目的 探討血小板源性生長因子(platelet-derived growth factor, PDGF)刺激成骨細胞,對磷酸化細胞外信號調節激酶1/2(phosphorylation extracellular signalregulated kinase1/2, pERK1/2)位置的影響。方法出生3 d清潔級健康小鼠10只,雌雄不拘,體重6~9 g。取小鼠顱骨,分離培養原代成骨細胞。取第6代成骨細胞,1%血清培養液培養12 h后, 隨機分成經10 μmol/L PP2處理30 min組(實驗組)和未處理組(對照組),每組再隨機分成2個亞組: 其中一組用PDGF (20 ng/ml)刺激10 min,另一組不用PDGF刺激,采用免疫組織化學染色檢測pERK1/2分布。另取第6代成骨細胞,當細胞生長至80%融合時,用細胞刮隨機分成2組,一組用10 μmol/L PP2預處理30min(實驗組),另一組不用PP2作用(對照組),再用20 ng/ml PDGF培養12 h,采用劃痕愈合法檢測PP2對成骨細胞在PDGF刺激下遷移能力的影響。另取第6代成骨細胞,調整細胞濃度1×106/ml,隨機分成2組,分別經DMSO(對照組)和10 μmol/LPP2(實驗組)預處理30min,每組再隨機分成2個亞組: 其中一組用PDGF(20 ng/ml)刺激10 min,另一組不用PDGF剌激,采用Western blot檢測細胞骨架蛋白內pERK1/2活性。結果 免疫熒光染色結果顯示,PDGF促進pERK1/2定位于成骨細胞的局部黏附和細胞核內; 而PP2顯著抑制了由PDGF刺激引起的pERK1/2定位于成骨細胞的局部黏附, 但并不影響pERK1/2定位于細胞核內。細胞劃痕愈合實驗顯示,PP2明顯抑制了由PDGF所誘導的成骨細胞遷移。Western blot檢測結果顯示,PP2明顯抑制了由PDGF所誘導的成骨細胞局部黏附內ERK1/2的磷酸化。結論 PDGF通過激活Src活性,促進pERK1/2定位于成骨細胞的局部黏附內;PP2通過抑制pERK1/2定位于成骨細胞的局部黏附,從而抑制由PDGF所誘導的成骨細胞遷移。
引用本文: 胡志毅,張寧,殷國勇,范衛民,任永信,蔡衛華,董天華. 磷酸化細胞外信號調節激酶1/2定位于成骨細胞的局部黏附時需要Src活性. 中國修復重建外科雜志, 2007, 21(11): 1179-1183. doi: 復制