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      2. 華西醫學期刊出版社
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        找到 作者 包含"武成" 1條結果
        • 滑膜間充質干細胞體內外成骨特性的實驗研究

          目的探討大鼠滑膜間充質干細胞(synovium-derived mesenchymal stem cells, SMSCs)生物學特性及誘導成骨的可行性,評估SMSCs復合羥基磷灰石/殼聚糖/聚乳酸(hydroxylapatite/chitosan/poly L-latic acid, HA/CS/PLLA)支架材料在體內異位成骨能力。 方法采用酶消化法和貼壁法分離培養SMSCs,并利用流式細胞儀檢測細胞表型,SMSCs成脂及成骨誘導后分別行油紅O染色、ALP染色和茜素紅染色鑒定。取第3代SMSCs,成骨誘導1、7、14、21、28 d后,采用實時熒光定量PCR檢測骨鈣素(osteocalcin, OCN)、Ⅰ型膠原、ALP以及Runx-2 mRNA表達情況;成骨誘導后1、3、5、7、9、11 d,采用ELISA法檢測ALP活性;成骨誘導后7、14、21、28 d,采用茜素紅S法檢測鈣鹽沉積;以正常培養SMSCs作為對照組。體內實驗:取SD大鼠24只,隨機分為實驗組和對照組(n=12);取第3代SMSCs接種于HA/CS/PLLA支架材料,體外復合培養72 h后植入實驗組大鼠右下肢肌袋,對照組大鼠植入單純HA/CS/PLLA支架材料;術后4、8周通過X線片及組織學觀察分析SMSCs體內成骨情況。 結果提純后SMSCs CD147、CD90、CD105、CD44表達超過95%,而CD117、CD34、CD14、CD45表達低于10%;油紅O染色可見紅色脂滴形成,茜素紅染色可見紅色鈣化灶,ALP染色可見細胞質呈咖啡樣深染。實時熒光定量PCR檢測示,SMSCs成骨誘導7 d,Ⅰ型膠原、ALP、Runx-2 mRNA表達顯著增加,誘導14 d OCN mRNA表達顯著增加。成骨誘導后5、7、9、11 d ALP活性明顯高于對照組,7 d時達峰值(P<0.05)。成骨誘導14 d,鈣含量顯著增加,且隨誘導時間延長鈣含量逐漸增加(P<0.05),且均高于對照組(P<0.05)。體內實驗術后4、8周影像學和組織學觀測結果顯示,兩組均可見新生骨形成,但實驗組成骨量明顯多于對照組(P<0.05)。 結論SMSCs在體內、體外均可誘導成骨,可成為骨組織工程的種子細胞。

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