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      2. 華西醫學期刊出版社
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          發表時間:2016-09-01 10:21 導出 下載 收藏 掃碼
        • 負載TGF-β3及BMSCs的Pluronic F-127復合凝膠在兔上頜竇提升中成骨及成血管作用的研究

          目的 制備負載TGF-β3及BMSCs的Pluronic F-127復合凝膠,觀察其體內、外成骨及成血管作用。方法 取新西蘭大白兔脛骨及股骨骨髓,分離培養BMSCs并傳代,取第3代細胞經成骨、成脂誘導培養鑒定后用于后續實驗。采用L-DMEM培養基溶解Pluronic F-127粉末、TGF-β3,分別制備 Pluronic F-127凝膠、TGF-β3+Pluronic F-127凝膠、BMSCs+Pluronic F-127凝膠、TGF-β3+BMSCs+Pluronic F-127凝膠。取第3代BMSCs,分別采用L-DMEM培養基(A組)、成骨誘導液(B組)、含Pluronic F-127凝膠的成骨誘導液(C組)、含TGF-β3+Pluronic F-127凝膠的成骨誘導液(D組)培養14 d后,ALP染色和茜素紅染色觀測成骨情況;另采用含Pluronic F-127凝膠的L-DMEM培養基(實驗組)、L-DMEM培養基(對照組)培養1、2、3、4 d,MTT法檢測細胞增殖情況。取10只新西蘭兔制備上頜竇提升模型后,于每只兔骨缺損處注入Pluronic F-127凝膠(A組)、TGF-β3+Pluronic F-127凝膠(B組)、BMSCs+Pluronic F-127凝膠(C組)、TGF-β3+BMSCs+Pluronic F-127凝膠(D組),于第8周取材行影像學檢查、HE染色觀察新骨形成情況,免疫組織化學染色觀察骨組織VEGF及BMP-2表達情況,Western blot檢測骨組織VEGF、抑瘤素M(oncostatin M,OSM)及BMP-4蛋白表達。結果 成骨、成脂誘導鑒定示分離培養細胞為BMSCs。體外實驗染色顯示D組ALP活性及茜素紅濃度高于其他組(P<0.05);MTT法檢測示隨著時間延長,兩組吸光度(A)值均逐漸升高,各時間點組間比較差異均無統計學意義(P>0.05)。體內實驗影像學檢查示D組成骨密度及成骨連續性最好,新骨體積占比優于其他組(P<0.05);HE染色示與其他組比較,D組骨小梁致密且排列規則,其上分布大量成骨細胞和破骨細胞,可見大量新骨形成;免疫組織化學染色示D組BMP-2、VEGF呈強陽性表達(P<0.05);Western blot檢測D組VEGF、OSM及BMP-4蛋白相對表達量高于其他組(P<0.05)。結論 負載TGF-β3及BMSCs的Pluronic F-127復合凝膠中的BMSCs能被誘導分化為成骨細胞,并且復合凝膠對細胞無毒性,在兔上頜竇內有明顯成骨及成血管效果。

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