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      2. 華西醫學期刊出版社
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        找到 作者 包含"熊喜峰" 1條結果
        • 大鼠脂肪來源干細胞對紫外線造成的軟骨細胞 DNA 損傷的修復作用研究

          目的 探討大鼠脂肪來源干細胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)對紫外線照射造成的軟骨細胞 DNA 損傷的修復作用。 方法 取 3~4 周齡 SD 大鼠(體質量 100~120 g)腹股溝脂肪,利用 Ⅰ 型膠原酶消化法體外分離培養 ADSCs 并傳代;取第 3 代細胞采用流式細胞儀檢測其表面相關標記,行成骨及成脂誘導鑒定其多向分化潛能。另取 SD 大鼠關節軟骨,利用酶消化法分離培養軟骨細胞并傳代,并行甲苯胺藍染色鑒定。取第 3 代軟骨細胞,采用 40 J/m2 劑量紫外線照射;照射后細胞分別以正常培養基培養(照射組)、以含 ADSCs 培養上清的培養基培養(ADSCs 上清組)或與 ADSCs 共培養(ADSCs 組)24 h。以不進行紫外線照射的正常第 3 代軟骨細胞作為對照(對照組)。采用 MTS 法檢測細胞增殖情況,免疫熒光染色、Western blot 法檢測軟骨細胞 DNA 損傷標志蛋白磷酸化組蛋白 2A 變異體(phosphorylated histone family 2A variant,γH2AX)的表達情況。 結果 經流式細胞儀檢測及成骨、成脂誘導鑒定,所培養細胞為 ADSCs。對照組、照射組及 ADSCs 上清組吸光度(A)值分別為 2.20±0.10、1.34±0.04、1.57±0.06,照射組及 ADSCs 上清組顯著低于對照組,照射組顯著低于 ADSCs 上清組,比較差異均有統計學意義(P<0.05)。免疫熒光染色示,照射組、ADSCs 上清組及 ADSCs 組 γH2AX 蛋白熒光強度明顯高于對照組,但 ADSCs 上清組及 ADSCs 組 γH2AX 蛋白熒光強度明顯弱于照射組,ADSCs 組和 ADSCs 上清組則無明顯區別。Western blot 法檢測示,照射組、ADSCs 上清組及 ADSCs 組 γH2AX 蛋白相對表達量均明顯高于對照組,但 ADSCs 上清組及 ADSCs 組顯著低于照射組,差異均有統計學意義(P<0.05);ADSCs 組和 ADSCs 上清組比較差異無統計學意義(P>0.05)。 結論 大鼠 ADSCs 有助于恢復紫外線照射后的軟骨細胞的增殖,降低 DNA 損傷標志蛋白 γH2AX 的表達,對紫外線照射所致軟骨細胞損傷具有修復作用。

          發表時間:2017-05-05 03:16 導出 下載 收藏 掃碼
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