目的探討應用細胞膜片技術構建三維真皮樣組織的新策略。方法取 2～3 周齡新西蘭大白兔骨髓，采用全骨髓貼壁法分離培養兔 BMSCs（rabbit BMSCs，rBMSCs）并傳代，取人皮膚成纖維細胞（human dermal fibroblasts，HDFs）傳代培養。取第 2 代 rBMSCs、第 3 代 HDFs 分別于培養皿采用膜片條件培養基連續培養 2 周，獲得單層細胞膜片。取人臍靜脈內皮細胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）接種于 rBMSCs 膜片上，構建預血管化膜片。培養期間于倒置相差顯微鏡下觀察膜片上細胞形態變化；共培養 1、3、7、14 d 后取材行 HE 染色、CD31 免疫熒光染色，觀察細胞分布及微血管網絡生成情況，以 rBMSCs 膜片作為對照。分別將培養 7 d 的預血管化膜片（實驗組）及 rBMSCs 膜片（對照組）放于 2 層 HDFs 膜片中間，制備三維真皮樣組織，培養 24 h 后行 CD31 免疫熒光染色及Ⅰ、Ⅲ型膠原免疫組織化學染色，評估細胞分布及膠原表達情況。結果細胞連續培養 2 周后成功制備 HDFs 膜片及 rBMSCs 膜片。HUVECs 接種于 rBMSCs 膜片 3 d 后重新排列，7 d 后形成網狀結構，14 d 后網狀結構更明顯；HE 染色見膜片間有空泡形成，且隨時間延長空泡日趨明顯、膜片厚度顯著增加；CD31 免疫熒光染色可見微血管管腔形成。而 rBMSCs 膜片僅見細胞膜片增厚，未見細胞形態改變、空泡結構形成。三維真皮樣組織觀測顯示，實驗組內皮細胞 CD31 免疫熒光染色呈陽性，rBMSCs、HDFs 及 HUVECs 細胞排列整齊；而對照組染色呈陰性，細胞隨機排列。實驗組和對照組Ⅰ、Ⅲ型膠原均呈陽性表達，與對照組比較，實驗組細胞排列緊密，細胞基質分布規律，呈“蜂巢狀”結構；兩組Ⅰ、Ⅲ型膠原表達量差異無統計學意義（P>0.05）。結論應用細胞膜片技術可以構建三維真皮樣組織，其中采用 HUVECs 聯合 rBMSCs 膜片構建預血管化膜片后細胞基質分布較規律，具有形成組織工程真皮的潛力。