目的 探討細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4（CTLA4Ig）融合蛋白對同種異體肝臟移植免疫耐受的誘導作用及機理。方法 利用大型哺乳動物獼猴作為研究對象，建立同種異體原位肝臟移植模型。同種異體原位肝臟移植對照組及CTLA4-Ig組各5只。觀察術后生存時間，檢測肝功能、IL-2、IL-10、排斥反應的病理學分級和術后肝臟細胞凋亡指數。結果 對照組平均存活時間為6.57 d，CTLA4-Ig組平均存活時間為14.92 d (Plt;0.05)。肝功能變化: 對照組術后ALT明顯升高，Alb則明顯降低; CTLA4-Ig組ALT及Alb均維持于正常穩定水平。細胞因子變化： 術后3 d起，對照組循環血中IL-2表達水平相對較高，而CTLA4-Ig組IL-10的表達水平較對照組高。移植物病理排斥反應分級: 在移植術后CTLA4-Ig組排斥反應程度明顯比對照組輕。對照組術后3 d起肝臟細胞凋亡指數較CTLA4-Ig組明顯升高。結論 CTLA4-Ig融合蛋白可誘導移植后免疫耐受，延長受體生存時間。細胞因子IL-2或者IL-10可作為監測移植排斥反應或者免疫耐受的實驗室指標之一。
目的 探討豬-猴異種血管移植超急性排斥反應（HAR）的機理。方法 豬股靜脈原位異種移植于恒河猴，發生HAR后通過免疫組化檢測移植血管IgG、IgM、C3及C4的沉積。結果 大量IgM、C3和C4沉積于移植靜脈內皮，未發現IgG沉積于移植血管內皮。結論 豬-猴異種移植HAR是由異種自然抗體IgM與異抗原特異結合啟動，進而以經典途徑激活補體系統而發生。
作者采用猴制急性壞死性胰腺炎（ANP）模型，觀察腫瘤壞死因子（TNF）以及生長抑素對猴ANP血漿TNF和猴死亡情況的影響。結果發現：猴ANP早期其血漿TNF明顯升高，與猴死亡呈平行關系；生長抑素可明顯降低TNF含量，使猴死亡率下降，存活時間延長。提示TNF是AFP早期的重要炎癥介質，生長抑素可明顯抑制炎癥反應過程，對猴ANP有確切的治療效果。
目的構建人膠質細胞源性神經營養因子（human glial cell derived neurotrophic factor，hGDNF）基因修飾的猴雪旺細胞穩定細胞系。 方法以pUC19-hGDNF為模板，擴增含hGDNF基因序列，將其插入質粒pBABE-puro，構建pBABE-puro-hGDNF重組真核表達載體，經酶切鑒定及DNA測序鑒定重組質粒。從恒河猴提取、培養、純化雪旺細胞。包裝病毒，利用含hGDNF基因的重組逆轉錄病毒轉染雪旺細胞，實時熒光定量PCR、Western blot檢測hGDNF mRNA及蛋白表達情況。 結果PCR產物hGDNF基因編碼序列大小約596 bp。重組表達載體經雙酶切鑒定，含有1 條596 bp的特異性條帶，其基因測序結果與基因庫中hGDNF基因序列片段相同，提示hGDNF基因成功轉入逆轉錄病毒。逆轉錄病毒轉染的雪旺細胞hGDNF mRNA及蛋白表達量顯著高于未轉染雪旺細胞，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論成功構建hGDNF基因修飾的猴雪旺細胞穩定細胞系，能長期穩定高效釋放hGDNF，為進一步將其應用于神經損傷修復奠定了基礎。
目的研究恒河猴BMSCs在缺氧再給氧環境下對新生豬胰島活性和功能的保護作用。 方法取健康成年恒河猴5只，體重6～10 kg，取骨髓采用骨髓單核細胞貼壁培養法篩選獲得BMSCs；取3～5日齡新生長白豬5 只，取胰腺以Ⅴ型膠原酶消化制備新生豬胰島。將實驗分為胰島正常組（A組）、胰島加BMSCs正常組（B組）、胰島缺氧再給氧組（C組）、胰島加BMSCs缺氧再給氧組（D組），觀察比較常規培養和缺氧（1%O2）12 h再給氧24 h或48 h條件下，胰島的功能活性變化：二乙酸熒光素/碘化丙啶（propidium iodide，PI）染色計算胰島成活率；細胞計數試劑盒8法檢測新生豬胰島的代謝活性；膜聯蛋白V-FITC/PI標記后流式細胞儀檢測胰島凋亡率；葡萄糖刺激法分析胰島功能糖刺激指數（stimulation index，SI）。 結果C組較A、B組胰島團更為分散，死亡細胞增多；D組較C組胰島團完整，成活率更高。A、B、C、D組胰島成活率分別為90.2% ± 9.1%、88.3% ± 5.9%、52.3% ± 12.1%、71.4% ± 11.5%，C、D組顯著低于A、B組（P lt; 0.05），D組顯著高于C組（P lt; 0.05）。D組BMSCs以1∶10和1∶20比例與胰島缺氧再給氧共培養后，代謝活性顯著高于C組（P lt; 0.05）。A、B、C、D組胰島凋亡率分別為27.1% ± 3.2%、24.0% ± 1.0%、64.3% ± 1.8%、46.2% ± 1.4%，C、D組顯著高于A、B組（P lt; 0.05），但D組顯著低于C組（P lt; 0.05）。各時間點A、B組SI比較差異均無統計學意義（P gt; 0.05），C組顯著低于A、B組（P lt; 0.05），在24 h和72 h時D組顯著高于C組（P lt; 0.05）。 結論BMSCs對缺氧再給氧誘導的新生豬胰島活性和功能損傷具有保護作用。
目的 建立恒河猴外周血CD4+CD25+調節性T淋巴細胞（regulatory T cells，Tregs）快速有效的分離純化方法。 方法4～5歲健康恒河猴10只，雌性4只，雄性6只，體重5～8 kg；于大隱靜脈抽取外周血，每只抽取8 mL。密度梯度離心法分離外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），分別采用非人靈長類Tregs分離試劑盒的生物素標記的混合抗體和磁珠標記的抗生物素抗體陰性分選，以及大鼠抗人CD4-活化蛋白C（activated protein C，APC）和抗APC多選試劑盒中的磁珠標記的抗APC抗體陽性分選出 CD4+ T淋巴細胞，比較兩種方法獲得細胞的得率、活性及純度；選擇得率、活性和純度較高的分選方法獲得的CD4+ T淋巴細胞，用磁珠標記的抗人CD25抗體進行陽性分選，獲得 CD4+CD25+ Tregs，流式細胞儀檢測純度、活性及FoxP3表達水平，以及Tregs對刀豆蛋白（concanavalin A，ConA）刺激的自體CD4+CD25-效應性T淋巴細胞（effective T cells，Teffs）增殖的抑制功能。 結果CD4+ T淋巴細胞陽性分選和陰性分選后，細胞活性均達95%左右，差異無統計學意義（P gt; 0.05），但陽性分選后CD4+ T淋巴細胞得率和純度均顯著高于陰性分選（P lt; 0.05）。后續CD4+CD25+ Tregs分選采用陽性分選法獲得的CD4+ T淋巴細胞。經雙陽性分選收集的目的細胞中CD4+CD25+ Tregs占76.2% ± 8.6%，活細胞比例為93.3% ± 4.7%，FoxP3陽性細胞比例為74.2% ± 6.9%。混合培養后Tregs均對ConA刺激的Teffs的增殖有抑制作用。 結論免疫磁珠雙陽性分選法能有效分選出恒河猴外周血中有功能的CD4+CD25+ Tregs。
目的觀察去細胞異種神經復合同種異體脂肪干細胞修復獼猴周圍神經缺損后的全身及局部免疫排斥反應，評價該修復材料的安全性。 方法健康成年雄性長白豬1只，體重48 kg，取脛神經制備去細胞異種神經；健康成年雄性獼猴1只，體重4.5 kg，分離培養脂肪干細胞；健康成年雌性獼猴10只，體重3～5 kg，制備25 mm長橈神經缺損動物模型，隨機分為復合細胞組和無細胞組（n=5），前者采用去細胞異種神經復合第3代脂肪干細胞移植修復，后者采用去細胞異種神經移植修復。于術前及術后14、60、90 d抽取外周靜脈血行淋巴細胞分析；術后5個月取材觀察移植物組織免疫反應和神經再生情況，并與自體神經移植組作比較。 結果復合細胞組與無細胞組術前及術后各時間點外周靜脈血淋巴細胞數量、T淋巴細胞百分率及其數量、CD8+ T淋巴細胞百分率、CD4+/CD8+ T淋巴細胞比值間比較，差異均無統計學意義（P gt; 0.05）；術后14 d，復合細胞組CD4+ T淋巴細胞百分率低于其余時間點， 差異有統計學意義（P lt; 0.05）；同一時間點兩組間比較，除術后14 d復合細胞組CD4+ T淋巴細胞百分率低于無細胞組，差異有統計學意義（P lt; 0.05）外，其余各時間點各指標組間比較差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。術后5個月，去細胞異種神經與周圍組織有輕度粘連，神經外膜較自體神經厚，未見組織壞死、纖維瘢痕形成，移植物內見再生神經纖維，復合細胞組、無細胞組均有稀疏的CD3+、CD4+、CD8+、CD68+、CD163+ T淋巴細胞散在分布，細胞浸潤情況與自體神經移植組類似。 結論去細胞異種神經移植修復獼猴周圍神經缺損后未產生全身及局部免疫排斥反應；復合同種異體脂肪干細胞移植后也未發現免疫排斥反應，且術后早期可能抑制CD4+ T淋巴細胞增殖。
目的 探討應用幾丁糖/ 聚乙烯醇神經導管修復獼猴周圍神經缺損的效果。 方法 成年獼猴12 只，雄性5 只，雌性7 只，體重3.26 ～ 5.35 kg。實驗動物隨機分成A、B、C 3 組，制備左側橈神經2 cm 缺損模型，分別用幾丁糖/ 聚乙烯醇神經導管移植、神經切除曠置和自體神經逆行原位移植處理。實驗動物右側為正常對照。術后8 個月，行大體觀察、組織學觀測及電生理檢測評價神經再生效果。 結果 術后8 個月，A 組再生神經通過神經導管長入神經缺損的遠側端，再生神經粘連較輕；B 組未見再生神經通過神經缺損斷端；C 組移植神經與周圍組織粘連較重。A、C 組可檢測出肌電圖表現，B 組未檢測到。A、C 組間波幅差異無統計學意義（P gt; 0.05），但均不及正常對照側，差異有統計學意義（P lt; 0.05）；C 組潛伏期和神經傳導速度優于A 組，但均不及正常對照側，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。有髓神經纖維密度：A、C 組較正常對照側小，差異有統計學意義（P lt; 0.05）；A、C 組間差異無統計學意義（P gt; 0.05）。有髓神經纖維直徑和髓鞘厚度：C 組優于A 組，但均不及正常對照側，差異均有統計學意義（Plt; 0.05）。 結論 幾丁糖/ 聚乙烯醇神經導管具有促進獼猴神經軸突再生的作用，有望成為自體神經替代材料應用于周圍神經缺損修復。
目的 探討用生物衍生骨材料和骨髓基質干細胞(MSCs)復合后構成的組織工程化骨對異體獼猴長段骨缺損的修復作用. 方法 于獼猴脛骨結節抽取MSCs并使誘導分化為成骨樣細胞,用5-溴脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)標記,培養后與人源生物衍生骨材料體外復合構成組織工程化骨,植入15只異體獼猴修復橈骨2.5 cm長段骨缺損作為實驗組;用單純生物衍生骨材料修復對側同樣骨缺損作為對照組;另取2只獼猴雙側橈骨同樣部位和大小骨缺損曠置作為空白組.術后1、2、3、6和12周時各處死3只動物取材,空白組12周取材,行大體觀察、組織學和免疫組織化學檢測. 結果 實驗組和對照組術后1、2和3周移植物周圍組織反應較明顯,6周后明顯減輕,12周時基本消失.實驗組標記成骨樣細胞于術后6周仍存在,術后12周基本消失;骨缺損部位骨樣組織、軟骨、編織骨和板層骨出現時間均較對照組早,且骨愈合時間提前3～6周.實驗組骨缺損以多點方式直接成骨,對照組則從兩端以"爬行替代"方式成骨.空白組術后12周骨缺損均無愈合. 結論 生物衍生骨材料和MSCs復合構建的組織工程化骨異體植入修復獼猴長段骨缺損可超越骨段移植的"爬行替代"過程,使骨缺損能較快愈合.生物衍生骨材料和同種異體MSCs復合組織工程化骨可作為構建骨組織工程的一種較好選擇方式.
目的 建立長白小家豬到恒河猴異位輔助性肝移植模型，總結手術操作要點。方法 以健康雄性長白小家豬和健康恒河猴各5只建立豬到猴異位輔助性肝移植模型。以長白小家豬作為肝移植供體，以恒河猴作為受體。保留長白小家豬的右后葉和部分右前葉作為供肝，移植到受體的左腎窩和左結腸旁溝處。短暫阻斷受體的腹主動脈和下腔靜脈血流后，將移植肝的門靜脈和肝下下腔靜脈分別與受體的腹主動脈和下腔靜脈行端側吻合。結扎移植肝的肝動脈，不予重建。術后觀察受體的一般情況和生存時間。結果 成功建立4對肝移植模型，供肝切取時間24～35min、（30±5） min，供肝修整時間31～51min、（40±10） min，受體下腔靜脈阻斷時間23～36min、（30±6） min，受體腹主動脈阻斷時間22～38min、（30±8） min，肝移植手術時間130～310min、（220±80） min，術中失血35～48mL、（42±6） mL。術后均無吻合口血栓形成及膽漏發生。4只受體分別于術后48、54、88及96h死亡，死亡原因均為排斥反應及術中失血過多。結論 豬到猴異位輔助性肝移植模型的可重復性強、手術易操作、移植器官灌注良好，可用于豬到非人類靈長類動物肝移植的進一步研究。