目的觀察苯丙氨酸對胚胎干細胞(ESC)向視網膜色素上皮(RPE)細胞定向分化誘導效率的影響。 方法H1人ESC(hESC)分為對照組和實驗組,以mTeSR培養基常規培養。細胞克隆過度融合后對照組以撤除堿性成纖維細胞生長因子、含10% knockout血清替代物的培養基誘導hESC自主分化至第7周。實驗組從第3周開始在誘導培養基中添加0.2 mmol/L苯丙氨酸培養至第7周。觀察兩組細胞形態學變化;實時熒光定量聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測人類配對盒基因6(Pax6)、小眼球相關轉錄因子(MITF)、RPE65、酪氨酸酶(tyrosinase)、Wnt配體(Wnt3a)、淋巴樣增強因子-1(Lef1)、轉錄因子7(Tcf7)基因mRNA的表達;蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測MITF、RPE65蛋白的表達;流式細胞技術(FCM)檢測RPE65陽性細胞比例。Sprague Dawley大鼠12只,隨機分為對照組和治療組;單眼內路法視網膜下腔注射,對照組注射2μl 1倍磷酸鹽緩沖液,治療組注射2μl純化的hESC-RPE。治療后6周行視網膜電圖(ERG)檢查,觀察暗適應3.0 a-b波振幅。 結果誘導分化第7周,實驗組出現大量肉眼可見的色素團塊,明顯多于對照組。色素化區域內可見多邊形蜂窩狀排列的單層細胞,胞質充滿色素顆粒。RT-PCR檢測結果顯示,實驗組Pax6、MITF、RPE65、tyrosinase(t=39.44、26.14、31.28、77.24)、Wnt3a、Lef1、Tcf7(t=46.11、27.69、17.42)mRNA表達量高于對照組,差異有統計學意義(P<0.01)。Western blot檢測結果顯示,實驗組MITF、RPE65蛋白表達量高于對照組。FCM檢測結果顯示,實驗組、對照組RPE65陽性比例分為(18.91±1.76)%、(0.88±0.09)%;實驗組RPE65陽性比較明顯高于對照組,差異有統計學意義(P<0.01)。ERG檢查結果顯示,治療組大鼠暗適應3.0 a-b波振幅較對照組顯著提高,差異有統計學意義(t=7.543,P<0.01)。 結論苯丙氨酸顯著提高hESC向RPE定向誘導效率。hESC誘導來源的RPE細胞視網膜下移植能改善視網膜變性模型動物視功能。
目的闡述并分析苯丙氨酸和酪氨酸及其代謝產物與非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的關系。方法查閱近年來與 NAFLD 相關的文獻并進行分析總結。結果苯丙氨酸和酪氨酸及其代謝產物水平在 NAFLD 的發生發展中發生了顯著的變化,并可通過影響脂質代謝相關途徑導致 NAFLD 的進展。結論苯丙氨酸和酪氨酸及其相關代謝產物與 NAFLD 存在聯系,但目前其具體的發病機制仍不明確。