目的通過慢病毒介導環氧合酶2（cyclooxygenase 2, COX-2）-siRNA、聚蛋白多糖酶1（Aggrecanase-1）-siRNA、IGF-1基因聯合轉染BMSCs，將其注射至食蟹猴骨關節炎（osteoarthritis, OA）模型關節腔，探討對OA相關炎性因子及關節軟骨的影響。 方法取髖關節OA患者自愿捐贈骨髓組織，分離培養BMSCs。采用基因重組技術構建COX-2-siRNA、Aggrecanase-1-siRNA和IGF-1過表達基因的慢病毒載體，以最佳感染復數40轉染第3代BMSCs（病毒組），以空慢病毒轉染培養作為對照（空病毒組），以正常BMSCs作為正常對照組。倒置相差顯微鏡下觀察細胞生長狀態，并行細胞計數；取轉染培養1周細胞，RT-PCR檢測COX-2、Aggrecanase-1及IGF-1 mRNA的表達。取健康3歲食蟹猴9只，按照Hulth造模法于右膝制備OA模型后，隨機分為3組（n=3）。模型制備術后6周，病毒組及空病毒組右膝關節腔內分別注射對應的1 mL BMSCs（約1×107個），空白對照組注射1 mL生理鹽水。以左膝作為正常對照組。注射后觀察動物一般情況；1、4、6周取雙膝關節液，ELISA檢測前列腺素E2（prostaglandin E2, PGE2）、IL-1、Aggrecanase-1、IGF-1濃度；6周時MRI及大體觀察檢查膝關節軟骨改變，并取材行組織學、免疫組織化學染色觀察，以及RT-PCR檢測COX-2、Aggrecanase-1及IGF-1 mRNA表達。 結果轉染后兩組細胞形態及生長曲線無明顯差異。RT-RCR檢測，與空病毒組、正常對照組比較，病毒組COX-2、Aggrecanase-1表達明顯降低，IGF-1表達明顯增加（P＜0.05）。細胞注射后各組動物均存活至實驗完成。注射后1、4、6周，病毒組PGE2、Aggrecanase-1、IL-1濃度明顯低于空病毒組、空白對照組，但IGF-1濃度明顯增高（P＜0.05）；但3組以上指標濃度均顯著高于正常對照組（P＜0.05）。MRI檢查示，與正常對照組比較，病毒組、空病毒組及空白對照組關節面均出現異常高密度影，但病毒組區域最小。大體觀察及組織學觀察見，病毒組、空病毒組及空白對照組關節軟骨符合早期OA改變，但病毒組修復程度優于空病毒組及空白對照組，根據改良Pineda評分標準的組織學評分亦較低，比較差異均有統計學意義（P＜0.05）。免疫組織化學染色示，病毒組細胞質染色較空病毒組及空白對照組深，偶爾可見棕黃色顆粒，軟骨細胞較多。RT-PCR檢測，與空病毒和空白對照組相比，病毒組COX-2、Aggrecanase-1 mRNA表達明顯降低，IGF-1 mRNA表達明顯增高（P＜0.05）。 結論慢病毒介導的多基因轉染BMSCs可以有效抑制食蟹猴早期OA模型膝關節腔內COX-2和Aggrecanse-1的表達，增強IGF-1的表達，降低膝關節內炎性因子濃度，有效保護關節軟骨。
目的 探討采用食蟹猴制備自體腘繩肌腱移植重建前交叉韌帶（anterior cruciate ligament，ACL）模型的可行性。方法 取健康成年雄性食蟹猴12只，體質量8～13 kg，隨機分為兩組（n=6）。其中，實驗組動物按照單束腘繩肌腱重建ACL方法制備右下肢膝關節自體腘繩肌腱移植重建ACL模型，對照組僅切斷右下肢膝關節ACL。術后觀察兩組動物存活情況。于術前和術后3、6、12個月，測量兩組術側膝關節活動度、大腿圍、小腿圍，使用Ligs關節韌帶數字體查儀測量13～20 N載荷條件下雙膝脛骨前移距離差值（anterior tibial translation D-value，ATTD）。同時，實驗組行MRI檢查，觀察重建術后移植物形態，并測量信噪比（signal/noise quotient，SNQ）以評估移植物成熟度。結果 術后兩組動物均存活至實驗完成；實驗組術后膝關節活動度、大腿圍、小腿圍均呈先降低再逐漸增加趨勢，術后3、6個月小于術前（P<0.05），但術后12個月與術前比較差異無統計學意義（P>0.05）。對照組術后膝關節活動度無明顯變化，手術前后比較差異均無統計學意義（P>0.05）；但術后大腿圍、小腿圍均逐漸減小（P<0.05），且與術前比較差異有統計學意義（P<0.05）。術后6、12個月實驗組大腿圍、小腿圍均大于對照組（P<0.05），3、6個月膝關節活動度小于對照組（P<0.05）。在13～20 N載荷條件下，實驗組術后ATTD均呈先增高再降低趨勢，術后3、6個月高于術前（P<0.05），術后12個月與術前比較差異無統計學意義（P>0.05）。而對照組術后3、6、12個月ATTD無明顯變化，差異無統計學意義（P>0.05），但均高于術前（P<0.05）。在相同載荷下，術后各時間點實驗組ATTD均小于對照組（P<0.05）。實驗組MRI檢查示，重建后ACL邊界逐漸清晰，并被滑膜覆蓋；術后各時間點SNQ均高于術前，但隨時間延長SNQ逐漸降低，各時間點間差異均有統計學意義（P<0.05）。結論 采用食蟹猴成功建立自體腘繩肌腱移植重建ACL模型。