引用本文： 翁銘, 陳長征, 范雯, 易佐慧子, 鄭紅梅. 正常人眼Henle纖維層頻域光相干斷層掃描圖像特征觀察. 中華眼底病雜志, 2014, 30(6): 545-548. doi: 10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2014.06.003 復制
Henle纖維層(HFL)是由光感受器細胞軸索形成的呈放射狀傾斜走形的組織結構，為外叢狀層(OPL)的外側部分。既往認為光相干斷層掃描(OCT)中外界膜(ELM)前的弱反射來自于外核層(ONL)，且并不能觀察到HFL[1, 2]。新一代頻域OCT(SD-OCT)在活體視網膜及黃斑病變中的檢測技術接近組織病理學檢查水平[3]，通過改變探測光的入射角度，可成功觀察到HFL，并證實ELM前弱反射信號來自ONL與HFL[4, 5]。為明確ELM前弱反射信號的來源，我們采用第4代CirrusM HD-OCT儀對一組受檢眼進行了掃描，通過改變光線入射角度，觀察其HFL形態特征。現將結果報道如下。
1 對象和方法
2011年8～12月在我院眼科就診經常規檢查受檢眼無異常的志愿者24名28只眼納入研究。其中，男性15例16只眼，女性9例12只眼；年齡20～50歲，平均年齡(35.51±3.54)歲；屈光度-2.0～+2.0D, 平均屈光度(-0.89±1.15) D。均行矯正視力、眼壓、裂隙燈顯微鏡、直接檢眼鏡、視野、SD-OCT檢查。納入標準：(1)矯正視力＞1.0，眼壓、視野檢查結果正常；(2)OCT檢查平均視網膜厚度無異常；(3)雙眼眼位正常，中心固視良好。眼外傷、內眼手術史，青光眼、各種類型黃斑出血及滲出、黃斑水腫、脈絡膜新生血管、黃斑前膜者除外。所有受檢者均被告知本研究各項相關事宜，并獲得其知情同意。
采用美國Carl Zeiss公司CirrusM HD-OCT儀5線高清單線掃描模式對黃斑區進行掃描。內核層及ONL為弱反射信號區；神經纖維層、內叢狀層、OPL、ELM及視網膜色素上皮(RPE)層為強反射信號區；HFL根據視標位置不同導致反射信號強弱的不同進行定義[4-7]。依照視標位置將受檢眼分為A、B、C組，各組均為28只眼。檢查前復方托吡卡胺滴眼液散瞳，檢查時瞳孔直徑不低于8 mm。A、B、C組視標分別位于瞳孔中央、瞳孔近顳側邊緣、瞳孔近鼻側邊緣。檢查時采用外固視方法，選取OCT圖像最清晰、穩定，掃描信號強度≥6的圖像儲存于計算機，對獲得的圖像進行HFL形態學觀察；并手動測量距黃斑中心凹0.75、1.50 mm處HFL、ONL、OPL厚度。以黃斑中心凹或其軸線為頂點，手動畫出OPL、ONL及HFL 0.75、1.50 mm處切線，并以與切線垂直至該層頂點距離為厚度值，每只眼測量3次以上, 取其平均值作為最終數值。
采用SPSS 18.0統計軟件進行統計學分析處理。各層組織厚度采用均數±標準差(
2 結果
A組受檢眼玻璃體腔呈一暗區，玻璃體視網膜交界面通過暗區與視網膜內界強反射層形成對比。視網膜前后界為強反射層，前界為神經纖維層，后界為RPE-脈絡膜毛細血管層；中等反射為內叢狀層及OPL，呈灰色光帶；最弱反射為光感受器細胞層和內核層。黃斑中心凹呈一凹陷，表現為一層較弱的光反射(圖 1)。B、C組受檢眼可見降低側(視標對側)OPL較視標側OPL厚度明顯增加；ONL厚度較對側ONL厚度明顯變薄(圖 2，3)。B、C組受檢眼均可見視標一側ELM與OPL間弱反射信號區存在兩種不同信號強度的組織結構，且外側部分組織信號強度略高于內側組織(圖 4)。
圖1
A組受檢眼SD-OCT像。強反射信號為OPL(細白箭)，弱反射信號為ONL(黑箭)，RPE層前強反射信號為ELM(白箭頭)??圖 2??C組受檢眼SD-OCT像。強反射信號為OPL(白箭)，弱反射信號為ONL(黑箭)，RPE層前強反射信號為ELM(白箭頭)??圖 3??B組受檢眼SD-OCT像。強反射信號為OPL(白箭)，弱反射信號為ONL(黑箭)，ONL外側強反射信號為ELM(白箭頭)??圖 4??B組受檢眼顳側SD-OCT像。強反射信號為OPL(白箭)，弱反射信號為ELM(黑箭)，OPL與ELM見分層現象，弱反射信號為HFL(黑箭頭)，稍強反射信號為ONL(白箭頭)
距黃斑中心凹0.75 mm，A、B、C組顳側平均OPL厚度分別為(22.37±6.48)、(19.09±7.08)、(80.29±9.73)μm；C組OPL厚度最厚，差異有統計學意義(F=532.97，P＜0.01)。鼻側OPL厚度分別為(23.18±8.27)、(76.12±7.83)、(23.51±9.19) μm；B組OPL厚度最厚，差異有統計學意義(F=364.16，P＜0.01)。A組顳側、鼻側平均ONL厚度最厚，分別為(84.26±4.95)、(84.46±4.67) μm。與B、C組同側平均OLN厚度比較，差異有統計學意義(F顳側=1 010.64，F鼻側=1 323.13；P＜0.01)(表 1)。
表1
距中心凹0.75 mm處不同反射強度組織厚度[(距黃斑中心凹1.50 mm，A、B、C組鼻側平均OPL厚度分別為(23.01±8.31)、(67.24±9.68)、(17.94±4.24) μm；3組間鼻側平均OPL厚度比較，差異有統計學意義(F=341.80，P＜0.01)。顳側平均OPL厚度分別為(23.51±9.19)、(19.08±7.10)、(60.72±7.83) μm。3組間顳側平均OPL厚度比較，差異有統計學意義(F=532.97，P＜0.01)。A組與B、C組之間同側ONL比較，差異有統計學意義(F顳側=444.40，F鼻側=687.84；P＜0.01)(表 2)。
表2
距中心凹1.50 mm處不同反射強度組織厚度[(3 討論
視網膜各解剖層次在SD-OCT圖像上成像是由視網膜的組織結構與低相干光的相互作用的結果。這種低相干光通過視網膜各個解剖層次結構時，發生傳導、吸收、散射和背向散射的綜合作用決定了相應解剖層次的反射性[7, 8]。因此，背向散射信號是OCT成像的前提條件[9, 10]。而背向散射信號不僅與視網膜各層組織特性有關，也與其在傳導介質中的丟失密切相關。因此，反射光信號與探測光及所測組織角度密切相關[9-11]。
Soliman等[12]認為，OCT圖像上ELM與OPL間弱反射信號區域為ONL與HFL的混合區域，但一直缺乏足夠的影像學資料。HFL是OPL的外側部分，其平均長度為406～675 μm，參與視細胞抗氧化損傷機制[13]。有學者指出，HFL與多種眼底疾病關系密切，如視網膜囊樣水腫、中心性漿液性脈絡膜視網膜病變、特發性黃斑裂孔等，可以反映黃斑區視錐細胞功能情況[14-16]。因此，HFL在光感受器細胞保護機制中占有重要地位。然而局限于第4代OCT技術水平及HFL獨特的排列方式，既往對OCT圖像特征的觀察往往忽視HFL的存在。
本研究結果顯示，當改變OCT視標位置時，視網膜OCT圖像產生明顯傾斜，視標一側視網膜明顯抬高，且隨離心度增加，抬高程度亦增加，這與地相干光的光程差有一定關系[11]；同時，抬高側ELM與OPL間弱反射信號區呈現“分層現象”, 即ELM與OPL間弱反射信號區可見反射信號分層，上方組織信號略弱于下方組織信號，提示OPL與ELM間弱反射信號區可能有兩種不同光學特性的組織成分存在。我們認為該層組織即可能為HFL，這與國內外部分學者的觀點較為一致[5, 12, 17]。本研究中，3組間距中心凹0.75 mm處顳側ONL厚度差異有統計學意義；B、C組間ONL厚度差異較小。這可能與我們將視標側ELM前的弱反射區域嚴格區分為ONL與HFL兩層所致，而非籠統歸為ONL。
有學者認為，OPL由光感受細胞突觸層與HFL共同組成，且HFL為OPL的外側2/3部分[5]。本研究中，距黃斑中心凹0.75 mm處B、C組HFL厚度分別為54.24、54.47 μm，而同側OPL厚度分別為19.09、23.51 μm，其比值較為接近2/3；此外，距黃斑中心凹1.5 mm處HFL厚度也接近2/3。結果也間接證實此層組織可能為HFL。因此，我們認為改變入射光角度，發現的另一光學特性不同的組織即為HFL。
本研究通過改變視標角度，測量3組距黃斑中心凹0.75 mm處視網膜OPL厚度，結果發現3組同側OPL厚度組間數據比較存在較大差異，且均顯示改變視標位置后，降低較其他兩組OPL明顯增加。1.50 mm處同側OPL厚度測量數據亦存在類似現象。因此，改變入射光角度，OPL厚度發生明顯變化，也間接提示常規OCT操作下所觀察到的OPL可能僅為OPL的部分組織。這可能是由于改變了入射光線與HFL的角度，使之與HFL呈垂直或近垂直角度，其反射信號增強所致[4, 5, 8, 16, 17]。而牟曉月等[18]在對中心性漿液性脈絡膜視網膜病變患者的SD-OCT圖像觀察中也發現，OPL的中強反射帶增寬，并認為這可能與OPL方向發生改變所致，與本研究通過改變OCT掃描光束的角度觀察HFL的原理一致。因此，通過改變OCT入射光的角度，發現HFL是可以實現的。本研究也存在一定不足，如視標的位置均位于瞳孔的邊緣，未能形成統一的量化標準；針對HFL及OPL的測量均為手動測量，導致的主觀重復性欠佳等，都可能會影響不同位點下組織厚度的測量結果。
Henle纖維層(HFL)是由光感受器細胞軸索形成的呈放射狀傾斜走形的組織結構，為外叢狀層(OPL)的外側部分。既往認為光相干斷層掃描(OCT)中外界膜(ELM)前的弱反射來自于外核層(ONL)，且并不能觀察到HFL[1, 2]。新一代頻域OCT(SD-OCT)在活體視網膜及黃斑病變中的檢測技術接近組織病理學檢查水平[3]，通過改變探測光的入射角度，可成功觀察到HFL，并證實ELM前弱反射信號來自ONL與HFL[4, 5]。為明確ELM前弱反射信號的來源，我們采用第4代CirrusM HD-OCT儀對一組受檢眼進行了掃描，通過改變光線入射角度，觀察其HFL形態特征。現將結果報道如下。
1 對象和方法
2011年8～12月在我院眼科就診經常規檢查受檢眼無異常的志愿者24名28只眼納入研究。其中，男性15例16只眼，女性9例12只眼；年齡20～50歲，平均年齡(35.51±3.54)歲；屈光度-2.0～+2.0D, 平均屈光度(-0.89±1.15) D。均行矯正視力、眼壓、裂隙燈顯微鏡、直接檢眼鏡、視野、SD-OCT檢查。納入標準：(1)矯正視力＞1.0，眼壓、視野檢查結果正常；(2)OCT檢查平均視網膜厚度無異常；(3)雙眼眼位正常，中心固視良好。眼外傷、內眼手術史，青光眼、各種類型黃斑出血及滲出、黃斑水腫、脈絡膜新生血管、黃斑前膜者除外。所有受檢者均被告知本研究各項相關事宜，并獲得其知情同意。
采用美國Carl Zeiss公司CirrusM HD-OCT儀5線高清單線掃描模式對黃斑區進行掃描。內核層及ONL為弱反射信號區；神經纖維層、內叢狀層、OPL、ELM及視網膜色素上皮(RPE)層為強反射信號區；HFL根據視標位置不同導致反射信號強弱的不同進行定義[4-7]。依照視標位置將受檢眼分為A、B、C組，各組均為28只眼。檢查前復方托吡卡胺滴眼液散瞳，檢查時瞳孔直徑不低于8 mm。A、B、C組視標分別位于瞳孔中央、瞳孔近顳側邊緣、瞳孔近鼻側邊緣。檢查時采用外固視方法，選取OCT圖像最清晰、穩定，掃描信號強度≥6的圖像儲存于計算機，對獲得的圖像進行HFL形態學觀察；并手動測量距黃斑中心凹0.75、1.50 mm處HFL、ONL、OPL厚度。以黃斑中心凹或其軸線為頂點，手動畫出OPL、ONL及HFL 0.75、1.50 mm處切線，并以與切線垂直至該層頂點距離為厚度值，每只眼測量3次以上, 取其平均值作為最終數值。
采用SPSS 18.0統計軟件進行統計學分析處理。各層組織厚度采用均數±標準差(
2 結果
A組受檢眼玻璃體腔呈一暗區，玻璃體視網膜交界面通過暗區與視網膜內界強反射層形成對比。視網膜前后界為強反射層，前界為神經纖維層，后界為RPE-脈絡膜毛細血管層；中等反射為內叢狀層及OPL，呈灰色光帶；最弱反射為光感受器細胞層和內核層。黃斑中心凹呈一凹陷，表現為一層較弱的光反射(圖 1)。B、C組受檢眼可見降低側(視標對側)OPL較視標側OPL厚度明顯增加；ONL厚度較對側ONL厚度明顯變薄(圖 2，3)。B、C組受檢眼均可見視標一側ELM與OPL間弱反射信號區存在兩種不同信號強度的組織結構，且外側部分組織信號強度略高于內側組織(圖 4)。
圖1
A組受檢眼SD-OCT像。強反射信號為OPL(細白箭)，弱反射信號為ONL(黑箭)，RPE層前強反射信號為ELM(白箭頭)??圖 2??C組受檢眼SD-OCT像。強反射信號為OPL(白箭)，弱反射信號為ONL(黑箭)，RPE層前強反射信號為ELM(白箭頭)??圖 3??B組受檢眼SD-OCT像。強反射信號為OPL(白箭)，弱反射信號為ONL(黑箭)，ONL外側強反射信號為ELM(白箭頭)??圖 4??B組受檢眼顳側SD-OCT像。強反射信號為OPL(白箭)，弱反射信號為ELM(黑箭)，OPL與ELM見分層現象，弱反射信號為HFL(黑箭頭)，稍強反射信號為ONL(白箭頭)
距黃斑中心凹0.75 mm，A、B、C組顳側平均OPL厚度分別為(22.37±6.48)、(19.09±7.08)、(80.29±9.73)μm；C組OPL厚度最厚，差異有統計學意義(F=532.97，P＜0.01)。鼻側OPL厚度分別為(23.18±8.27)、(76.12±7.83)、(23.51±9.19) μm；B組OPL厚度最厚，差異有統計學意義(F=364.16，P＜0.01)。A組顳側、鼻側平均ONL厚度最厚，分別為(84.26±4.95)、(84.46±4.67) μm。與B、C組同側平均OLN厚度比較，差異有統計學意義(F顳側=1 010.64，F鼻側=1 323.13；P＜0.01)(表 1)。
表1
距中心凹0.75 mm處不同反射強度組織厚度[(距黃斑中心凹1.50 mm，A、B、C組鼻側平均OPL厚度分別為(23.01±8.31)、(67.24±9.68)、(17.94±4.24) μm；3組間鼻側平均OPL厚度比較，差異有統計學意義(F=341.80，P＜0.01)。顳側平均OPL厚度分別為(23.51±9.19)、(19.08±7.10)、(60.72±7.83) μm。3組間顳側平均OPL厚度比較，差異有統計學意義(F=532.97，P＜0.01)。A組與B、C組之間同側ONL比較，差異有統計學意義(F顳側=444.40，F鼻側=687.84；P＜0.01)(表 2)。
表2
距中心凹1.50 mm處不同反射強度組織厚度[(3 討論
視網膜各解剖層次在SD-OCT圖像上成像是由視網膜的組織結構與低相干光的相互作用的結果。這種低相干光通過視網膜各個解剖層次結構時，發生傳導、吸收、散射和背向散射的綜合作用決定了相應解剖層次的反射性[7, 8]。因此，背向散射信號是OCT成像的前提條件[9, 10]。而背向散射信號不僅與視網膜各層組織特性有關，也與其在傳導介質中的丟失密切相關。因此，反射光信號與探測光及所測組織角度密切相關[9-11]。
Soliman等[12]認為，OCT圖像上ELM與OPL間弱反射信號區域為ONL與HFL的混合區域，但一直缺乏足夠的影像學資料。HFL是OPL的外側部分，其平均長度為406～675 μm，參與視細胞抗氧化損傷機制[13]。有學者指出，HFL與多種眼底疾病關系密切，如視網膜囊樣水腫、中心性漿液性脈絡膜視網膜病變、特發性黃斑裂孔等，可以反映黃斑區視錐細胞功能情況[14-16]。因此，HFL在光感受器細胞保護機制中占有重要地位。然而局限于第4代OCT技術水平及HFL獨特的排列方式，既往對OCT圖像特征的觀察往往忽視HFL的存在。
本研究結果顯示，當改變OCT視標位置時，視網膜OCT圖像產生明顯傾斜，視標一側視網膜明顯抬高，且隨離心度增加，抬高程度亦增加，這與地相干光的光程差有一定關系[11]；同時，抬高側ELM與OPL間弱反射信號區呈現“分層現象”, 即ELM與OPL間弱反射信號區可見反射信號分層，上方組織信號略弱于下方組織信號，提示OPL與ELM間弱反射信號區可能有兩種不同光學特性的組織成分存在。我們認為該層組織即可能為HFL，這與國內外部分學者的觀點較為一致[5, 12, 17]。本研究中，3組間距中心凹0.75 mm處顳側ONL厚度差異有統計學意義；B、C組間ONL厚度差異較小。這可能與我們將視標側ELM前的弱反射區域嚴格區分為ONL與HFL兩層所致，而非籠統歸為ONL。
有學者認為，OPL由光感受細胞突觸層與HFL共同組成，且HFL為OPL的外側2/3部分[5]。本研究中，距黃斑中心凹0.75 mm處B、C組HFL厚度分別為54.24、54.47 μm，而同側OPL厚度分別為19.09、23.51 μm，其比值較為接近2/3；此外，距黃斑中心凹1.5 mm處HFL厚度也接近2/3。結果也間接證實此層組織可能為HFL。因此，我們認為改變入射光角度，發現的另一光學特性不同的組織即為HFL。
本研究通過改變視標角度，測量3組距黃斑中心凹0.75 mm處視網膜OPL厚度，結果發現3組同側OPL厚度組間數據比較存在較大差異，且均顯示改變視標位置后，降低較其他兩組OPL明顯增加。1.50 mm處同側OPL厚度測量數據亦存在類似現象。因此，改變入射光角度，OPL厚度發生明顯變化，也間接提示常規OCT操作下所觀察到的OPL可能僅為OPL的部分組織。這可能是由于改變了入射光線與HFL的角度，使之與HFL呈垂直或近垂直角度，其反射信號增強所致[4, 5, 8, 16, 17]。而牟曉月等[18]在對中心性漿液性脈絡膜視網膜病變患者的SD-OCT圖像觀察中也發現，OPL的中強反射帶增寬，并認為這可能與OPL方向發生改變所致，與本研究通過改變OCT掃描光束的角度觀察HFL的原理一致。因此，通過改變OCT入射光的角度，發現HFL是可以實現的。本研究也存在一定不足，如視標的位置均位于瞳孔的邊緣，未能形成統一的量化標準；針對HFL及OPL的測量均為手動測量，導致的主觀重復性欠佳等，都可能會影響不同位點下組織厚度的測量結果。
