引用本文: 楊娟, 杜磊, 曾思雨, 邢怡橋. 富血小板纖維蛋白膜填塞聯合空氣填充治療巨大黃斑裂孔的療效觀察. 中華眼底病雜志, 2022, 38(4): 280-284. doi: 10.3760/cma.j.cn511434-20211021-00597 復制
黃斑裂孔(MH)是導致患者視力下降和視物變形的常見原因。成功閉合MH可提高視敏度,改善視覺相關生活質量[1]。玻璃體切割手術(PPV)聯合內界膜(ILM)剝除是目前治療MH的標準治療模式,手術后裂孔閉合率可達90%以上[2-3]。但直徑>400 μm的大直徑MH,其閉合率為40%~80%[4]。針對大直徑MH,有學者提出在PPV中不完全剝除黃斑區ILM,而是殘留裂孔邊緣周圍少量ILM,并將其翻轉覆蓋于裂孔上,手術完畢眼內空氣填充,手術后裂孔閉合率和視功能改善得到提升[5]。富血小板纖維蛋白(PRF)為富血小板和纖維蛋白的濃縮物,可提供纖維蛋白支架和各種生長因子,有利于裂孔愈合,目前已成功應用于整形外科、口腔頜面外科、骨科等領域中[6]。Koytak等[7]將PRF膜應用于難治性MH手術中,手術后患者裂孔均閉合且視功能恢復良好,但該研究僅為2例患者的案例報道。為進一步驗證PRF膜應用于難治性MH手術的可行性,本研究對比觀察了PPV中PRF膜填塞或ILM翻轉填塞聯合空氣填充治療巨大MH的療效。現將結果報道如下。
1 對象和方法
前瞻性病例對照研究。本研究經武漢大學人民醫院倫理委員會審批(批準號:WDRY2021-K120);遵循《赫爾辛基宣言》原則;所有患者均獲知情并簽署書面知情同意書。
2019年10月1日至2021年2月1日于武漢大學人民醫院眼科檢查確診的巨大MH患者56例56只眼納入本研究。其中,男性17例17只眼,女性39例39只眼;年齡(64.23±9.30)歲(43~80歲)。患眼裂孔直徑(827.36±83.16)μm(705~1 027 μm)。
納入標準:(1)光相干斷層掃描(OCT)檢查確診MH,且裂孔最小直徑>700 μm(圖1);(2)隨訪時間≥6個月。排除標準:(1)合并其他玻璃體視網膜疾病,如黃斑變性、視網膜脫離等;(2)患眼近視屈光度>6.00 D和(或)眼軸長度(AL)>26 mm;(3)既往有白內障手術以外的眼部手術史或眼部外傷史;(4)手術前病原檢測有陽性指標或存在其他感染者;(5)無法配合或圖像質量差。

患眼均行最佳矯正視力(BCVA)、電腦驗光、裂隙燈顯微鏡、間接檢眼鏡、OCT、OCT血管成像(OCTA)檢查以及AL測量。BCVA檢查采用標準對數視力表進行,統計時換算為最小分辨角對數(logMAR)視力;電腦自動驗光由同一名具有豐富經驗的驗光師行主覺驗光。采用德國Zeiss公司Cirrus5000 OCT對患眼黃斑區進行掃描,應用設備軟件自帶卡尺功能測量裂孔最小直徑。采用美國Optovue公司的Angio Vue儀行OCTA檢查。選擇Angio Retina QuickVue3 mm×3 mm模式,系統自動獲取視網膜黃斑中心凹結構圖及血流成像圖。采用設備自帶軟件測量以黃斑中心凹為中心直徑1 mm×1 mm區域內脈絡膜毛細血管層血流面積(CBFA)。檢查由同一名熟練操作者完成。
采用美國國家眼科學會視功能問卷NEI VFQ-25評估患者視覺相關生活質量,包括整體健康、總體視力、眼部疼痛、近視力、遠視力、社會功能、精神健康、角色困難、依賴、駕駛、色覺、周邊視力等12項指標,其中“駕駛分量表”已被證實為低效度和低信度而不包含在此次問卷中。
按照隨機分配原則將患者分為PRF組和ILM組,各28例28只眼。兩組患者年齡、性別構成比、裂孔最小直徑、logMAR BCVA、CBFA、NEI VFQ-25得分比較,差異均無統計學意義(P>0.05)(表1)。

PRF膜制備。手術前抽取患者外周靜脈血置于不含抗凝劑的5 ml試管中,美國Scilogex公司DMO421低速離心機,以離心半徑5 cm、3 000 r/min離心12 min,纖維蛋白凝塊濃縮在離心管底部的紅細胞和頂部的無細胞血漿之間;去除無細胞血漿,使用鑷子將血纖維蛋白凝塊與紅細胞機械分離,將其轉移至特制的PRF膜盒中輕輕按壓塑形得到具有一定彈性及韌性的PRF膜。
所有患眼均行標準經睫狀體平坦部三通道23G微創PPV。手術由同一名具有豐富經驗的眼底病外科醫生完成。手術中徹底清除玻璃體后皮質處,吲哚青綠輔助染色ILM,剝除黃斑區2~3個視盤直徑范圍的ILM。PRF組以PRF膜填塞裂孔,顯微鏡下將PRF膜修剪至裂孔大小,眼內鑷夾取PRF膜通過建立的23G通道送入玻璃體腔,由裂孔邊緣輕輕填塞于裂孔內。ILM組以ILM填塞裂孔,ILM不完全剝除,邊緣與裂孔邊緣相連,從四周翻轉相連的ILM瓣并花瓣樣填塞于裂孔內。充分氣液交換后填充無菌空氣。手術后保持俯臥位7 d。
手術后隨訪時間≥6個月。手術后7 d,1、6個月采用與手術前相同的設備和方法行相關檢查,觀察患眼BCVA變化、裂孔閉合形態、CBFA以及視覺相關生活質量改善情況。參照文獻[8]的標準,將裂孔解剖閉合狀態分為1型閉合、2型閉合和未閉合。1型閉合:裂孔兩端聯接且基本貼合在視網膜色素上皮(RPE)層上;2型閉合:裂孔兩端貼合RPE層,但兩端之間仍有距離;未閉合:MH兩端未聯結且仍抬高翹起,存在視網膜下液。
采用SPSS25.0軟件行統計學分析。計量資料以均數±標準差()表示。組間比較,符合正態分布的數據采用獨立樣本t檢驗,非正態分布的數據以中位數(四分位數間距)[M(QL,QU)]表示,采用Mann- Whitney U檢驗。組內比較,正態分布的數據采用配對樣本t檢驗,非正態分布數據采用Wilcoxon秩和檢驗。計數資料以頻數(率)表示,組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。
2 結果
手術后6個月,PRF組28只眼中,裂孔閉合(圖2)27只眼(96.4%,27/28),其中1型閉合、2型閉合分別為24、3只眼;未閉合1只眼(3.6%,1/28)。ILM組28只眼中,裂孔閉合26只眼(92.9%,26/28),其中1型閉合、2型閉合分別為22、4只眼;未閉合2只眼(7.1%,2/28)。

手術后6個月,PRF組、ILM組患眼間BCVA、CBFA、NEI VFQ-25得分比較,差異均無統計學意義(P>0.05)(表2)。

與手術前比較,PRF組、ILM組患眼手術后BCVA(Z=-4.636、-4.550)、CBFA(t=-27.115、-31.135)均顯著提高,NEI VFQ-25得分(t=-15.557、-10.675)顯著增加,差異均有統計學意義(P<0.05)(圖3)。

末次隨訪時,PRF組、ILM組患眼均未出現高眼壓、眼內炎、視網膜脫離等與手術相關的并發癥。
3 討論
經睫狀體扁平部PPV聯合ILM剝除是治療MH的標準手術方式,但對于大孔徑MH療效有限。Chhablani等[9]發現,MH直徑<300、600~900、>1 000 μm, 常規ILM剝除手術裂孔1型閉合率分別為100%、20%~80%、20%左右。目前由ILM剝除手術改進的ILM翻轉填塞已成為大孔徑MH的主流術式,實現了裂孔閉合率和手術后視功能的提升,但仍存在一定臨床應用限制[10]。首先游離一片合適的植片較困難,且植片存在向后翻轉、丟失和移位的問題,部分學者提出在ILM移植基礎上輔以重水、低分子粘彈劑、自體血等方法來穩定植片,但對于已經剝除過ILM或手術中ILM松脫的MH患者仍不適用[11-12]。
對于巨大MH的治療,有學者此前嘗試采用富血小板血漿等第一代自體血小板濃縮制品進行填塞,手術后其解剖閉合率為85%~93%,證實了血液制品應用于MH手術的有效性[13]。PRF是第二代濃縮血小板,其由纖維蛋白聚集形成的疏松立體網狀結構能將大量血小板和釋放的細胞因子、生長因子以化學鍵的方式結合,通過緩慢釋放,延長細胞因子和生長因子的作用時間,目前已廣泛應用于再生醫學領域[6]。因此,PRF膜填塞有望為治療巨大MH提供新的選擇。
本研究結果顯示,PRF膜填塞和ILM填塞的解剖和視覺結果相似,與手術前比較,患者手術后視力均得明顯提升、CBFA和NEI VFQ-25得分顯著增加,說明PRF膜填塞和ILM翻轉填塞均有利于裂孔的閉合,使得黃斑區血流灌注明顯增加,視功能得到恢復,視覺相關生活質量進一步改善,與Koytak等[7]研究結果一致。發生MH時,視網膜細胞暫時喪失功能,細胞新陳代謝減少,降低了對脈絡膜血液供應的需求,CBFA下降,NEI VFQ-25得分受視網膜功能影響而降低。裂孔閉合后,局部新陳代謝恢復,CBFA增加,從而更好地滋養組織,視網膜功能恢復,視覺相關生活質量提升[14-15]。PRF膜在局部環境中釋放出上皮生長因子、轉化生長因子和血小板衍生生長因子等高濃度生長因子,有利于推動光感受器細胞的再生,且PRF膜封閉MH可以防止玻璃體腔液體進入裂孔內,為細胞增生、遷移提供堅固的支架,有助于恢復中心凹結構。Burmeister等[16]體外??研究表明,自體血小板濃縮物能促進Müller細胞更好的增生活化和遷移,遷移活化的Müller細胞較穩定的Müller細胞產生更多的神經營養因子和堿性成纖維細胞生長因子,這些因子可抑制細胞凋亡、促進視神經元細胞和光感受器細胞再生和修復,利于裂孔的閉合和視力的改善。
對于因黃斑前膜、玻璃體黃斑牽拉綜合征、糖尿病黃斑水腫剝除過ILM或進行二次裂孔修復手術的MH患眼,ILM瓣技術已不適用,而后出現了自體晶狀體囊膜、自體游離神經感覺視網膜、羊膜等填塞替代物,但晶狀體囊膜瓣制作困難,自體游離神經感覺視網膜需要進行視網膜切除損傷較大,羊膜為異體成分,均存在應用限制[17]。PRF為自體血液制品,制備簡便,僅需在取血后迅速將其低速離心即可制得,相較于ILM瓣、晶狀體囊膜瓣、自體游離神經感覺視網膜等對手術者技術要求更低,具有明顯的應用優勢。
目前血液制品應用于MH的安全性仍存在質疑。Gamulescu等[18]報道1例使用第一代自體血小板濃縮物治療MH后出現視網膜脫離的病例,推測與自體血小板濃縮物引起的炎癥反應有關。與既往血液制品不同的是,PRF無需加入任何外源性抗凝劑和凝血酶,極大降低了發生免疫炎癥反應的可能性。本研究中PRF膜雖含有大量白細胞,但患者手術后并未出現高眼壓、眼內炎、視網膜脫離等并發癥。值得注意的是,PRF膜在長期保存的情況下仍存在一定的感染風險,可能會成為微生物生長的培養基,因此需嚴格進行無菌操作,制備后應該立即使用以減少感染的可能性。
本研究的不足之處在于樣本量較小,隨訪時間較短,尚需進一步大樣本、長時程研究。此外,未來研究可以進一步探究PRF膜在高度近視性MH、復發性MH等其他類型的難治性MH中的手術效果。
黃斑裂孔(MH)是導致患者視力下降和視物變形的常見原因。成功閉合MH可提高視敏度,改善視覺相關生活質量[1]。玻璃體切割手術(PPV)聯合內界膜(ILM)剝除是目前治療MH的標準治療模式,手術后裂孔閉合率可達90%以上[2-3]。但直徑>400 μm的大直徑MH,其閉合率為40%~80%[4]。針對大直徑MH,有學者提出在PPV中不完全剝除黃斑區ILM,而是殘留裂孔邊緣周圍少量ILM,并將其翻轉覆蓋于裂孔上,手術完畢眼內空氣填充,手術后裂孔閉合率和視功能改善得到提升[5]。富血小板纖維蛋白(PRF)為富血小板和纖維蛋白的濃縮物,可提供纖維蛋白支架和各種生長因子,有利于裂孔愈合,目前已成功應用于整形外科、口腔頜面外科、骨科等領域中[6]。Koytak等[7]將PRF膜應用于難治性MH手術中,手術后患者裂孔均閉合且視功能恢復良好,但該研究僅為2例患者的案例報道。為進一步驗證PRF膜應用于難治性MH手術的可行性,本研究對比觀察了PPV中PRF膜填塞或ILM翻轉填塞聯合空氣填充治療巨大MH的療效。現將結果報道如下。
1 對象和方法
前瞻性病例對照研究。本研究經武漢大學人民醫院倫理委員會審批(批準號:WDRY2021-K120);遵循《赫爾辛基宣言》原則;所有患者均獲知情并簽署書面知情同意書。
2019年10月1日至2021年2月1日于武漢大學人民醫院眼科檢查確診的巨大MH患者56例56只眼納入本研究。其中,男性17例17只眼,女性39例39只眼;年齡(64.23±9.30)歲(43~80歲)。患眼裂孔直徑(827.36±83.16)μm(705~1 027 μm)。
納入標準:(1)光相干斷層掃描(OCT)檢查確診MH,且裂孔最小直徑>700 μm(圖1);(2)隨訪時間≥6個月。排除標準:(1)合并其他玻璃體視網膜疾病,如黃斑變性、視網膜脫離等;(2)患眼近視屈光度>6.00 D和(或)眼軸長度(AL)>26 mm;(3)既往有白內障手術以外的眼部手術史或眼部外傷史;(4)手術前病原檢測有陽性指標或存在其他感染者;(5)無法配合或圖像質量差。

患眼均行最佳矯正視力(BCVA)、電腦驗光、裂隙燈顯微鏡、間接檢眼鏡、OCT、OCT血管成像(OCTA)檢查以及AL測量。BCVA檢查采用標準對數視力表進行,統計時換算為最小分辨角對數(logMAR)視力;電腦自動驗光由同一名具有豐富經驗的驗光師行主覺驗光。采用德國Zeiss公司Cirrus5000 OCT對患眼黃斑區進行掃描,應用設備軟件自帶卡尺功能測量裂孔最小直徑。采用美國Optovue公司的Angio Vue儀行OCTA檢查。選擇Angio Retina QuickVue3 mm×3 mm模式,系統自動獲取視網膜黃斑中心凹結構圖及血流成像圖。采用設備自帶軟件測量以黃斑中心凹為中心直徑1 mm×1 mm區域內脈絡膜毛細血管層血流面積(CBFA)。檢查由同一名熟練操作者完成。
采用美國國家眼科學會視功能問卷NEI VFQ-25評估患者視覺相關生活質量,包括整體健康、總體視力、眼部疼痛、近視力、遠視力、社會功能、精神健康、角色困難、依賴、駕駛、色覺、周邊視力等12項指標,其中“駕駛分量表”已被證實為低效度和低信度而不包含在此次問卷中。
按照隨機分配原則將患者分為PRF組和ILM組,各28例28只眼。兩組患者年齡、性別構成比、裂孔最小直徑、logMAR BCVA、CBFA、NEI VFQ-25得分比較,差異均無統計學意義(P>0.05)(表1)。

PRF膜制備。手術前抽取患者外周靜脈血置于不含抗凝劑的5 ml試管中,美國Scilogex公司DMO421低速離心機,以離心半徑5 cm、3 000 r/min離心12 min,纖維蛋白凝塊濃縮在離心管底部的紅細胞和頂部的無細胞血漿之間;去除無細胞血漿,使用鑷子將血纖維蛋白凝塊與紅細胞機械分離,將其轉移至特制的PRF膜盒中輕輕按壓塑形得到具有一定彈性及韌性的PRF膜。
所有患眼均行標準經睫狀體平坦部三通道23G微創PPV。手術由同一名具有豐富經驗的眼底病外科醫生完成。手術中徹底清除玻璃體后皮質處,吲哚青綠輔助染色ILM,剝除黃斑區2~3個視盤直徑范圍的ILM。PRF組以PRF膜填塞裂孔,顯微鏡下將PRF膜修剪至裂孔大小,眼內鑷夾取PRF膜通過建立的23G通道送入玻璃體腔,由裂孔邊緣輕輕填塞于裂孔內。ILM組以ILM填塞裂孔,ILM不完全剝除,邊緣與裂孔邊緣相連,從四周翻轉相連的ILM瓣并花瓣樣填塞于裂孔內。充分氣液交換后填充無菌空氣。手術后保持俯臥位7 d。
手術后隨訪時間≥6個月。手術后7 d,1、6個月采用與手術前相同的設備和方法行相關檢查,觀察患眼BCVA變化、裂孔閉合形態、CBFA以及視覺相關生活質量改善情況。參照文獻[8]的標準,將裂孔解剖閉合狀態分為1型閉合、2型閉合和未閉合。1型閉合:裂孔兩端聯接且基本貼合在視網膜色素上皮(RPE)層上;2型閉合:裂孔兩端貼合RPE層,但兩端之間仍有距離;未閉合:MH兩端未聯結且仍抬高翹起,存在視網膜下液。
采用SPSS25.0軟件行統計學分析。計量資料以均數±標準差()表示。組間比較,符合正態分布的數據采用獨立樣本t檢驗,非正態分布的數據以中位數(四分位數間距)[M(QL,QU)]表示,采用Mann- Whitney U檢驗。組內比較,正態分布的數據采用配對樣本t檢驗,非正態分布數據采用Wilcoxon秩和檢驗。計數資料以頻數(率)表示,組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。
2 結果
手術后6個月,PRF組28只眼中,裂孔閉合(圖2)27只眼(96.4%,27/28),其中1型閉合、2型閉合分別為24、3只眼;未閉合1只眼(3.6%,1/28)。ILM組28只眼中,裂孔閉合26只眼(92.9%,26/28),其中1型閉合、2型閉合分別為22、4只眼;未閉合2只眼(7.1%,2/28)。

手術后6個月,PRF組、ILM組患眼間BCVA、CBFA、NEI VFQ-25得分比較,差異均無統計學意義(P>0.05)(表2)。

與手術前比較,PRF組、ILM組患眼手術后BCVA(Z=-4.636、-4.550)、CBFA(t=-27.115、-31.135)均顯著提高,NEI VFQ-25得分(t=-15.557、-10.675)顯著增加,差異均有統計學意義(P<0.05)(圖3)。

末次隨訪時,PRF組、ILM組患眼均未出現高眼壓、眼內炎、視網膜脫離等與手術相關的并發癥。
3 討論
經睫狀體扁平部PPV聯合ILM剝除是治療MH的標準手術方式,但對于大孔徑MH療效有限。Chhablani等[9]發現,MH直徑<300、600~900、>1 000 μm, 常規ILM剝除手術裂孔1型閉合率分別為100%、20%~80%、20%左右。目前由ILM剝除手術改進的ILM翻轉填塞已成為大孔徑MH的主流術式,實現了裂孔閉合率和手術后視功能的提升,但仍存在一定臨床應用限制[10]。首先游離一片合適的植片較困難,且植片存在向后翻轉、丟失和移位的問題,部分學者提出在ILM移植基礎上輔以重水、低分子粘彈劑、自體血等方法來穩定植片,但對于已經剝除過ILM或手術中ILM松脫的MH患者仍不適用[11-12]。
對于巨大MH的治療,有學者此前嘗試采用富血小板血漿等第一代自體血小板濃縮制品進行填塞,手術后其解剖閉合率為85%~93%,證實了血液制品應用于MH手術的有效性[13]。PRF是第二代濃縮血小板,其由纖維蛋白聚集形成的疏松立體網狀結構能將大量血小板和釋放的細胞因子、生長因子以化學鍵的方式結合,通過緩慢釋放,延長細胞因子和生長因子的作用時間,目前已廣泛應用于再生醫學領域[6]。因此,PRF膜填塞有望為治療巨大MH提供新的選擇。
本研究結果顯示,PRF膜填塞和ILM填塞的解剖和視覺結果相似,與手術前比較,患者手術后視力均得明顯提升、CBFA和NEI VFQ-25得分顯著增加,說明PRF膜填塞和ILM翻轉填塞均有利于裂孔的閉合,使得黃斑區血流灌注明顯增加,視功能得到恢復,視覺相關生活質量進一步改善,與Koytak等[7]研究結果一致。發生MH時,視網膜細胞暫時喪失功能,細胞新陳代謝減少,降低了對脈絡膜血液供應的需求,CBFA下降,NEI VFQ-25得分受視網膜功能影響而降低。裂孔閉合后,局部新陳代謝恢復,CBFA增加,從而更好地滋養組織,視網膜功能恢復,視覺相關生活質量提升[14-15]。PRF膜在局部環境中釋放出上皮生長因子、轉化生長因子和血小板衍生生長因子等高濃度生長因子,有利于推動光感受器細胞的再生,且PRF膜封閉MH可以防止玻璃體腔液體進入裂孔內,為細胞增生、遷移提供堅固的支架,有助于恢復中心凹結構。Burmeister等[16]體外??研究表明,自體血小板濃縮物能促進Müller細胞更好的增生活化和遷移,遷移活化的Müller細胞較穩定的Müller細胞產生更多的神經營養因子和堿性成纖維細胞生長因子,這些因子可抑制細胞凋亡、促進視神經元細胞和光感受器細胞再生和修復,利于裂孔的閉合和視力的改善。
對于因黃斑前膜、玻璃體黃斑牽拉綜合征、糖尿病黃斑水腫剝除過ILM或進行二次裂孔修復手術的MH患眼,ILM瓣技術已不適用,而后出現了自體晶狀體囊膜、自體游離神經感覺視網膜、羊膜等填塞替代物,但晶狀體囊膜瓣制作困難,自體游離神經感覺視網膜需要進行視網膜切除損傷較大,羊膜為異體成分,均存在應用限制[17]。PRF為自體血液制品,制備簡便,僅需在取血后迅速將其低速離心即可制得,相較于ILM瓣、晶狀體囊膜瓣、自體游離神經感覺視網膜等對手術者技術要求更低,具有明顯的應用優勢。
目前血液制品應用于MH的安全性仍存在質疑。Gamulescu等[18]報道1例使用第一代自體血小板濃縮物治療MH后出現視網膜脫離的病例,推測與自體血小板濃縮物引起的炎癥反應有關。與既往血液制品不同的是,PRF無需加入任何外源性抗凝劑和凝血酶,極大降低了發生免疫炎癥反應的可能性。本研究中PRF膜雖含有大量白細胞,但患者手術后并未出現高眼壓、眼內炎、視網膜脫離等并發癥。值得注意的是,PRF膜在長期保存的情況下仍存在一定的感染風險,可能會成為微生物生長的培養基,因此需嚴格進行無菌操作,制備后應該立即使用以減少感染的可能性。
本研究的不足之處在于樣本量較小,隨訪時間較短,尚需進一步大樣本、長時程研究。此外,未來研究可以進一步探究PRF膜在高度近視性MH、復發性MH等其他類型的難治性MH中的手術效果。