本研究目的為探究γ-分泌酶抑制劑DAPT(3, 5-二氟苯乙酰-L-丙氨酰-S苯基甘氨酸t-丁酯)對神經元前體細胞系分化的影響, 檢驗經DAPT誘導產生更多可用于移植的神經元的可能性。培養神經元前體細胞系GE6時, 以培養基中加入4μmol/L DAPT的為實驗組, 不加DAPT的為對照組, 分化4 d, 采用免疫熒光染色的方法分別檢測兩組細胞Tuj1、GFAP、O4的陽性率, 采用qRT-PCR分別檢測兩組細胞Tuj1 mRNA、GFAP mRNA相對表達量。免疫熒光染色表明實驗組Tuj1陽性率較對照組增加, 而GFAP和O4的陽性率較對照組減少, 這些差異均有統計學意義(P＜0.05)。qRT-PCR中兩組Tuj1和GFAP mRNA的變化趨勢與免疫熒光染色結果一致。結果提示DAPT能促進神經元前體細胞系向神經元分化, 抑制其向膠質細胞分化, 可以用DAPT誘導產生更多的可用于移植的神經元。
本研究通過分析小RNA(microRNAs)在大鼠大腦中間神經元前體細胞株GE6體外分化中的表達, 篩選出在中間神經元前體細胞系分化成熟過程中特異性表達的小RNA, 并預測分析其可能在此過程中的功能。實驗中, 將GE6在三種不同條件下培養, 即:不加入任何其他生長因子, 正常分化培養4天的GE6(Ge6_4d); 加入骨形態發生蛋白-2(BMP2)后分化培養4天的GE6(Ge6_bmp2);以及加入音猥因子(SHH)后分化培養4天的GE6(Ge6_shh)。設陰性對照組為未分化的GE6(Ge6_u)。四組GE6細胞進行細胞免疫熒光染色、qRT-PCR以及小RNA芯片檢測分析。通過四組細胞的兩兩比較、篩選及分析發現, 多種小RNA在GE6細胞的分化過程中含量有明顯變化。miR-710、miR-290-5p和miR-3473等在加入分泌因子BMP2的GE6細胞中含量顯著上調。這些小RNA可能對大鼠中間神經元分化起到重要的調控作用。