目的探討抑制 miR-429 改善體外血脊髓屏障（blood spinal cord barrier，BSCB）通透性的可行性及機制，為改善脊髓微環境提供新的基因治療靶點。方法首先，取永生化人腦微血管內皮細胞系（hCMEC/D3），應用 miR-429 拮抗劑 antagomiR-429 及其陰性對照 antagomiR-429-NC 進行轉染，通過熒光顯微鏡觀察以及實時熒光定量 PCR 檢測 miR-429 表達，驗證 antagomiR-429 轉染效率。然后觀察 miR-429 對體外 BSCB 通透性的影響。實驗分為 4 組，其中空白對照組（A 組）為正常 hCMEC/D3 細胞、Ha-sc 細胞構建 BSCB 模型，低氧誘導組（B 組）、低氧誘導+antagomiR-429-NC 組（C 組）、低氧誘導+antagomiR-429 組（D 組）分別采用正常、antagomiR-429-NC 轉染以及 antagomiR-429 轉染的 hCMEC/D3 細胞，與 Ha-sc 細胞構建 BSCB 模型并低氧處理 12 h。通過辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）通量測定體外 BSCB 通透性，實時熒光定量 PCR、Western blot 和免疫熒光染色觀測內皮細胞中緊密連接蛋白 ZO-1、Occludin、Claudin-5 的表達水平。結果熒光顯微鏡下觀察 antagomiR-429 及 antagomiR-429-NC 成功轉染至 hCMEC/D3 細胞，轉染效率約為 90%；實時熒光定量 PCR 檢測 antagomiR-429 組 miR-429 相對表達量為 0.109±0.013，明顯低于 antagomiR-429-NC 組的 0.956±0.004（P<0.05）。HRP 通透性測量、實時熒光定量 PCR 及 Western blot 檢測顯示，B、C 組 HRP 通透性明顯高于 A、D 組，ZO-1、Occludin 和 Claudin-5 蛋白及 mRNA 相對表達量均明顯低于 A、D 組（P<0.05）；B、C 組間差異無統計學意義（P>0.05），D 組尚未達 A 組水平（P<0.05）。免疫熒光染色觀察示 D 組 ZO-1、Occludin 和 Claudin-5 蛋白在細胞膜邊界免疫熒光較 B、C 組增強，但尚未達 A 組強度。結論通過抑制 miR-429 表達可促進微血管內皮細胞中 ZO-1、Occludin 和 Claudin-5 蛋白表達，進而改善因低氧導致的 BSCB 通透性增高。