目的 綜述國內外應用神經肌肉電刺激（neuromuscular electrical stimulation，NMES）治療周圍神經損傷的機制、參數選擇、臨床應用等研究進展。 方法 檢索近年來NMES 治療周圍神經損傷的國內外相關文獻，綜述分析相關研究進展。 結果 NMES 治療周圍神經損傷應在個體化參數、合適刺激方式下早期應用，具有促進神經再生、預防肌肉萎縮的作用。 結論 NMES 臨床應用安全、有效，植入式電刺激有望成為治療神經斷裂傷的較佳選擇。
目的 研究灌注式生物反應器中流體剪切力和物質轉運在大段組織工程骨構建過程中的作用。 方 法 抽取健康志愿者髂嵴處骨髓20 mL，分離、培養hBMSCs。將第3 代hBMSCs 與大段β-TCP 支架復合后，在灌注式生物反應器中灌注培養28 d。灌注過程中，通過改變培養基黏度或灌流量，對接種在支架上的hBMSCs 施加不同流體剪切力（1、2、3 倍）或給予不同速率（3、6、9 mL/min）的物質轉運。培養結束后，對接種在支架上的細胞行增殖及ALP 活性檢測，同時對細胞/ 支架復合體進行組織學觀察及形態學計量。 結果 灌流量均為3 mL/min 時，流體剪切力2 倍組的細胞活性高于其他各組，差異有統計學意義（P lt; 0.05）；當流體剪切力均為3 倍時，3、6、9 mL/min 灌流量組細胞活性差異無統計學意義（P gt; 0.05）。當灌流量均為3 mL/min 時，流體剪切力2 倍組和3 倍組的ALP 活性高于1 倍組，差異有統計學意義（P lt; 0.05）；當流體剪切力均為3 倍時，灌流量為6 mL/min 組的ALP 活性最高（Plt; 0.05）。灌注培養28 d 后，各組ECM 分布于整個β-TCP 支架內，灌流量均為3 mL/min 時，增加流體剪切力有利于支架內ECM 形成及礦化；當流體剪切力均為3 倍時，增加灌流量使ECM 的礦化減少。 結論 流體剪切力和物質轉運兩個流體動力學參數是影響大段組織工程骨構建的重要因素。在構建大段組織工程骨過程中，應調節流體動力學參數使其對組織工程骨的構建發揮最佳效應。
目的 觀察重組人骨形成蛋白2（recombined human bone morphogenetic protein 2, rhBMP-2）異位誘導成骨過程中神經生長因子（nerve growth factor, NGF）及其高親和力受體（tyrosine kinase receptor A, TrkA）的表達，探討NGF在BMP骨誘導中的作用。 方法 ICR小鼠36只，隨機分為實驗組和對照組，每組18只，均制備右側股后部肌袋異位成骨模型。實驗組植入含rhBMP2膠原復合物，對照組僅植入相同體積的膠原海綿。分別于術后7、14和21 d取材，行大體、組織學、免疫組織化學觀察及RT-PCR檢測。結果 大體觀察實驗組術后7 d，右股后部可捫及較硬腫塊；術后14、21 d，腫塊硬度增加。對照組各時間點未發現腫塊。組織學觀察實驗組中rhBMP2膠原復合物具有良好的誘導成骨能力，免疫組織化學結果顯示骨誘導材料植入后7 d，NGF于成纖維細胞、成軟骨細胞、軟骨細胞、肥大軟骨細胞和成骨細胞中均有陽性表達；14 d，NGF陽性表達局限于部分成骨細胞、幼稚骨細胞和成骨樣細胞，同時在骨髓中單核巨噬細胞、多核巨噬細胞和破骨細胞中有明顯表達；21 d，只有少量成骨樣細胞和破骨細胞以及骨髓中多核巨噬細胞有NGF表達；TrkA免疫組織化學染色與NGF的表達基本一致。對照組術后各時間點未見成骨現象。實驗組NGF mRNA的 RT-PCR檢測顯示，術后7 d NGF的mRNA表達最高，14 d表達下降，21 d只有微量表達。結論 rhBMP-2復合物是一種有效的誘導成骨材料。在外源性BMP誘導成骨過程中有明顯的NGF及其高親和力受體TrkA的表達，NGF可以通過直接和間接的方式參與BMP的誘導成骨過程。
目的 利用外源性細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4 immuno globlin，CTLA4Ig) 阻斷T細胞反應的第2信號，誘導新鮮同種異體骨移植免疫耐受。方法 采用近交系小鼠BALB/C 66只作為骨移植的受體，進行異位肌袋一次及第2次骨移植。一次移植分為3組，每組18只，一組移植C57BL/6小鼠骨骼，注射L6（對照品），為AL組；一組移植C57BL/6小鼠骨骼，注射CTLA4-Ig，為AC組；一組移植同系BALB/C小鼠骨骼，注射PBS緩沖液，為AB組。在第2、4及6周，進行血淋巴細胞亞群分析，血清抗體測定，供體細胞及抗原二次刺激實驗及組織學觀察。另取12只BALB/C小鼠，進行第2次移植實驗，供體為C57BL/6小鼠的骨骼，注射CTLA4-Ig后2周，分別移植C57BL/6（BC組）和C3H（BH組）小鼠的骨骼，檢測產生免疫耐受的特異性。結果 AL組與AB組比較，產生了強烈的免疫排斥反應，移植后2、4及6周，CD4 T細胞的增殖明顯增加（Plt;0.05），血清抗體明顯增多（Plt;0.05）,供體細胞及骨抗原二次刺激的細胞增殖也明顯增加（Plt;0.05）；AC組免疫排斥反應較輕，在CD4 T細胞的增殖、血清抗體及二次刺激的細胞增殖方面均與AB組相似（Pgt;0.05）；組織學觀察也顯示，異體骨周圍的淋巴細胞浸潤消失，軟骨誘導及新骨形成，并出現幼稚的骨髓腔，與AB組相似。第2次移植實驗發現，BC組無論在CD4亞群增殖還是二次刺激增殖方面均明顯低于BH組，免疫耐受具有供體特異性。結論 在6周內CTLA4-Ig誘導了小鼠新鮮同種異體骨移植免疫耐受，這為解決骨移植免疫反應問題開辟了嶄新的途徑，并為其他器官移植提供了重要的理論依據。
目的研究人工全髖關節假體無菌性松動后假體周圍組織的血管化程度，探討其與假體周圍骨溶解的關系。 方法取2009年10月-2012年6月22例（22髖）因假體無菌性松動行髖關節翻修術患者假體周圍界膜組織，其中男12例，女10例；年齡53～81歲；假體使用壽命6～14年。術中根據假體周圍標準分區法，結合術前影像學表現，將假體周圍界膜組織分為骨溶解區組和非骨溶解區組。另取同期8例（8髖）行人工全髖關節置換的骨關節炎患者滑膜組織作為對照組，其中男3例，女5例；年齡58～72歲。行HE染色觀察組織學特征，根據骨溶解區組金屬或聚乙烯顆粒數量行磨損程度分級。采用CD34免疫組織化學染色對組織內的血管進行標記，計算微血管密度及微血管指數，比較不同組間血管化程度以及不同磨損程度下血管化程度的變化。 結果組織學觀察骨溶解區組界膜組織中可見磨損顆粒聚集以及單核-巨噬細胞浸潤廣泛，非骨溶解區組以纖維細胞為主。免疫組織化學染色示，非骨溶解區組微血管密度和微血管指數較骨溶解區組和對照組顯著降低（P＜0.05）；骨溶解區組以上指標較對照組低，但差異無統計學意義（P>0.05）。金屬、聚乙烯顆粒重度磨損組織微血管密度和微血管指數均較對應的輕度磨損組織明顯減少（P＜0.05）；相同磨損程度時，聚乙烯磨損顆粒以上指標均較金屬磨損顆粒高，但差異無統計學意義（P>0.05）。 結論界膜組織內單核細胞發揮吞噬功能需要一定數量的微血管和血供，假體-骨界面組織微血管損傷或者血供減少，可能是造成假體周圍骨整合不良和假體無菌性松動的重要原因。
體外分離培養豬滑膜源性MSCs（synovium-derived MSCs，SMSCs），探討其在體外多向分化潛能。 方法 2 月齡長楓雜交豬3 頭，雌雄不限，體重8 ～ 10 kg。取豬膝關節滑膜組織分離SMSCs 并行原代及傳代培養，待第3 代SMSCs 長滿培養皿后，吸去基礎培養液，分別加入特定培養液進行成軟骨、成骨、成脂誘導分化，作為實驗組；以基礎培養液培養作為對照組。成軟骨誘導21 d 后行甲苯胺藍染色、免疫組織化學染色和實時熒光定量 PCR 檢測；成骨誘導10 d 后行ALP 染色檢測，21 d 后行茜素紅染色檢測；成脂誘導21 d 后行油紅O 染色檢測。 結果 SMSCs 培養24 h后細胞形態細長或呈多角形；48 h 后細胞數量增多；72 h 后可見大量紡錘形細胞，其間散在分布少許小圓形細胞。實驗組成軟骨誘導21 d 后甲苯胺藍染色呈陽性，細胞外有蛋白多糖（Aggrecan）形成；免疫組織化學染色示特異軟骨基質Col Ⅱ表達；實時熒光定量PCR 檢測示Col Ⅱ A1、Aggrecan、SOX9 mRNA 表達量與對照組比較，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。成骨誘導10 d 后ALP 染色陽性，21d 后茜素紅染色陽性，有鈣結節形成。成脂誘導21 d 后油紅O 染色示細胞內有脂滴形成。對照組除ALP 染色觀察呈弱陽性外，余染色均呈陰性。 結論 豬膝關節滑膜組織可分離獲取SMSCs，其在體外具有向成軟骨、成骨、成脂多向分化潛能，有望成為組織工程種子細胞來源。
【摘 要】 目的 評價HA 復合rhBMP-2 的腺病毒（adenovirus mediated rhBMP-2，Adv-rhBMP-2）轉染的羊BMSCs 對骨痂延長骨愈合的影響。 方法 成年山羊19 只，雌雄不限，體重15 ～ 20 kg。于每只羊髂嵴上穿刺抽取骨髓10 mL，常規傳代培養BMSCs。取第3 代BMSCs，以感染復數200 轉染腺病毒。取0.25% 胰蛋白酶消化轉染后3 d 的細胞1 ×108 個，與HA 充分混勻制備Adv-rhBMP-2/BMSCs/HA。建立山羊右側脛骨延長模型，術后立即于截骨部位注射自體細胞復合物。按術后注入物質不同隨機分成4 組：A 組為Adv-rhBMP-2/BMSCs/HA 組（n=6），B 組為Adv-rhBMP-2/BMSCs 組（n=5），C 組為Adv-β-gal/BMSCs/HA 組（n=4），D 組為空白組（n=4）。術后第7 天開始行脛骨延長，速度1 mm/d，共延長4 周。術后5、8、12 周攝X 線片觀察骨痂生長情況，12 周處死動物，取標本分別行骨密度檢測、生物力學測定、組織學觀察和骨形態計量學分析。 結果 X 線片檢查示，術后5、8 周A、B 組骨痂生成量明顯多于C、D 組，X 線片定量評分A、B 組明顯高于C、D 組，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；12 周各組均在骨延長部位形成連續骨痂。骨密度測定：術后12 周A、B、C、D 組延長部位骨礦物質含量分別為（4.175 ± 1.921）、（2.600 ± 0.638）、（2.425 ± 0.826）和（1.175 ± 0.574） g，骨礦物質密度分別為（0.612 ± 0.196）、（0.630 ± 0.159）、（0.450 ± 0.166）和（0.266 ± 0.113）g/cm2，A、B 組顯著高于C、D組（P lt; 0.05）。生物力學測定：A、B、C、D 組最大載荷分別為（490.20 ± 155.08）、（350.59 ± 80.48）、（221.95 ± 68.79）和（150.65 ± 92.29）N，彈性模量為（178.24 ± 105.80）、（105.88 ± 27.09）、（81.18 ± 48.67）和（50.35 ± 47.64）MPa，各指標A組顯著高于C、D 組（P lt; 0.05）。組織學觀察見A 組骨延長處大量新生骨組織，骨小梁多為縱行網狀排列。骨形態計量分析示A、B、C、D 組新骨體積分別為72.35% ± 5.68%、67.58% ± 7.42%、49.63% ± 4.87% 和38.87% ± 2.35%，A 組新生骨生成量明顯比D 組多（P lt; 0.05）。 結論 HA 復合rhBMP-2 修飾的BMSCs 制備的組織工程骨可促進羊脛骨延長骨愈合。
構建含人IL-1 受體拮抗蛋白（IL-1 receptor antagonist，IL-1Ra）逆轉錄病毒表達載體（PLXRNIL-1Ra），體外轉染人骨關節炎（osteoarthritis，OA）軟骨細胞，研究其相關特性。 方法 利用細菌內同源重組技術快速構建PLXRN-IL-1Ra 逆轉錄病毒重組質粒，經測序及酶切鑒定正確后轉染PT67 細胞，包裝成為重組PLXRN-IL-1Ra 逆轉錄病毒，并使用小鼠腎成纖維細胞系NIH/3T3 對病毒進行滴度測定。實驗分為3 組：未轉染組（A 組）、PLXRN 空質粒轉染組（B 組）、PLXRN-IL-1Ra 轉染組（C 組），病毒感染人OA 軟骨細胞后，RT-PCR 檢測細胞內IL-1Ra 基因的轉錄和表達；ELISA 法檢測細胞培養上清液中人IL-1Ra 蛋白表達。 結果 酶切鑒定及基因測序證實重組逆轉錄病毒質粒中含有人IL-1Ra cDNA，測定包裝的病毒滴度為3 × 104 CFU/mL。原代軟骨細胞體外培養呈多角形或梭形，甲苯胺藍染色見細胞內有紫色異染顆粒。RT-PCR 結果顯示在C 組出現311 bp 人IL-1Ra mRNA 片段，A、B 組未見人IL-1Ra mRNA 的表達帶，GAPDH 在各組均有表達。ELISA 檢測發現C 組細胞上清有一定量的人IL-1Ra 表達，蛋白濃度為（60.47 ± 15.13）ng/L，A 組和B 組均無人IL-1Ra 表達。 結論 構建的IL-1Ra 逆轉錄病毒表達載體成功地感染人OA 軟骨細胞，并在體外獲得穩定表達，為將表達人IL-1Ra 基因的人OA 軟骨細胞用于OA 基因治療提供了實驗依據。