目的探討深低溫冷凍處理對大鼠髕腱組織中肌腱干細胞(tendon-derived stem cells,TDSCs)的成活、細胞活力、早期凋亡、遷移能力及肌腱相關基因表達的影響。方法取 12 只 4 月齡雄性 SD 大鼠雙側髕腱組織,其中 6 只大鼠 12 條髕腱組織(實驗組)進行深低溫冷凍處理;剩余髕腱組織(對照組)不作處理,作為正常對照。取兩組髕腱組織用 0.3% Ⅰ 型膠原酶消化獲得有核細胞,分別用錐蟲藍染色檢測有核細胞成活率、結晶紫染色檢測有核細胞克隆形成能力;取兩組髕腱組織分離培養 TDSCs,并傳至第 3 代,采用 Alamar Blue 法檢測細胞體外增殖能力;Annexin V-FITC/PI 雙染法檢測細胞早期凋亡率;Transwell 法檢測細胞遷移能力;實時熒光定量 PCR 檢測細胞肌腱相關基因 Ⅰ 型膠原(collagen type Ⅰ,Col1α1)、scleraxis(Scx)和 tenomodulin(Tnmd) mRNA 表達。結果與對照組(91.00%±3.63%)比較,實驗組原代有核細胞成活率為 61.65%±4.76%,差異有統計學意義(t=12.010,P=0.000)。兩組有核細胞接種后,均呈克隆樣生長;培養 12 d,實驗組每 1 000 個有核細胞克隆集落形成數為(8.41±0.33)個,較對照組(15.19±0.47)個顯著減少(t=28.910,P=0.000)。實驗組 TDSCs 占活性有核細胞比例為 1.37%±0.09%,較對照組 1.67%±0.10% 顯著減少(t=5.508,P=0.003)。第 3 代 TDSCs 培養 14 d 內兩組細胞生長趨勢一致;兩組各時間點吸光度(A)值比較,差異均無統計學意義(P>0.05)。實驗組及對照組 TDSCs 早期凋亡率分別為 1.67%±0.06%、1.63%±0.06%,比較差異無統計學意義(t=0.707,P=0.519)。鏡下見,兩組均有 TDSCs 黏附于 Transwell 小室下室,實驗組細胞數為(445.00±9.70)個,對照組為(451.50±12.66)個,比較差異無統計學意義(t=0.998,P=0.342)。實驗組 Col1α1、Scx、Tnmd 的 mRNA 相對表達量分別為 3.498±0.065、0.062±0.002、(4.211±0.211)×10–5,對照組分別為 3.499±0.113、0.062±0.001、(4.341±0.274)×10–5,比較差異均無統計學意義(t=0.013,P=0.991;t=0.042,P=0.969;t=0.653,P=0.549)。結論大鼠肌腱組織經深低溫冷凍后其有核細胞成活率降低,但肌腱組織仍保留大量有活性 TDSCs,且細胞增殖能力、早期凋亡率、體外遷移能力及成肌腱分化能力未見明顯異常。