目的分離培養豬不同亞型軟骨組織(彈性軟骨、透明軟骨以及纖維軟骨)來源干細胞并鑒定,為軟骨組織工程提供理想種子細胞。 方法利用纖維連接蛋白黏附法分別從豬耳軟骨、關節軟骨以及椎間盤軟骨中分離培養干細胞,并進行傳代。倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態變化,流式細胞術鑒定細胞表面抗原表達水平(陽性標志物CD29、CD90及陰性標志物CD34、CD45),單克隆形成實驗鑒定軟骨干細胞單克隆形成能力。三向誘導分化鑒定軟骨來源干細胞的成軟骨、成骨及成脂多向分化潛能。RT-PCR檢測成骨(Ⅰ型膠原、Ⅹ型膠原)、成軟骨[蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型膠原]、成脂[脂聯素(Adiponectin)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)]相關基因表達,并以豬BMSCs作為對照。 結果通過纖維連接蛋白黏附法分別從耳軟骨(彈性軟骨)、關節軟骨(透明軟骨)、椎間盤軟骨(纖維軟骨)分選出一群細胞,細胞高表達干細胞表面陽性標志物CD29、CD90,幾乎不表達干細胞表面陰性標志物CD34、CD45。經過體外2周培養,單個細胞均能形成細胞克隆。三向誘導分化顯示軟骨來源的干細胞具備成軟骨、成骨和成脂分化能力。RT-PCR結果顯示,成骨誘導后關節和椎間盤來源軟骨干細胞的Ⅰ、Ⅹ型膠原基因相對表達量明顯高于BMSCs(P<0.05),耳軟骨來源干細胞與BMSCs比較差異無統計學意義(P>0.05);成軟骨誘導后,3種亞型軟骨組織來源干細胞Aggrecan、Ⅱ型膠原基因相對表達量均高于BMSCs (P<0.05);成脂誘導后,3種來源軟骨干細胞Adiponectin及FAS基因相對表達量均低于BMSCs,但比較差異無統計學意義(P>0.05)。 結論不同亞型的豬軟骨組織中均存在軟骨干細胞,具有干細胞的典型特征。