目的 以基因工程干細胞治療的方式來改善缺血-再灌注狀況，使移植肝臟更好地耐受缺血-再灌注，以減少移植術后的并發癥，延長移植器官存活期。方法 利用已建立的Wistar大鼠冷缺血原位肝移植(OLT)模型，術中經受體大鼠門靜脈輸入IL-13基因修飾的或未修飾的肝卵圓細胞（HOC）即轉染組和未轉染組，分別于術后1、3、7及14 d檢測受體大鼠肝臟功能變化、組織學變化、膽管上皮細胞(BEC)的增殖情況、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的表達、肝組織中HO-1 mRNA的表達，并觀察移植大鼠術后的存活情況。結果 轉入IL-13基因的HOC對冷保存損傷的肝臟有一定的保護作用； 術后7 d，肝移植組和未轉染組的α-SMA表達較轉染組明顯（Plt;0.05）； 術后3 d，未轉染組和轉染組的BEC增殖指數明顯低于肝移植組（Plt;0.05）。轉染組術后各時相點的HO-1 mRNA表達水平均明顯高于相應時相點的其他各組的水平(Plt;0.05)； 移植術中經門靜脈輸入HOC對缺血性膽管損傷所誘導的BEC增殖有一定的抑制作用，對BEC具有一定的保護作用； 肝移植組生存率明顯低于假手術組和轉染組(Plt;0.05)。結論 IL-13的持續表達能促進術后移植肝內HO-1 mRNA的表達，這有利于對供肝的保護，有利于受體大鼠術后肝功能的恢復。促進HO-1 mRNA的表達是IL-13對BEC的具有保護作用的機理之一。
目的 構建包含IL-13基因片段的慢病毒載體，培養IL-13基因工程大鼠肝干細胞(肝卵圓細胞,HOC,WB-F344細胞)，將IL-13基因重組至WB-F344細胞中，使之可分泌大鼠IL-13。方法 人工合成大鼠IL-13基因，利用pWPXL-MOD(TG-005)載體構建包含大鼠IL-13基因片段的質粒； 制備慢病毒穿梭質粒及其輔助包裝元件載體質粒，四質粒載體(組成為pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G及目的穿梭質粒)分別進行高純度無內毒素抽提，共轉染293T細胞，培養48 h后，收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液，對其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液，定量PCR檢測病毒滴度。將構建好的慢病毒感染WB-F344細胞，5 d后采用real-time PCR檢測WB-F344細胞中IL-13的表達水平，Western blot檢測重組蛋白表達水平。結果 成功構建了IL-13過表達慢病毒載體，并獲得IL-13基因工程大鼠肝干細胞； 將IL-13基因重組至WB-F344細胞基因組中，并可在細胞中進行轉錄，慢病毒感染WB-F344細胞存在IL-13 mRNA表達，可分泌大鼠IL-13。結論 構建的基因工程WB-F344細胞能顯著分泌大鼠IL-13，感染后的WB-F344細胞的IL-13表達水平顯著高于感染前，滿足動物實驗要求。
摘要】目的 研究人白介素-13（hIL-13）對牛主動脈內皮細胞（BAECs）表達細胞間黏附分子-1（ICAM-1）和E-選擇素的影響，為hIL-13應用于誘導異種移植免疫耐受、減輕異種移植排斥反應提供實驗依據。 方法 用不同濃度的hIL-13（2、5、10、20及40 ng/ml）孵育 BAECs 2 h后，再與腫瘤壞死因子-α（TNF-α， 4 ng/ml）共孵育6 h或18 h； 應用細胞酶聯免疫吸附分析方法(Cell-ELISA)檢測BAECs表面的E-選擇素和ICAM-1的表達； 用MTT方法測定hIL-13對BAECs活性的影響。 結果 用hIL-13在5~20 ng/ml濃度內預處理BAECs后，能明顯抑制TNF-α誘導的E-選擇素與ICAM-1的表達，并呈現一定的劑量依賴性(P＜0.01)。經不同濃度hIL-13處理的BAECs活性與未經hIL-13處理者相比差異無統計學意義。 結論 hIL-13能明顯抑制BAECs表達E-選擇素與ICAM-1，誘導異種移植的免疫耐受，且hIL-13對BAECs無損傷作用。