目的觀察藍光照射對人視網膜色素上皮細胞鈣離子(Ca2+)-蛋白激酶C(PKC)信號通路的影響。 方法體外培養并鑒定人視網膜色素上皮(RPE)細胞,取第4代人RPE細胞隨機分組進行實驗。采用蛋白免疫印跡法測定培養細胞PKC蛋白表達,檢測佛波酯(PMA)和鈣磷酸結合蛋白(calphostin C)對PKC活性的影響,確定PMA與calphostin C影響PKC活性的最適宜濃度。采用非放射性核素法測定藍光照射處理對培養細胞PKC活性的影響。采用20 W,波長450~500 nm醫用藍光燈作為光源,光照強度(2000±500) Lux,照射6 h,24 h后終止培養,以此制造體外培養人RPE細胞光損傷。將培養細胞隨機分成5個組,即無光照、單純光照、光照聯合硝苯地平、光照聯合calphostin C、光照聯合PMA組。其中,無光照組不接受光照;單純光照組僅接受光照;光照聯合硝苯地平組接受光照和0.1 mmol/L的硝苯地平;光照聯合calphostin C組接受光照和100.0 nmol/L的calphostin C;光照聯合PMA組接受光照和100.0 nmol/L的PMA。用乙酰氧基甲基酯Ca2+熒光探針標記各組培養細胞,激光掃描共焦顯微鏡測定各組細胞內Ca2+濃度。比較各組細胞內Ca2+濃度差異。 結果經鑒定,體外培養人RPE細胞成功。100.0、200.0 nmol/L PMA處理的RPE細胞中PKC蛋白相對表達量高于0.1、1.0、10.0、50.0 nmol/L PMA處理的RPE細胞,差異有統計學意義(F=217.537,P<0.05),但100.0、200.0 nmol/L PMA處理組間PKC蛋白相對表達量比較,差異無統計學意義(P=0.072)。100.0、200.0 nmol/L calphostin C處理的RPE細胞中PKC蛋白相對表達量低于5.0、25.0、50.0、75.0 nmol/L calphostin C處理的RPE細胞,差異有統計學意義(F=164.543,P<0.05),但100.0、200.0 nmol/L calphostin C處理組間PKC蛋白相對表達量比較,差異無統計學意義(P=0.385)。藍光照射處理后,RPE細胞的PKC活性顯著升高,與未接受藍光照射處理的RPE細胞的PKC活性比較,差異有統計學意義(t=-9.869,P<0.05)。單純光照、光照聯合硝苯地平、光照聯合Calphostin C、光照聯合PMA組的RPE細胞內Ca2+濃度均高于無光照組,差異有統計學意義(F=26 764.92,P<0.05);光照聯合PMA組RPE細胞內Ca2+濃度高于單純光照、光照聯合硝苯地平及光照聯合calphostin C組(P<0.05),單純光照組高于光照聯合硝苯地平和光照聯合calphostin C組(P<0.05)。 結論藍光照射后人RPE細胞內PKC活性增高,Ca2+濃度增高。硝苯地平和calphostin C均能降低藍光照射后人RPE細胞內Ca2+濃度,PMA增加細胞內Ca2+濃度。