重度玻璃體炎性反應伴視網膜炎性團塊，并排除其他病因[1]。納入152例在我院耳鼻喉科就診的患者作為血清對照組。其中，男性94例，女性58例；年齡1～79歲，平均年齡(26.51±20.05)歲。未成年患者69例，占45.39%；成年患者83例，占54.61%。同時納入70例眼科其他病患者作為眼內液對照組。其中，白內障26例，青光眼20例，細菌性眼內炎10例，急性視網膜壞死14例。
經我院倫理委員會批準并獲得所有患者的知情同意后，收集眼內液100μl及靜脈血3 ml，靜脈血離心后分離血清。眼弓蛔蟲病組收集房水樣本28份，玻璃體液樣本22份，血清樣本50份。眼內液對照組收集白內障、青光眼患者的房水樣本，共46份；收集細菌性眼內炎、急性視網膜壞死患者的玻璃體液樣本，共24份。血清對照組收集血清樣本共152份。采用Toxocara Canis酶聯免疫吸附試驗試劑盒(國藥控股公司)檢測患者眼內液及血清中犬弓蛔蟲特異性IgG抗體的陽性率。檢測步驟根據試劑盒說明書進行，眼內液與血清樣本采取相同的稀釋方法。酶標儀型號為Tecan Sunrise(瑞士TECAN貿易有限公司)。抗體水平用U值表示，U=標本吸光度[A，舊稱光密度(OD)]值×10/臨界值。根據試劑盒使用說明，血清U值大于10時為陽性，小于等于10時為陰性。眼內液U值大于眼內液對照組房水或玻璃體液樣本的平均U值加2倍標準差為陽性，小于或與其相等時為陰性。同時對眼弓蛔蟲病組患者的血清及眼內液樣本進行配對檢測，對比分析兩者之間的犬弓蛔蟲特異性IgG水平的差異。
采用IBM SPSS Statistics 19統計軟件進行統計學分析。組間比較采用卡方檢驗和Mann-Whitney U檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。
2 結果
眼弓蛔蟲病組50例患者中，血清犬弓蛔蟲特異性IgG陽性34例，陽性率68.00%；U值為20.42±17.01。血清對照組152例患者中，血清犬弓蛔蟲特異性IgG陽性4例，陽性率為2.63%；U值為2.37±2.71。其中，未成年、成年患者各2例；未成年患者與成年患者血清犬弓蛔蟲特異性IgG陽性率比較，差異無統計學意義(χ2=0.103，P=0.751)。與血清對照組比較，眼弓蛔蟲病組患者血清的特異性IgG水平明顯偏高，差異有統計學意義(Z=8.962，P=0.000)(圖 1)。
圖1
眼弓蛔蟲病組與血清對照組患者血清犬弓蛔蟲特異性IgG抗體水平比較
眼弓蛔蟲病組50例患者中，眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG陽性44例，陽性率88.00%；U值為25.72±23.04。眼內液對照組未見眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG陽性者，U值為0.69±0.34。與眼內液對照組比較，眼弓蛔蟲病組患者眼內液的特異性IgG水平明顯偏高，差異有統計學意義(Z=8.120，P=0.000)(圖 2)。
圖2
眼弓蛔蟲病組與眼內液對照組患者眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG抗體水平比較
眼弓蛔蟲病組50例患者中，血清及眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG均為陽性者28例，占56.00%；血清犬弓蛔蟲特異性IgG陽性，而眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG陰性者6例，占12.00%；血清犬弓蛔蟲特異性IgG陰性，而眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG陽性者16例，占32.00%。血清與眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG陽性率比較，差異有統計學意義(χ2=4.720，P=0.028)。
眼弓蛔蟲病組患者的血清及眼內液樣本配對檢測結果顯示，32例患者的眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG水平高于血清樣本，占64.00%。
3 討論
本組能明確其常住地區的45例患者中，88.89%的患者常住地為鄉村，76.00%的患者有寵物接觸史。推測這些眼弓蛔蟲病的發生可能與寵物豢養逐漸增多，而鄉村的寵物驅蟲及公共衛生并未受到充分重視有關。美國疾病控制中心曾報道美國南部的發病率高于北部[7]。我們對患者的常住地省市進行分析，發現華東地區占大多數。由于到我院眼科就診的患者大部分來自華東地區，尚不能認為華東地區人群具有較高的流行率，還有待于全國范圍內進一步流行病學調查的研究。患者平均病程為(10.6±19.7)個月，近一半的患者從發病到確診的時間都超過半年。這可能與鄉村地區的醫療條件不發達或者基層醫院醫生缺少對眼弓蛔蟲病的診斷經驗有關。與發達國家相比，我國眼弓蛔蟲病患者的臨床癥狀往往更為嚴重，這與疾病得不到及時診斷、治療有很大關系[8]。
弓蛔蟲的血清流行病學調查結果在不同國家、地區、人群中的差異較大[9-12]。有研究發現，成年人陽性率為4%~46%，學齡兒童可高達77.6%[13]。本研究結果顯示，血清對照組患者的血清犬弓蛔蟲特異性IgG陽性率為2.63%，較文獻報道結果偏低。但這可能與本研究樣本量較小，且缺乏足夠例數的各省市鄉村地區兒童作為對照，不能客觀估計國內弓蛔蟲的血清陽性率有關。尚需對不同地區的人群進行大樣本的血清流行病學調查來進一步研究。
Akiyama和Ohta[14]檢測了被感染了犬弓蛔蟲的兔眼內液特異性IgG、IgA、IgM、IgE，發現僅有IgG具有診斷價值。本研究結果顯示，眼弓蛔蟲病患者的血清及眼內液均可出現犬弓蛔蟲特異性IgG水平的增高，64.00%的患者眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG水平要高于血清樣本，并且眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG陽性率也明顯高于血清樣本。通過配對檢測患者血清及眼內液樣本，我們發現32.00%的患者血清犬弓蛔蟲特異性IgG陰性，而眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG為陽性。意味著如果僅依靠血清抗體檢測，則可能有32.00%的患者漏診。de Visser等[13]報道了3例眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG陽性的兒童，其血清檢測結果均為陰性，認為檢測眼內液特異性抗體有重要的臨床價值。我們分析認為眼內液樣本陽性而血清樣本陰性的現象可能是由于病原體局限于眼部，外部感染受控制后，外周血中的特異性IgG出現衰減。
本研究結果表明，眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG抗體檢測相對于血清具有更高的檢出率；眼內液與血清犬弓蛔蟲特異性IgG抗體的共同檢測可能具有更高的診斷價值，有助于非典型病例的診斷，提升臨床眼科醫生對眼弓蛔蟲病的診斷經驗。
眼弓蛔蟲病是主要由犬或貓的蛔蟲幼蟲侵犯眼內組織引起的感染性疾病，可造成嚴重的視力損害，甚至致盲[1-3]。臨床上對其診斷主要依賴特征性的臨床癥狀，但部分患者臨床表現并不典型且缺少特異性，容易誤診或漏診，利用實驗室檢查來輔助診斷有重要的臨床意義。目前實驗室檢查的主要方法是以犬弓蛔蟲幼蟲排泌抗原包被固相，檢測血清中針對幼蟲的特異性抗體[4]。然而有部分患者血清的弓蛔蟲IgG抗體表現為陰性或低滴度，為臨床診斷帶來困難。有研究發現，眼內液的弓蛔蟲IgG抗體陽性可作為實驗診斷的重要依據[5, 6]。為驗證眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG抗體檢測在眼弓蛔蟲病實驗診斷中的價值，我們對一組眼弓蛔蟲病患者的血清及眼內液樣本同時進行了犬弓蛔蟲特異性IgG抗體水平檢測。現將結果報道如下。
1 對象和方法
2009年11月至2014年7月在復旦大學附屬眼耳鼻喉科醫院眼科確診為眼弓蛔蟲病的50例患者50只眼(眼弓蛔蟲病組)納入本研究。其中，男性32例，占64.00%；女性18例，占36.00%；年齡2～35歲，平均年齡11.44歲，中位年齡8.5歲。以年齡≥18歲為成年。未成年患者41例，占82.00%；成年患者9例，占18.00%。未成年患者發病率較成年患者偏高，差異有統計學意義(χ2=38.44，P＜0.05)。未成年患者中男性發病率明顯高于女性，差異也有統計學意義(χ2=9.558，P＜0.05)(表 1)。患者病程為＜1周~10年，平均病程為(10.6±19.7)個月。45例患者能明確其常住地區，其中常住在鄉村地區40例，占88.89%；華東地區46例，占92.00%，華中地區4例，占8.00%。38例患者有貓狗接觸史，占76.00%。
表1
未成年與成年患者一般情況比較
所有患者均符合眼弓蛔蟲病的診斷標準，即后極部或周邊部肉芽腫伴玻璃體牽引條索，或中至重度玻璃體炎性反應伴視網膜炎性團塊，并排除其他病因[1]。納入152例在我院耳鼻喉科就診的患者作為血清對照組。其中，男性94例，女性58例；年齡1～79歲，平均年齡(26.51±20.05)歲。未成年患者69例，占45.39%；成年患者83例，占54.61%。同時納入70例眼科其他病患者作為眼內液對照組。其中，白內障26例，青光眼20例，細菌性眼內炎10例，急性視網膜壞死14例。
經我院倫理委員會批準并獲得所有患者的知情同意后，收集眼內液100μl及靜脈血3 ml，靜脈血離心后分離血清。眼弓蛔蟲病組收集房水樣本28份，玻璃體液樣本22份，血清樣本50份。眼內液對照組收集白內障、青光眼患者的房水樣本，共46份；收集細菌性眼內炎、急性視網膜壞死患者的玻璃體液樣本，共24份。血清對照組收集血清樣本共152份。采用Toxocara Canis酶聯免疫吸附試驗試劑盒(國藥控股公司)檢測患者眼內液及血清中犬弓蛔蟲特異性IgG抗體的陽性率。檢測步驟根據試劑盒說明書進行，眼內液與血清樣本采取相同的稀釋方法。酶標儀型號為Tecan Sunrise(瑞士TECAN貿易有限公司)。抗體水平用U值表示，U=標本吸光度[A，舊稱光密度(OD)]值×10/臨界值。根據試劑盒使用說明，血清U值大于10時為陽性，小于等于10時為陰性。眼內液U值大于眼內液對照組房水或玻璃體液樣本的平均U值加2倍標準差為陽性，小于或與其相等時為陰性。同時對眼弓蛔蟲病組患者的血清及眼內液樣本進行配對檢測，對比分析兩者之間的犬弓蛔蟲特異性IgG水平的差異。
采用IBM SPSS Statistics 19統計軟件進行統計學分析。組間比較采用卡方檢驗和Mann-Whitney U檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。
2 結果
眼弓蛔蟲病組50例患者中，血清犬弓蛔蟲特異性IgG陽性34例，陽性率68.00%；U值為20.42±17.01。血清對照組152例患者中，血清犬弓蛔蟲特異性IgG陽性4例，陽性率為2.63%；U值為2.37±2.71。其中，未成年、成年患者各2例；未成年患者與成年患者血清犬弓蛔蟲特異性IgG陽性率比較，差異無統計學意義(χ2=0.103，P=0.751)。與血清對照組比較，眼弓蛔蟲病組患者血清的特異性IgG水平明顯偏高，差異有統計學意義(Z=8.962，P=0.000)(圖 1)。
圖1
眼弓蛔蟲病組與血清對照組患者血清犬弓蛔蟲特異性IgG抗體水平比較
眼弓蛔蟲病組50例患者中，眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG陽性44例，陽性率88.00%；U值為25.72±23.04。眼內液對照組未見眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG陽性者，U值為0.69±0.34。與眼內液對照組比較，眼弓蛔蟲病組患者眼內液的特異性IgG水平明顯偏高，差異有統計學意義(Z=8.120，P=0.000)(圖 2)。
圖2
眼弓蛔蟲病組與眼內液對照組患者眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG抗體水平比較
眼弓蛔蟲病組50例患者中，血清及眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG均為陽性者28例，占56.00%；血清犬弓蛔蟲特異性IgG陽性，而眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG陰性者6例，占12.00%；血清犬弓蛔蟲特異性IgG陰性，而眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG陽性者16例，占32.00%。血清與眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG陽性率比較，差異有統計學意義(χ2=4.720，P=0.028)。
眼弓蛔蟲病組患者的血清及眼內液樣本配對檢測結果顯示，32例患者的眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG水平高于血清樣本，占64.00%。
3 討論
本組能明確其常住地區的45例患者中，88.89%的患者常住地為鄉村，76.00%的患者有寵物接觸史。推測這些眼弓蛔蟲病的發生可能與寵物豢養逐漸增多，而鄉村的寵物驅蟲及公共衛生并未受到充分重視有關。美國疾病控制中心曾報道美國南部的發病率高于北部[7]。我們對患者的常住地省市進行分析，發現華東地區占大多數。由于到我院眼科就診的患者大部分來自華東地區，尚不能認為華東地區人群具有較高的流行率，還有待于全國范圍內進一步流行病學調查的研究。患者平均病程為(10.6±19.7)個月，近一半的患者從發病到確診的時間都超過半年。這可能與鄉村地區的醫療條件不發達或者基層醫院醫生缺少對眼弓蛔蟲病的診斷經驗有關。與發達國家相比，我國眼弓蛔蟲病患者的臨床癥狀往往更為嚴重，這與疾病得不到及時診斷、治療有很大關系[8]。
弓蛔蟲的血清流行病學調查結果在不同國家、地區、人群中的差異較大[9-12]。有研究發現，成年人陽性率為4%~46%，學齡兒童可高達77.6%[13]。本研究結果顯示，血清對照組患者的血清犬弓蛔蟲特異性IgG陽性率為2.63%，較文獻報道結果偏低。但這可能與本研究樣本量較小，且缺乏足夠例數的各省市鄉村地區兒童作為對照，不能客觀估計國內弓蛔蟲的血清陽性率有關。尚需對不同地區的人群進行大樣本的血清流行病學調查來進一步研究。
Akiyama和Ohta[14]檢測了被感染了犬弓蛔蟲的兔眼內液特異性IgG、IgA、IgM、IgE，發現僅有IgG具有診斷價值。本研究結果顯示，眼弓蛔蟲病患者的血清及眼內液均可出現犬弓蛔蟲特異性IgG水平的增高，64.00%的患者眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG水平要高于血清樣本，并且眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG陽性率也明顯高于血清樣本。通過配對檢測患者血清及眼內液樣本，我們發現32.00%的患者血清犬弓蛔蟲特異性IgG陰性，而眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG為陽性。意味著如果僅依靠血清抗體檢測，則可能有32.00%的患者漏診。de Visser等[13]報道了3例眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG陽性的兒童，其血清檢測結果均為陰性，認為檢測眼內液特異性抗體有重要的臨床價值。我們分析認為眼內液樣本陽性而血清樣本陰性的現象可能是由于病原體局限于眼部，外部感染受控制后，外周血中的特異性IgG出現衰減。
本研究結果表明，眼內液犬弓蛔蟲特異性IgG抗體檢測相對于血清具有更高的檢出率；眼內液與血清犬弓蛔蟲特異性IgG抗體的共同檢測可能具有更高的診斷價值，有助于非典型病例的診斷，提升臨床眼科醫生對眼弓蛔蟲病的診斷經驗。
