目的 探討miR-26a-5p通過調控環腺苷酸反應元件結合蛋白1（cAMP response element binding protein 1，CREB1）對脂肪來源干細胞（adipose-derived mesenchymal stem cells，ADSCs）成骨分化的調控作用及其作用機制。方法 取4只3～4周齡雌性C57BL/6小鼠脂肪組織，采用消化分離法分離培養細胞并傳代。經細胞形態學觀察以及流式細胞儀檢測鑒定其為ADSCs后，取第3代細胞行成骨分化誘導。于誘導培養0、3、7、14 d行茜素紅染色觀察細胞鈣沉積，ALP活性檢測，實時熒光定量PCR檢測miR-26a-5p和CREB1 mRNA表達，Western blot檢測CREB1蛋白及其磷酸化（phospho-CREB1，p-CREB1）水平以及p-CREB1/CREB1。經starBase數據庫預測miR-26a-5p和CREB1存在靶向結合位點后，取HEK-293T細胞行雙熒光素酶報告基因實驗驗證靶向關系（以培養48 h后熒光素酶活性表示）。最后將miR-26a-p inhibitor（實驗組）及對應陰性對照（對照組）轉染至ADSCs中，成骨誘導培養7、14 d同上法行茜素紅染色觀察、ALP活性檢測以及Western blot檢測 ［目的蛋白包括 CREB1、p-CREB1、Runt相關轉錄因子2（Runt-related transcription factor 2，RUNX2）、骨鈣素（osteocalcin，OCN）］。結果經鑒定分離培養細胞為ADSCs。隨成骨誘導培養時間延長，ADSCs鈣化結節增多、ALP活性增加（P<0.05）；細胞中miR-26a-5p相對表達量逐漸降低，而CREB1 mRNA及蛋白相對表達量、p-CREB1蛋白相對表達量升高，其中7、14 d與0 d差異有統計學意義（P<0.05）；p-CREB1/CREB1各時間點間差異均無統計學意義（P>0.05）。通過starBase數據庫預測發現miR-26a-5p和CREB1具有靶向結合序列，雙熒光素酶報告基因實驗顯示過表達miR-26a-5p可明顯抑制CREB1野生型熒光素酶活性（P<0.05）。成骨誘導7、14 d，與對照組相比，實驗組細胞鈣化結節數量、ALP活性以及CREB1、p-CREB1、OCN、RUNX2蛋白相對表達量均增加，差異均有統計學意義（P<0.05）；兩組p-CREB1/CREB1差異無統計學意義（P>0.05）。結論 通過敲降miR-26a-5p上調CREB1及其磷酸化水平，能促進ADSCs成骨分化。