目的 制備負載威靈仙總皂苷（clematis total saponins，CTS）絲素蛋白微載體，探討其復合軟骨細胞后促進兔膝關節軟骨缺損修復的效果。方法 取5%絲素蛋白溶液與10 mg/mL CTS溶液、甘油混勻后，利用高壓靜電場結合冷凍干燥方法制備負載CTS絲素蛋白微載體，掃描電鏡對樣本表征并檢測CTS累積釋放量；同時制備絲素蛋白微載體。取6只4周齡新西蘭大白兔膝關節軟骨，分離培養軟骨細胞并傳代。取第3代細胞分別與兩種微載體在微重力條件下共培養7 d，期間倒置相差顯微鏡及掃描電鏡觀察軟骨細胞在微載體上黏附情況，細胞計數試劑盒8（cell counting kit 8，CCK-8）檢測細胞增殖活性，并與正常培養細胞比較。取30只3月齡新西蘭大白兔制備雙側膝關節軟骨缺損模型后隨機分為3組（n=20），A組膝關節軟骨缺損不作任何處理，B、C組分別采用絲素蛋白微載體-軟骨細胞復合物、負載CTS絲素蛋白微載體-軟骨細胞復合物填充關節軟骨缺損。術后12周取材，ELISA檢測關節液基質金屬蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9，MMP-9）、MMP-13、MMP組織抑制因子1（tissue inhibitor of MMP 1，TIMP-1）水平；大體觀察及組織學觀察（HE、甲苯胺藍染色）評估軟骨缺損修復情況；Western blot檢測Ⅱ型膠原及蛋白聚糖表達；組織學及誘導型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）免疫組織化學染色觀察關節滑膜炎癥程度。結果 負載CTS絲素蛋白微載體呈類球形，直徑主要在300～500 μm 之間，表面呈多孔結構，孔隙率達35.63%±3.51%；藥物緩釋檢測示微載體中CTS可長期緩慢釋放。微重力條件下隨培養時間延長，兩種微載體表面黏附的軟骨細胞逐漸增多，培養24 h時軟骨細胞增殖活性均較正常培養細胞提高（P<0.05），兩種微載體間差異無統計學意義（P>0.05）。動物體內實驗觀察，與A、B組相比，C組關節液中MMP-9、MMP-13含量均降低（P<0.05），TIMP-1含量上調（P<0.05）。與A組相比，B、C組軟骨缺損均有組織填充，且C組修復表面更完整，與周圍軟骨結合較好；組織學觀察及Western blot檢測顯示B、C組國際軟骨修復評分準則（ICRS）評分以及Ⅱ型膠原、蛋白聚糖相對表達量均優于A組，C組優于B組，差異均有統計學意義（P<0.05）。關節滑膜組織學觀察顯示，與A、B組相比，C組滑膜炎癥細胞浸潤及小血管增生減少，免疫組織化學染色示C組iNOS表達水平降低（P<0.05）。結論 負載CTS絲素蛋白微載體具有良好的CTS緩釋效果及生物相容性，在微重力條件下能促進共培養的軟骨細胞增殖，植入體內后能促進兔膝關節軟骨缺損修復。