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      2. 華西醫學期刊出版社
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        找到 關鍵詞 包含"成骨能力" 1條結果
        • 褪黑素對卵巢摘除大鼠體內炎癥狀態及BMSCs成骨能力影響的研究

          目的探討褪黑素(melatonin,MT)對卵巢摘除(ovariectomy,OVX)大鼠骨量、血清炎癥因子水平和對脂多糖刺激下BMSCs培養液中炎癥因子水平和成骨能力的影響。方法將15只12周齡SD大鼠隨機分為3組,假手術組大鼠僅接受雙側側腹部切開縫合,OVX組行雙側OVX,OVX+MT組在雙側OVX術后行100 mg/(kg·d)MT口服干預。8周后采用ELISA法檢測大鼠血液樣本中炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-α表達水平;用Micro-CT檢測股骨遠端,觀察骨量及骨微結構變化并對骨體積分數、骨小梁厚度和骨小梁數量進行定量檢測。取3只3周齡SD大鼠,采用全骨髓培養法提取股骨骨髓中的BMSCs并傳代培養。經鑒定后取第3~5代細胞,用不同濃度(0、1、10、100、1 000 μmol/L)MT干預并行細胞計數試劑盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法檢測細胞活力,篩選最佳濃度MT用于后續實驗。將細胞分為成骨誘導組(A組)及成骨誘導+1/5/10 μg/mL脂多糖組(B~D組),進行相應干預后用ELISA法檢測細胞培養液中IL-1β、IL-6和TNF-α表達水平;根據CCK-8法和ELISA檢測結果,用刺激炎癥效果最顯著濃度的脂多糖以及最佳藥物濃度的MT加成骨誘導培養基對細胞進行干預,并設為E組,同樣采用ELISA法檢測各炎癥因子表達水平;之后分別對A、D、E組行ALP染色和茜素紅染色,并用實時熒光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)法檢測成骨相關基因Ⅰ型膠原α1鏈(collagen type Ⅰ alpha 1 chain,Col1a1)、RUNX家族轉錄因子2(RUNX family transcription factor 2,Runx2)表達水平。結果ELISA和Micro-CT檢測示,與假手術組比較,OVX組大鼠骨量減少,血清炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α表達水平升高(P<0.05);經MT治療后,OVX+MT組上述指標均得到改善(P<0.05)。成功提取大鼠BMSCs,CCK-8法檢測示100 μmol/L是不影響細胞活性的最大MT濃度,將其用于后續實驗。ELISA檢測示,加入脂多糖刺激后,B~D組細胞培養液中的炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-α表達水平明顯升高,與A組比較差異均有統計學意義(P<0.05);并且呈濃度依賴性,D組各炎癥因子表達水平明顯高于B、C組(P<0.05);E組加入MT干預后,各炎癥因子表達水平較D組顯著降低(P<0.05)。ALP染色、茜素紅染色及RT-qPCR檢測示,與A組比較,D組ALP和茜素紅陽性面積百分比以及Col1a1、Runx2 mRNA相對表達量均顯著降低,經MT干預后E組上述指標均顯著提升,差異均有統計學意義(P<0.05)。 結論MT可能通過降低大鼠體內炎癥對絕經后骨質疏松癥的骨量產生影響;MT能降低脂多糖刺激引起的BMSCs炎癥,并減弱其對BMSCs成骨分化的抑制。

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