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      2. 華西醫學期刊出版社
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        找到 作者 包含"胡延忠" 1條結果
        • 過表達嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒2型刺突蛋白抑制人視網膜色素上皮細胞生長

          目的觀察過表達嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒2型(SARS-CoV-2)刺突蛋白(S-蛋白)對人視網膜色素上皮(RPE)細胞生長的抑制作用。方法構建SARS-CoV-2 S-蛋白基因片段表達質粒(p3xflag-S),并轉染至ARPE-19、HEK293細胞內,應用DNA測序進行鑒定,并對表達的標簽蛋白進行蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測。HEK293細胞分為細胞1、2、3、4,分別轉染GFP11質粒和空載質粒、GFP1-10質粒和空載質粒、GFP11質粒和pCMV-HA-ACE2質粒、GFP1-10和p3xflag-S質粒。將細胞1與細胞2(對照組1)、細胞2與細胞3(對照組2)、細胞3與細胞4(觀察組)、細胞1與細胞2、3、4(對照組3)混合共培養。明場顯微鏡和熒光顯微鏡觀察細胞融合情況。將RPE細胞分為對照組、過表達S-蛋白組。流式細胞儀檢測RPE細胞周期;計數試劑盒8(CCK-8)檢測RPE細胞增生水平;Western blot檢測RPE細胞中S-蛋白表達水平。組間比較行最小顯著差法t檢驗。結果DNA序列測定結果顯示,S-蛋白cDNA與標簽蛋白融合;Western blot檢測結果顯示,與未轉染p3xflag-S質粒的細胞比較,轉染HEK293細胞中S-蛋白相關表達量升高。明場顯微鏡下可見大而多核的融合細胞團;熒光顯微鏡下可見融合細胞內有多個細胞核且呈明顯綠色熒光。Western blot檢測結果顯示,與未轉染p3xflag-S質粒的RPE細胞比較,轉染p3xflag-S質粒的RPE細胞中S-蛋白相關表達量升高。CCK-8增生分析結果顯示,與對照組比較,過表達S-蛋白組RPE細胞增生能力顯著降低,差異有統計學意義(t=22.70、16.75、23.38,P<0.000 1)。流式細胞儀檢測結果顯示,對照組、過表達S-蛋白組G1期細胞分別為41.1%、67.0%;與對照組比較,過表達S-蛋白組G1期細胞明顯升高,差異有統計學意義(t=4.76,P=0.018)。過表達S-蛋白組細胞凋亡率較對照組明顯增加,差異有統計學意義(t=4.91,P=0.008)。結論過表達SARS-CoV-2 S-蛋白可抑制RPE細胞生長活性。

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