目的 探討在香煙誘導氣道上皮細胞黏蛋白MUC5AC 表達過程中Src / JNK 信號通路的作用。方法 香煙抽提物預處理的人氣道上皮A549 細胞, 分別以活性氧( ROS) 清除劑DMTU、JNK 特異性抑制劑SP600125 及Src 激酶抑制劑PP2 干預。測定各組細胞中ROS 的含量, 采用RT-PCR、ELISA 法觀察細胞黏蛋白( MUC) 5AC轉錄水平及培養上清液中MUC5AC 蛋白水平的改變,以Western blot 法檢測細胞表皮生長因子受體( EGFR) 的蛋白表達。結果 細胞暴露于不同濃度的香煙抽提物中, ROS的量呈濃度遞增; ROS清除劑DMTU 顯著降低香煙所致的Src 磷酸化; Src 特異性抑制劑PP2 處理組中的JNK 磷酸化水平與對照組比較有明顯下降, MUC5AC 的表達水平也明顯降低; JNK特異性抑制劑SP600125 組中MUC5AC 的蛋白表達和基因轉錄水平較對照組均明顯降低。結論 ROS-Src-JNK信號通路可能參與A549 上皮細胞中MUC5AC 的表達調控。
目的 探討血小板源性生長因子(platelet-derived growth factor, PDGF)刺激成骨細胞，對磷酸化細胞外信號調節激酶1/2(phosphorylation extracellular signalregulated kinase1/2, pERK1/2)位置的影響。方法出生3 d清潔級健康小鼠10只，雌雄不拘，體重6～9 g。取小鼠顱骨，分離培養原代成骨細胞。取第6代成骨細胞，1%血清培養液培養12 h后, 隨機分成經10 μmol/L PP2處理30 min組(實驗組)和未處理組(對照組)，每組再隨機分成2個亞組: 其中一組用PDGF (20 ng/ml)刺激10 min，另一組不用PDGF刺激，采用免疫組織化學染色檢測pERK1/2分布。另取第6代成骨細胞，當細胞生長至80%融合時，用細胞刮隨機分成2組，一組用10 μmol/L PP2預處理30min（實驗組），另一組不用PP2作用（對照組），再用20 ng/ml PDGF培養12 h，采用劃痕愈合法檢測PP2對成骨細胞在PDGF刺激下遷移能力的影響。另取第6代成骨細胞，調整細胞濃度1×106/ml，隨機分成2組，分別經DMSO（對照組）和10 μmol/LPP2(實驗組)預處理30min，每組再隨機分成2個亞組: 其中一組用PDGF(20 ng/ml)刺激10 min，另一組不用PDGF剌激，采用Western blot檢測細胞骨架蛋白內pERK1/2活性。結果 免疫熒光染色結果顯示，PDGF促進pERK1/2定位于成骨細胞的局部黏附和細胞核內; 而PP2顯著抑制了由PDGF刺激引起的pERK1/2定位于成骨細胞的局部黏附, 但并不影響pERK1/2定位于細胞核內。細胞劃痕愈合實驗顯示，PP2明顯抑制了由PDGF所誘導的成骨細胞遷移。Western blot檢測結果顯示，PP2明顯抑制了由PDGF所誘導的成骨細胞局部黏附內ERK1/2的磷酸化。結論 PDGF通過激活Src活性，促進pERK1/2定位于成骨細胞的局部黏附內;PP2通過抑制pERK1/2定位于成骨細胞的局部黏附，從而抑制由PDGF所誘導的成骨細胞遷移。