目的綜述MSCs修復燒傷創面的研究進展。 方法廣泛查閱MSCs參與修復燒傷創面及其相關機制方面的文獻,并進行分析總結。 結果MSCs具有自我更新、快速增殖、分化及旁分泌功能,通過分化為各種皮膚創面細胞及調節創面微環境,促進燒傷創面修復。 結論MSCs在燒傷領域具有廣闊應用前景,但燒傷創面的惡劣微環境也對細胞生存及轉歸提出了挑戰。
目的建立一種簡便、高效的犬臍靜脈血管內皮細胞分離方法,并進行培養和鑒定。 方法無菌條件下取12只新生比格犬臍帶共12根,臍帶長(13.0 ± 1.5)cm。PBS液沖洗后,各取4根臍帶注入1%Ⅰ型膠原酶分別消化臍靜脈5、7、10 min后,收集細胞并行錐蟲藍計數;倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態,待細胞爬滿培養瓶后以1∶2比例傳代。取Ⅰ型膠原酶消化7 min獲得的第3代細胞,通過免疫熒光染色和流式細胞儀檢測細胞中血管假性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)和血小板-內皮細胞黏附分子CD31表達,進行細胞鑒定;MTT檢測細胞增殖。 結果消化5、10 min后未收集到或偶爾收集到血管內皮細胞;消化7 min可見大量血管內皮細胞,培養24 h后細胞呈多角形,隨培養時間延長細胞逐漸呈“鋪路石”樣生長,細胞核較大,多為單核,少數細胞為雙核,傳代后細胞形態無明顯變化。熒光倒置顯微鏡下觀察,培養細胞vWF和CD31表達陽性;流式細胞儀檢測示培養細胞 vWF陽性表達率為99.0% ± 0.7%,CD31陽性表達率為98.0% ± 1.2%,提示培養細胞為血管內皮細胞。MTT檢測示,隨培養時間延長,血管內皮細胞增殖速度明顯提高。 結論采用酶消化法從犬臍靜脈中分離培養血管內皮細胞操作簡便,且細胞數量多、純度高。
目的 通過觀察嚴重燒傷患者血清對體外培養的人臍帶MSCs(human umbilical cord MSCs,hUCMSCs)生物學行為的影響,探討hUCMSCs移植治療嚴重燒傷的可行性。 方法 取足月剖腹產手術的健康胎兒臍帶組織分離培養hUCMSCs,將第3代hUCMSCs用于實驗。根據培養血清不同將實驗分為3組,分別為10%FBS組(A組)、10%正常血清組(B組)和10%燒傷血清組(C組)。于培養24 h、72 h和6 d,采用倒置顯微鏡觀察各組細胞形態及融合情況,MTT法測定細胞增殖;培養后第6天采用碘化丙啶染色、流式細胞儀檢測細胞周期,吖啶橙/溴化乙錠染色法檢測細胞凋亡,β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)染色檢測細胞衰老,ELISA法測定B、C組血清中TNF-α、IL-1、PDGF及IGF-1含量。 結果 各時間點各組細胞形態均呈長梭形,部分呈多角形;但C組細胞融合速度顯著快于A、B組。細胞增殖曲線顯示,培養2~6 d,C組增殖細胞數高于A、B組,差異有統計學意義(P lt; 0.05)。流式細胞儀檢測示,培養6 d A、B、C組hUCMSCs增殖期(S期)比例分別為9.21% ± 1.02%、11.79% ± 1.87%和20.54% ± 2.03%,C組顯著高于A、B組(P lt; 0.05)。各時間點各組細胞形態和結構正常,未見細胞核著橘紅色熒光的凋亡細胞或死亡細胞。培養6 d A、B、C組β-gal染色陽性細胞百分率分別為4.8% ± 0.2%、3.8% ± 0.4%和2.6% ± 0.1%,C組顯著低于A、B組(P lt; 0.05)。ELISA法檢測C組血清中TNF-α、IL-1、PDGF及IGF-1含量顯著高于B組,差異有統計學意義(P lt; 0.05)。 結論 嚴重燒傷患者血清中含有較高水平的TNF-α、IL-1、PDGF和IGF-1等細胞因子,可顯著刺激hUCMSCs快速增殖,不引起細胞凋亡,能減少細胞衰老,將hUCMSCs移植治療嚴重燒傷可行。