目的 通過研究大鼠股骨干骨折合并腦外傷時骨痂組織內PDGF 表達水平的變化,探討腦外傷對骨折愈合的影響及作用機制。 方法 取12 周雄性SD 大鼠64 只,體重(356 ± 25)g,隨機分成8 組,每組8 只。A1、B1、C1、D1 組分別為骨折合并腦外傷1、2、3、4 周組,制作腦外傷和股骨干骨折模型;A2、B2、C2、D2 組分別為單純骨折1、2、3、4 周組,制作單純股骨干骨折模型作對照。各組攝CR 片后截取骨痂,行HE 染色觀察骨痂生長情況及其組織形態,免疫組織化學染色測定PDGF 表達,原位雜交檢測PDGF mRNA 表達。 結果 CR 片示在同一時間點A1、B1、C1、D1 組較A2、B2、C2、D2 組骨折端骨痂形成早,骨痂多,骨折愈合快。HE 染色示A1 組可見較多早期軟骨細胞、成纖維細胞,A2組骨折間隙可見成纖維細胞,僅夾雜有少量的早期軟骨細胞;B1 組骨折端有新生骨小梁長入,B2 組未見骨小梁形成;C1組骨折端有大量編織骨形成且骨小梁間有少量成熟軟骨細胞,C2 組少量骨小梁向骨折端長入;D1 組編織骨向板層骨轉化,D2 組骨折端為不成熟骨小梁。免疫組織化學染色和原位雜交實驗均可見成纖維細胞、間充質細胞、血管內皮細胞、早期軟骨細胞、成骨細胞、破骨細胞胞漿出現廣泛的強陽性反應,A1、B1、C1、D1 組PDGF 和PDGF mRNA 陽性細胞百分數均高于同一時間點A2、B2、C2、D2 組,差異有統計學意義(P lt; 0.05)。 結論 腦外傷對骨折愈合有促進作用,可能與腦外傷后PDGF 表達水平升高有關。
目的觀察比較人正常和退變髓核的細胞學和生物學差異,并研究 IFG-1 和 PDGF 對人退變髓核的修復作用。方法取患者自愿捐贈的人退變及正常髓核組織,一部分制作成組織切片,進行 HE 染色觀察髓核退變前后形態變化,免疫組織化學染色觀察Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原、B 淋巴細胞瘤 2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2 相關 X(Bcl-2 associate X,Bax)蛋白表達;另一部分髓核組織進行細胞培養,倒置顯微鏡觀察細胞形態,Western blot 檢測Ⅱ型膠原蛋白表達。然后進行基因轉染實驗,分為 4 組,A 組為退變髓核細胞;B、C、D 組分別用 IGF-1 基因慢病毒顆粒、PDGF 基因慢病毒顆粒和攜帶 IGF-1、PDGF 雙基因的慢病毒顆粒轉染退變髓核細胞。轉染 21 d,倒置顯微鏡觀察各組細胞形態,流式細胞儀測定各組細胞 IGF-1 和 PDGF 陽性率,免疫組織化學染色和 Western blot 檢測各組細胞Ⅱ型膠原蛋白表達。結果HE 染色示,正常組中央髓核組織可見大量脊索細胞和少量類軟骨細胞;而退變組髓核細胞明顯減少,且髓核組織內可見大量纖維軟骨組織。免疫組織化學染色示,退變組Ⅰ型膠原、Bax 蛋白陽性細胞百分比顯著高于正常組,Ⅱ型膠原、Bcl-2 蛋白陽性細胞百分比顯著低于正常組,差異均有統計學意義(P<0.05)。Western blot 檢測示,退變組Ⅱ型膠原蛋白相對表達量顯著低于正常組(t=65.493,P=0.000)。基因轉染后 21 d,與 A 組比較,B、C、D 組細胞活性增加,形態變得較為規則。流式細胞儀檢測示 B、D 組 IGF-1 陽性率較 A 組明顯增高,C、D 組PDGF 陽性率較 A 組明顯增高(P<0.05)。免疫組織化學染色觀察示,A、B、C、D 組Ⅱ型膠原蛋白陽性染色情況依次為(±)、(+)、(+)、(++)。Western blot 檢測示,A、B、C、D 組Ⅱ型膠原蛋白相對表達量依次增加,各組間比較差異均有統計學意義(P<0.05)。結論IGF-1 與 PDGF 均能逆轉椎間盤髓核細胞的退變且二者具有協同作用,為其今后應用于臨床治療椎間盤退變性疾病提供了實驗依據。