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      2. 華西醫學期刊出版社
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        找到 作者 包含"施杞" 1條結果
        • 過表達Mash-1基因促進小鼠胚胎干細胞向神經細胞分化的研究

          目的探討過表達Mash-1基因對小鼠胚胎干細胞(embryonic stem cells,ESC)向神經細胞分化的影響。 方法采用病毒感染技術將MSCV-Mash-1基因、MSCV空載體感染至小鼠ESC(CE3細胞) (MSCV-Mash-1-CE3組、MSCV-CE3組),RT-PCR鑒定細胞Mash-1基因的表達情況;然后采用懸滴培養法使其形成擬胚體,再經神經培養液貼壁誘導分化。培養7、21 d于倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態改變;免疫熒光染色檢測細胞貼壁后其神經干細胞和神經元標記蛋白巢蛋白(nestin)和β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulin Ⅲ)的陽性率;實時熒光定量PCR檢測誘導培養0、1、7、14、21 d時,細胞甲胎蛋白(α-fetal protein,AFP)(內胚層標記基因)、Brachyury(中胚層標記基因)、FGF-5(外胚層標記基因)、Oct3/4(ESC標記基因)、nestin(神經干細胞標記基因)和β-tubulin Ⅲ(神經元標記基因)表達情況。以正常CE3細胞作為對照(CE3組)。 結果與MSCV-CE3組和CE3組比較,MSCVMash-1-CE3組細胞Mash-1基因表達明顯升高。經神經培養液誘導培養7、21 d后,MSCV-Mash-1-CE3組可見許多細胞折光性增強,長出細長軸突,出現單極、雙極或多極形態,呈神經干細胞和神經元細胞形態;MSCV-CE3組和CE3組僅能觀察到少數細胞長出細長軸突。免疫熒光染色檢測示MSCV-Mash-1-CE3組誘導分化7 d nestin陽性率和21 d β-tubulin Ⅲ陽性率顯著高于MSCV-CE3組及CE3組(P<0.05)。實時熒光定量PCR檢測示,與CE3組及MSCV-CE3組比較,培養1 d后MSCV-Mash-1-CE3組Brachyury表達明顯降低(P<0.05),FGF-5和nestin表達增高(P<0.05);7 d后β-tubulin Ⅲ表達亦顯著增高(P<0.05);CE3組及MSCV-CE3組以上指標比較,差異均無統計學意義(P>0.05)。3組間各時間點AFP和Oct3/4表達比較,差異均無統計學意義(P>0.05)。 結論過表達Mash-1基因能促進小鼠ESC向神經細胞方向分化。

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