目的 應用重組腺相關病毒2（recombinant adeno-associated virus 2，rAAV2）介導hTGF-β1 基因體內轉染兔退變椎間盤髓核細胞，觀察基因產物的表達及其對退變髓核細胞蛋白多糖合成的生物調節作用。 方法 于24 只成年新西蘭大白兔，雌雄不限，體重1.7 ～ 2.2 kg，L1、2、L2、3、L3、4、L4、5 椎間盤注射25 μL 濃度為1 mmol/L 的纖維結合素片段（fibronectin fragment，Fn-f）制備椎間盤退變模型，注射Fn-f 4 周時的造模椎間盤模擬早期退變的椎間盤。將24 只兔隨機分為3 組（n=8），A、B、C 組分別于造模椎間盤髓核內注射25 μL rAAV2-hTGF-β1（1 × 1012 vg/mL）、rAAV2- 增強綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP，rAAV2-EGFP）、PBS。術后1 周A、C 組各處死2 只兔，取髓核組織采用免疫組織化學染色觀察hTGF-β1 的表達；術后4、8、12 周每組取2 只兔髓核組織，35S 整合分析法檢測新合成蛋白多糖的含量；術后12 周處死B 組2 只兔，熒光顯微鏡觀察髓核組織中EGFP 的表達。 結果 術后1 周，免疫組織化學染色示A 組髓核細胞及基質中廣泛存在強陽性染色顆粒，C 組僅存在少量陽性顆粒。35S 整合法檢測示，各時間點A 組35S 蛋白多糖合成率均高于B、C 組，比較差異有統計學意義（P lt; 0.05） ；B、C 組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。術后12周， 熒光顯微鏡下觀察B 組盤髓核組織可見大量綠色熒光表達。 結論 新型基因轉導載體rAAV2 可有效介導hTGF-β1基因體內轉染兔退變髓核細胞，基因產物可持續表達超過12 周，hTGF-β1 可有效促進退變髓核細胞蛋白多糖的合成。
目的 褪黑素可提高軟骨生長因子的表達，刺激軟骨基質的合成；通過觀察注射褪黑素后大鼠骨性關節炎（osteoarthritis，OA）關節軟骨中BMP-2 和IL-1β 的表達，探討褪黑素對損傷軟骨的防治作用。 方法 SPF 級4 周齡SD 雄性大鼠40 只，體重120 ～ 150 g，隨機分為4 組，每組10 只。正常對照組（A 組）大鼠不作任何處理。OA 模型組（B組）、OA 模型/ 去松果體模型組（C 組）、OA 模型/ 去松果體模型/ 褪黑素治療組（D 組）于大鼠左膝關節腔內注射0.2 mL濃度為4% 的木瓜蛋白酶溶液，每2 天1 次，共2 周，制備大鼠OA 模型。木瓜蛋白酶注射2 周后，將C、D 組大鼠置于持續24 h（光照度為500 lx）光照環境中，制備去松果體模型。D組于制備去松果體模型第2 天開始于左膝關節腔內注射0.2 mL濃度為20 mg/mL 的褪黑素溶液，每周4 次，共4 周。在最后1 次注射褪黑素1 周后，抽取A、B、C 組大鼠心尖處血液應用ELISA 法檢測血清褪黑素水平；之后處死各組動物，取材行大體觀察、組織學及免疫組織化學染色觀察。 結果 模型制備后大鼠均存活。A、B、C 組相同時間點血清中褪黑素水平比較以及同組各時間點比較，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。A 組關節軟骨表面光滑平整，有彈性；軟骨細胞排列整齊。B、C 組關節軟骨表面粗糙，局部區域軟骨面可見缺損及軟骨下骨外露現象；軟骨細胞排列及結構較紊亂。D 組關節軟骨表面較B、C 組平整，軟骨缺損及外露現象減少；軟骨細胞排列及結構較整齊。各組組織學及BMP-2、IL-1β 免疫組織化學染色觀察Mankin 評分及積分吸光度值比較，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論 持續光照能加速大鼠OA 關節軟骨的退變。采用0.2 mL 濃度為20 mg/mL 的褪黑素溶液于關節腔注射4 周后能夠延緩大鼠OA 的進一步退變，其作用機制可能與上調軟骨生長因子BMP-2 及下調炎性因子IL-1β 表達有關。