目的探討BMP-2體外誘導人跟腱來源肌腱干細胞（human Achilles tendon-derived stem cells，hATDSCs）成軟骨分化的作用。 方法無菌條件下取急性跟腱斷裂患者自愿捐贈的跟腱組織，膠原酶消化獲得有核細胞；以500個/cm2細胞密度接種，細胞貼壁呈克隆樣生長，混合培養獲得原代hATDSCs；體外傳代培養至第3代，流式細胞儀檢測hATDSCs免疫表型；油紅O染色、茜素紅染色及番紅O/快綠染色分別鑒定hATDSCs成脂、成骨及成軟骨分化能力。取第3代細胞體外三維培養成微球后分為兩組，實驗組用重組人BMP-2（recombinant human BMP-2，rhBMP-2）干預，對照組不進行干預。3周后行微球大體觀察；組織學切片行HE染色、番紅O/快綠染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學染色觀察；實時熒光定量PCR檢測成軟骨特異性基因SOX9、Ⅱ型膠原和軟骨聚集蛋白多糖（Aggrecan）表達。 結果原代hATDSCs體外培養呈克隆樣集落生長；傳代后以紡錘形、成纖維樣細胞生長，形態均一。hATDSCs陽性表達MSCs特異性表面標志CD44、CD90、CD105，陰性表達CD34、 CD45和CD146。多向分化潛能鑒定示hATDSCs成脂誘導3周油紅O染色陽性，成骨誘導4周茜素紅染色陽性，成軟骨誘導3周番紅O/快綠染色陽性。rhBMP-2誘導hATDSCs 3周，實驗組微球形成，體積顯著大于對照組；HE染色、番紅O/快綠染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學染色均呈陽性，實時熒光定量PCR檢測示SOX9、Ⅱ型膠原和Aggrecan mRNA表達顯著高于對照組（P lt; 0.05）。 結論體外BMP-2可促進hATDSCs成軟骨分化和蛋白聚糖合成增加，為研究慢性腱病組織病理學變化提供細胞生物學依據。
目的探討深低溫冷凍處理對大鼠髕腱組織中肌腱干細胞（tendon-derived stem cells，TDSCs）的成活、細胞活力、早期凋亡、遷移能力及肌腱相關基因表達的影響。方法取 12 只 4 月齡雄性 SD 大鼠雙側髕腱組織，其中 6 只大鼠 12 條髕腱組織（實驗組）進行深低溫冷凍處理；剩余髕腱組織（對照組）不作處理，作為正常對照。取兩組髕腱組織用 0.3% Ⅰ 型膠原酶消化獲得有核細胞，分別用錐蟲藍染色檢測有核細胞成活率、結晶紫染色檢測有核細胞克隆形成能力；取兩組髕腱組織分離培養 TDSCs，并傳至第 3 代，采用 Alamar Blue 法檢測細胞體外增殖能力；Annexin V-FITC/PI 雙染法檢測細胞早期凋亡率；Transwell 法檢測細胞遷移能力；實時熒光定量 PCR 檢測細胞肌腱相關基因 Ⅰ 型膠原（collagen type Ⅰ，Col1α1）、scleraxis（Scx）和 tenomodulin（Tnmd） mRNA 表達。結果與對照組（91.00%±3.63%）比較，實驗組原代有核細胞成活率為 61.65%±4.76%，差異有統計學意義（t=12.010，P=0.000）。兩組有核細胞接種后，均呈克隆樣生長；培養 12 d，實驗組每 1 000 個有核細胞克隆集落形成數為（8.41±0.33）個，較對照組（15.19±0.47）個顯著減少（t=28.910，P=0.000）。實驗組 TDSCs 占活性有核細胞比例為 1.37%±0.09%，較對照組 1.67%±0.10% 顯著減少（t=5.508，P=0.003）。第 3 代 TDSCs 培養 14 d 內兩組細胞生長趨勢一致；兩組各時間點吸光度（A）值比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。實驗組及對照組 TDSCs 早期凋亡率分別為 1.67%±0.06%、1.63%±0.06%，比較差異無統計學意義（t=0.707，P=0.519）。鏡下見，兩組均有 TDSCs 黏附于 Transwell 小室下室，實驗組細胞數為（445.00±9.70）個，對照組為（451.50±12.66）個，比較差異無統計學意義（t=0.998，P=0.342）。實驗組 Col1α1、Scx、Tnmd 的 mRNA 相對表達量分別為 3.498±0.065、0.062±0.002、（4.211±0.211）×10–5，對照組分別為 3.499±0.113、0.062±0.001、（4.341±0.274）×10–5，比較差異均無統計學意義（t=0.013，P=0.991；t=0.042，P=0.969；t=0.653，P=0.549）。結論大鼠肌腱組織經深低溫冷凍后其有核細胞成活率降低，但肌腱組織仍保留大量有活性 TDSCs，且細胞增殖能力、早期凋亡率、體外遷移能力及成肌腱分化能力未見明顯異常。