目的觀察多聚嘧啶序列結合蛋白相關剪接因子(PSF)對體外培養的視網膜色素上皮(RPE)細胞磷脂酰肌醇3 激酶(PI3K)/絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶(Akt)信號通路的調控作用。 方法將體外培養的RPE細胞分為PSF高表達組、PSF高表達對照組、PSF低表達組、PSF低表達對照組及假轉染組。應用脂質體2000將上調PSF表達的真核質粒增強型綠色熒光蛋白(pEGFP)-C2-PSF、下調PSF表達的真核質粒pGenesil-PSF-RNAi以0.25、0.50、1.00 μg的遞增量分別轉染至PSF高表達組及PSF低表達組細胞。PSF高表達對照組細胞轉染pEGFP-C2空載質粒。PSF低表達對照組細胞轉染pGenesil-scramble-siRNA質粒。假轉染組僅做轉染處理,不加入任何表達質粒。采用水溶性四氮唑法檢測胰島素樣生長因子1(IGF-1)刺激條件下PSF對RPE細胞增生的影響。應用脂質體2000將0.50 μg真核質粒pEGFP-C2-PSF、1.00 μg真核質粒pGenesil-PSF-RNAi及pEGFP-C2空載質粒轉染細胞分別作為PSF高表達組、PSF低表達組、對照組,采用實時定量聚合酶鏈反應(PCR)檢測PSF對 IGF-1誘導的RPE細胞內血管內皮生長因子(VEGF) mRNA表達的影響。采用蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測PSF對IGF-1誘導的磷酸化Akt(pAkt)蛋白表達的影響。在IGF-1刺激后,將RPE細胞分為單純渥曼青霉素(Wortmannin)處理組、單純PSF高表達組、渥曼青霉素聯合PSF高表達處理組,并以未經渥曼青霉素處理的常規體外培養的RPE細胞為對照組,采用實時定量PCR檢測各組VEGF的表達。 結果IGF-1刺激后,PSF高表達組、PSF高表達對照組及假轉染組之間RPE細胞增生率比較,差異有統計學意義(F=29.728,P<0.05);PSF低表達組、PSF低表達對照組及假轉染組之間RPE細胞增生率比較,差異有統計學意義(F=14.121,P<0.05)。PSF高表達組RPE細胞中VEGF mRNA表達較對照組明顯降低,差異有統計學意義(P=0.000 3);PSF低表達組RPE細胞中VEGF mRNA表達較對照組明顯提高,差異有統計學意義(P=0.030 9)。Western blot檢測結果顯示,IGF-1刺激可上調pAkt蛋白表達水平,PSF高表達可明顯下調pAkt蛋白表達水平。IGF-1刺激后,渥曼青霉素聯合PSF高表達處理組VEGF表達較單純渥曼青霉素處理組明顯降低,差異有統計學意義(P<0.05)。 結論PSF能抑制IGF-1 刺激后體外培養的RPE細胞中PI3K/Akt信號通路活化,下調VEGF表達。