目的探討表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG）能否延緩軟骨細胞衰老及其作用機制。方法 取4周齡SPF級SD大鼠關節軟骨，采用Ⅱ型膠原酶分步消化法分離培養軟骨細胞并傳代。經甲苯胺藍染色、阿利新藍染色及Ⅱ型膠原蛋白免疫細胞化學染色鑒定后，將第2代細胞分為空白對照組、10 ng/mL IL-1β培養組以及6.25、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 μmol/L EGCG+10 ng/mL IL-1β共培養組，對應培養24 h后采用細胞計數試劑盒8觀測軟骨細胞活性，篩選EGCG最佳藥物濃度進行下一步實驗。進一步將第2代軟骨細胞分為空白對照組（A組）、10 ng/mL IL-1β培養組（B組）、EGCG+10 ng/mL IL-1β共培養組（C組）、EGCG+10 ng/mL IL-1β+5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine，3-MA）組（D組），對應培養后采用β-半乳糖苷酶染色檢測細胞衰老程度，單丹磺酰尸胺法檢測細胞自噬情況，實時熒光定量PCR檢測軟骨細胞衰老相關基因 ［Ⅱ型膠原、基質金屬蛋白酶3（matrix metalloproteinase 3，MMP-3）、MMP-13）］ 表達水平，Western blot檢測軟骨細胞相關蛋白（Beclin-1、LC3、MMP-3、MMP-13、Ⅱ型膠原、P16、mTOR、AKT）表達水平。結果 經鑒定分離培養細胞為軟骨細胞。與空白對照組相比，10 ng/mL IL-1β培養組細胞活力降低（P<0.05）；與10 ng/mL IL-1β培養組相比，各濃度EGCG+10 ng/mL IL-1β共培養組細胞活力上升，其中50.0、100.0、200.0 μmol/L EGCG明顯促進軟骨細胞活性（P<0.05）；研究選擇100.0 μmol/L EGCG進行后續實驗。與A組相比，B組細胞呈衰老變化。與B組相比，C組軟骨細胞衰老率降低，自噬增強，Ⅱ型膠原mRNA相對表達量上調，MMP-3和MMP-13 mRNA相對表達量下調；Beclin-1、 LC3及Ⅱ型膠原蛋白相對表達量上調，但P16、MMP-3、MMP-13、mTOR 及AKT蛋白相對表達量下降；上述差異均有統計學意義（P<0.05）。與C組相比，當D組添加3-MA后，軟骨細胞衰老率上升、自噬減少，上述目標蛋白及mRNA相對表達量均呈相反趨勢變化（P<0.05）。結論 EGCG通過PI3K/AKT/mTOR通路調控軟骨細胞自噬水平，發揮抗衰老作用。