目的探討 p22phox 和 NOX5 在缺氧誘導成骨細胞自噬和凋亡中的作用。方法將新生大鼠顱骨組織剪碎，采用組織塊貼壁法及差速貼壁法分離純化成骨細胞。取第 1 代細胞行 HE、茜素紅、ALP 染色以及流式細胞儀鑒定。采用三氣培養箱制備成骨細胞缺氧模型，于缺氧 0、3、6、12、24 h 時，采用 Western blot 檢測 p22phox、NOX5、LC3Ⅱ/Ⅰ表達情況，流式細胞儀檢測活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）水平以及細胞凋亡率，選取細胞內 ROS 水平最高時間點作為后續實驗的缺氧時間點。將第 1 代成骨細胞分成正常組、si-p22phox 缺氧處理組和 si-NOX5 缺氧處理組，行對應轉染及缺氧處理后，采用 RT-PCR 檢測 si-p22phox 和 si-NOX5 抑制效率。然后再將第1 代成骨細胞分成正常組、si-NC 缺氧處理組、si-p22phox 缺氧處理組以及 si-NOX5 缺氧處理組，行對應轉染及缺氧處理后，采用 Western blot 檢測細胞 p22phox、NOX5、自噬相關蛋白（LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin）、凋亡相關蛋白（Bcl-2、Bax）表達情況，流式細胞術檢測細胞凋亡率和 ROS 水平。最后，將成骨細胞分成缺氧 12 h 組（缺氧組）和同時抑制 si-p22phox 及 si-NOX5 并缺氧 12 h 組（抑制+缺氧組），對應處理后免疫熒光染色觀察 Beclin 及 Bax 表達。結果經鑒定，分離獲得的細胞為成骨細胞。缺氧處理后，成骨細胞 p22phox、NOX5、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白相對表達量以及細胞凋亡率均逐漸升高（P<0.05），ROS 水平亦升高（P<0.05）且 12 h 達峰值；選擇缺氧 12 h 模型進行后續實驗。抑制 p22phox 基因不影響 NOX5 的表達，而抑制 NOX5 基因也不影響 p22phox 的表達；與單純缺氧處理相比，抑制 p22phox 或 NOX5 基因表達后 LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin、Bax 蛋白相對表達量下降（P<0.05），Bcl-2 蛋白相對表達量增高（P<0.05），細胞凋亡率及 ROS 水平亦下降（P<0.05）；同時抑制 p22phox 和 NOX5 基因表達后，免疫熒光染色見 Beclin、Bax 熒光較弱。結論抑制 p22phox 和 NOX5 基因表達可以降低缺氧條件下成骨細胞內 ROS 水平，同時降低細胞自噬以及凋亡，尤其減弱了細胞早期向晚期凋亡的過渡，增強了缺氧成骨細胞的增殖能力。