目的 制備原位交聯透明質酸水凝膠,并初步評價其體外生物相容性。 方法 采用醇鈉-酰氯法將丙烯酰氯與聚乙二醇反應,制得交聯劑聚乙二醇二丙烯酸酯(polyethylene glycol acrylate,PEGDA);采用傅里葉變換紅外光譜儀和核磁共振光譜儀檢測其分子結構。取透明質酸經化學修飾制備巰基化透明質酸(hyaluronic acid thiolation,HA-SH),采用Ellman法檢測其巰基含量并計算巰基化產率。采用PBS將HA-SH和PEGDA分別配制成一定濃度(W/V)溶液,其中HA-SH濃度為0.5%、1.0%及1.5%,PEGDA為2%、4%及6%,按照不同比例混合,獲得原位交聯透明質酸水凝膠,記錄交聯反應時間。取1.5%HA-SH、4%PEGDA制備的原位交聯透明質酸水凝膠,以浸提法檢測其細胞毒性;然后接種人BMSCs并培養72?h,熒光顯微鏡下觀察細胞形態及生長情況,并行活/死細胞染色觀察,評價材料生物相容性。 結果 傅里葉變換紅外光譜儀分析顯示,PEGDA中大多數羥基被丙烯酸酯基取代;核磁共振光譜儀分析顯示,PEGDA在5~7 ppm出現3組表征丙烯酸酯基的特征峰。HA-SH的巰基化產率為65.4%。2%~6%PEGDA與0.5%~1.5%HA-SH經不同比例混合后,交聯反應在2~70?min內完成;不同濃度及比例交聯形成的水凝膠均呈透明狀。透明質酸水凝膠浸提液細胞毒性分級為1級,滿足生物醫用材料的要求。培養72 h后,BMSCs在透明質酸水凝膠中分布均勻、生長良好,活/死細胞染色顯示以綠染活細胞為主。 結論 原位交聯透明質酸水凝膠具有細胞毒性低、體外生物相容性好、交聯時間可控的優點,有望成為組織工程種子細胞載體或組織缺損填充材料。