目的 構建可經米非司酮（RU486）調控表達小鼠白細胞介素-12(mIL-12)單鏈融合基因的真核載體, 并鑒定其調控表達效果。方法 以GCp35Ep40PN質粒為模板，分別獲取mIL-12 p40和p35亞基的基因, 重疊PCR引入linker后,克隆入pCA14質粒,測序正確之后，裝入可調控載體pRS-17而構建成真核表達質粒pRS-RUmIL-12。用Lipofectamine 2000將pRS-RUmIL-12質粒轉染HEK293細胞，以不同劑量的RU486誘導其表達，然后用ELISA法檢測其培養上清液中mIL-12蛋白的含量。結果 所得mIL-12單鏈融合基因序列與設計一致。pRS-RUmIL-12在體外轉染HEK293細胞后，ELISA檢測結果表明該系統具有良好的調控能力: 無誘導劑RU486時，mIL-12蛋白表達量很低，而加入誘導劑RU486后，可以誘導mIL-12的表達，并在一定范圍內mIL-12的蛋白表達量與誘導劑的濃度呈正相關。結論 成功構建了可經RU486調控的mIL-12雙亞基共表達的真核表達質粒,可用于進一步的基因調控和基因治療研究。
目的對單純皰疹病毒Ⅱ型胸苷激酶基因及血管生成抑制素進行基因擴增，克隆構建真核表達質粒pcDNA3/HSVⅡ TK/As。方法從單純皰疹病毒Ⅱ型（HSVⅡ）Sav株感染的Hep2細胞上清液中提取HSV2基因組DNA，以此為模板，用PCR方法擴增胸苷激酶（TK）基因，將擴增的片段克隆入載體pcDNA3中，挑取陽性克隆測序。限制性核酸內切酶酶切pcDNA3/HSVⅡTK,得到目的基因TK，將其克隆于已構建的真核表達載體pcDNA3/As上。結果HSVⅡTK基因全部編碼區為1 128 bp，基因序列與genebank中報道相符。新質粒pcDNA3/HSVⅡTK/As經限制性核酸內切酶(BamH Ⅰ,Hind Ⅲ)酶切后得到700 bp(As)及1000 bp(HSVⅡTK)相應基因片段。結論本研究成功構建pcDNA3/HSVⅡTK/As真核表達質粒。
目的 分析急性淋巴細胞白血病（ ALL） 糖原染色（ PAS） 的陽性率，與細胞免疫分型、融合基因分析結果進行比較，探索PAS在ALL診斷中的應用價值。 方法 回顧性分析我院自2010年1月－2012年5月初發ALL患者124例，統計分析其PAS染色、細胞免疫分型、斷裂點叢集區基因-abesine鼠白血病基因（BCR-ABL）融合基因、外周血象及相關臨床資料。 結果 50 例經細胞免疫分型診斷為早期前B型急性淋巴細胞白血病（Pro-B ALL）的患者，PAS反應陽性者30例（60%）；42例經細胞免疫分型診斷為普通型急B性淋巴細胞白血病（Common-B ALL）的患者，PAS反應陽性者23例（55%）；32例經細胞免疫分型診斷為急性T淋巴細胞白血（T-ALL）的患者，PAS陽性者12例（37%）。分析顯示T-ALL患者PAS的陽性率明顯低于Common-B ALL和Pro-B ALL的患者（P＜ 0.05），Common-B ALL和Pro-B ALL之間PAS陽性率差異無顯著的統計學意義（P＞0.05）。38 例BCR-ABL融合基因陽性的ALL患者，PAS反應陽性者18例（47%）；86例BCR-ABL融合基因陰性的ALL患者，PAS反應陽性者47例（55%），BCR-ABL融合基因陽性和陰性兩組比較，PAS陽性率差異無統計學意義（P＞0.05）。 結論 PAS 在ALL患者有較高的陽性率，B-ALL中PAS陽性率顯著高于T-ALL，PAS可作為一種經濟快速的ALL診斷及免疫亞型初步診斷的輔助手段。
目的 研究pcDNA3/AFP/TK/Angio融合基因對人肝癌細胞系SMMC-7721裸鼠移植瘤模型的靶向性治療作用。方法 建立人原發性肝癌裸鼠皮下移植瘤模型，將荷瘤裸鼠隨機分成腫瘤對照組、空質粒組、丙氧鳥苷(GCV）組、pcDNA3/TK/Angio組及pcDNA3/AFP/TK/Angio組5組。于瘤體內分別直接注射不同的質粒，同時于裸鼠腹腔內注射GCV，觀察不同時段皮下腫瘤的生長情況并做病理學檢查，免疫組化法檢測腫瘤微血管密度（MVD）以及血管內皮細胞生長因子（VEGF）的表達量，原位末端標記(TUNEL)法檢測細胞原位凋亡。放免法檢測裸鼠血清甲胎蛋白（AFP）的變化，透射電鏡觀察腫瘤細胞超微結構的變化。結果 裸鼠皮下成瘤率100%； pcDNA3/TK/Angio組及pcDNA3/AFP/TK/Angio組的腫瘤體積、血清AFP含量、腫瘤MVD和VEGF表達強度均明顯低于對照組、空質粒組和GCV組（P＜0.05），細胞凋亡指數都明顯高于后3組（P＜0.05），可見較多的凋亡細胞。而pcDNA3/AFP/TK/Angio組的腫瘤體積、AFP、MVD及VEGF表達強度又明顯低于pcDNA3/TK/Angio組（P＜0.05），凋亡指數高于后者（P＜0.05）。結論 pcDNA3/AFP/TK/Angio融合基因系統可顯著抑制腫瘤的生長，有望成為治療原發性肝癌的新型生物制劑之一。