目的分離培養大鼠肌腱干細胞(tendon stem cells,TSCs)并檢測其干細胞特性,觀察拉力對大鼠TSCs Sox-9基因和蛋白表達的影響。 方法取SPF級12周齡SD大鼠兩側髕腱,膠原酶消化,以低密度接種分離出TSCs并傳代,倒置相差顯微鏡觀察細胞形態,結晶紫染色觀察克隆形態和數量,流式細胞術檢測其MSCs表面標記進行鑒定。體外力學加載儀對第3代TSCs施加4%、0.17 Hz的拉力作為實驗組,對照組TSCs未進行拉力加載,分別采用實時熒光定量PCR和Western blot法檢測拉力對TSCs Sox-9基因和蛋白表達的影響。 結果倒置相差顯微鏡觀察示,分離出的原代細胞主要呈星狀,第1代細胞呈纖維細胞狀。分離出的細胞7 d后形成單細胞克隆;流式細胞儀檢測示其CD29、CD44、CD90表達陽性,CD45表達陰性。熒光定量PCR和Western blot法檢測示,與對照組相比,實驗組拉力加載后4 h Sox-9基因水平下調、蛋白表達明顯降低,24 h Sox-9基因水平上調、蛋白表達明顯增多,差異均有統計學意義(P<0.05)。 結論成功分離大鼠TSCs且符合MSCs特性;拉力刺激初始抑制了Sox-9表達,但拉力刺激完全消失后Sox-9表達上升。