目的 探討應用帶蒂胸鎖乳突肌移位術動態修復晚期面癱畸形的療效。方法 1999年 12月以來 ,采用帶蒂胸鎖乳突肌移位術修復7例晚期面癱 ,將胸鎖乳突肌的胸骨頭及鎖骨頭移位至患側口周 ,替代癱瘓的口周肌肉 ,修復因面神經癱瘓所致的口鼻歪斜畸形及活動障礙。保留副神經的其余功能。結果 術后立即矯正靜態時口鼻歪斜畸形 ,1周后已能活動患側口角。術后1個月 ,經訓練能恢復笑容。經10個月隨訪 ,所有患者口部活動恢復滿意。結論 帶蒂胸鎖乳突肌移位術能修復晚期面癱所致的口鼻畸形 ,并能重建口部表情功能。
目的 探討增生性瘢痕、瘢痕疙瘩及正常皮膚成纖維細胞中肌動蛋白和肌球蛋白 的不同表達情況及其與瘢痕攣縮的關系。方法 取增生性瘢痕 15例 ,瘢痕疙瘩 10例 ,正常皮膚 15例 ,用免疫組織化學方法檢測其中肌動蛋白和肌球蛋白 的表達情況 ,同時做細胞培養 ,用流式細胞術檢測成纖維細胞中肌動蛋白和肌球蛋白 的表達情況。結果 增生性瘢痕肌球蛋白 的免疫組織化學染色呈陽性 ,而瘢痕疙瘩及正常皮膚肌球蛋白 的表達均為陰性。增生性瘢痕肌球蛋白 的表達較其它兩種組織有非常顯著性差異 (Plt;0 .0 1) ,而瘢痕疙瘩和正常皮膚無顯著性差異 (Pgt;0 .0 5 )。流式細胞術檢測增生性瘢痕、瘢痕疙瘩及正常皮膚三種組織中肌球蛋白 的陽性率分別為 (95 .11± 2 .78) %、(16 .86± 7.11) %及 (5 .31± 1.79) % ,增生性瘢痕肌球蛋白 表達的陽性率較其它兩種組織有非常顯著性差異 (Plt;0 .0 1) ,而瘢痕疙瘩和正常皮膚無顯著性差異 (Pgt;0 .0 5 )。三種組織中肌動蛋白的免疫組織化學染色均為陽性 ,無顯著性差異 (Pgt;0 .0 5 )。流式細胞術檢測三種組織中肌動蛋白的陽性率分別為（77.77±15.43）%、（88.89 ±10.29）%及（82.92± 13.48）%，其表達的陽性率無顯著性差異（Pgt;0 .0 5 ）。結論 瘢痕攣縮與肌球蛋白 密切相關，而肌動蛋白在細胞中收縮蛋白之一外，同時與細胞的活動及運動有關，是細胞生命活動中必不可少的蛋白之一。
目的 探討增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纖維細胞中肌動蛋白(actin)與瘢痕攣縮的關系。方法 取增生性瘢痕10例，瘢痕疙瘩5例，對成纖維細胞進行培養，并抽提細胞內蛋白成份后用SDS-PAGE電泳，然后通過凝膠掃描儀測定兩種組織來源的成纖維細胞內的總肌動蛋白、纖維狀肌動蛋白(F肌動蛋白)、球形肌動蛋白(G肌動蛋白)的量，并計算F/G肌動蛋白的比值。結果 增生性瘢痕細胞每104個細胞內含總肌動蛋白、F肌動蛋白、G肌動蛋白分別為2.38ng、0.98ng、1.42ng，F/G肌動蛋白的比值為0.68，而瘢痕疙瘩分別為1.68ng、0.46ng、1.26ng及0.36。統計學分析，在總肌動蛋白、F肌動蛋白及F/G肌動蛋白的比值上兩種瘢痕有非常顯著性差異(Plt;0.01)，而G肌動蛋白在兩種瘢痕中無顯著性差異(Pgt;0.05)。結論 瘢痕攣縮與細胞內總肌動蛋白、F肌動蛋白及F/G肌動蛋白的值密切相關，細胞內總肌動蛋白、F肌動蛋白及F/G肌動蛋白的比值不同可作為區分增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的依據之一。
目的 脂肪來源干細胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）是組織工程種子細胞的重要來源之一。探討低溫保存對hADSCs 體外生長特性及成骨分化潛能的影響，驗證凍存后的ADSCs 作為組織工程骨種子細胞的可行性。 方法 取自愿捐獻的經脂肪抽吸術獲取人脂肪組織，采用膠原酶消化法分離hADSCs。取第2 代hADSCs 置于— 196℃液氮保存4 周后，37℃復蘇并測定細胞存活率。實驗分為兩組，實驗組為低溫保存的hADSCs，對照組為未經低溫保存的hADSCs；均用成骨誘導液誘導培養。采用DNA 定量（Hoechst33258 熒光比色法）測定細胞體外增殖活性，ALP 染色及茜素紅染色法測定ALP 活性和Ca2+ 含量，觀察低溫凍存對細胞成骨能力的影響。 結果 低溫凍存復蘇后的hADSCs 存活率為90.44% ± 2.62%。兩組細胞數量隨成骨誘導時間延長不斷增加，7 d 達平臺期；ALP 表達活性也不斷增加，于成骨誘導11 d 達平臺期，且2 周時ALP 染色均呈陽性；成骨誘導3 周時兩組茜素紅染色均呈強陽性反應。兩組各時間點細胞數量、ALP 活性和Ca2+ 含量比較差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。 結論 低溫保存的hADSCs 體外生長及成骨能力未發生顯著變化，可以作為組織工程骨的種子細胞。
目的 探討兔口腔黏膜細胞的體外培養方法，并以其為種子細胞與異體膀胱黏膜下脫細胞基質（bladder acellular matrix graft，BAMG）復合，構建組織工程尿道。 方法 18 只10 周齡雄性新西蘭大耳白兔，體重0.3 ～ 0.5 kg。取其中12 只兔口腔黏膜組織，分離獲得口腔黏膜細胞。將口腔黏膜細胞分別接種于有3T3 細胞及無3T3細胞的培養皿進行培養，接種后第2 天于倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態變化，繪制細胞生長曲線，觀察生長增殖情況，并行免疫熒光組織化學染色鑒定。取余6 只兔膀胱，經脫細胞處理制備BAMG，隨機取1 cm × 1 cm 組織行HE 染色，觀察脫細胞效果。將接種于有3T3 細胞培養皿培養獲得的第2 代口腔黏膜細胞種植于BAMG 上，培養1 周后，行HE 染色及掃描電鏡觀察口腔黏膜細胞與BAMG 的復合狀況。 結果 倒置相差顯微鏡下觀察，接種于有3T3 細胞培養皿的口腔黏膜細胞可傳至7 ～ 8 代，其細胞形態均一，功能良好；無3T3 細胞培養皿的口腔黏膜細胞形態多樣，傳至第2 代時，即開始出現老化。細胞生長曲線顯示，兩種方法培養的口腔黏膜細胞均于第8 天開始呈對數增長，第14 天達峰值。接種于有3T3 細胞培養皿的口腔黏膜細胞，培養至融合時所獲得細胞數量明顯多于接種于無3T3 細胞培養皿的口腔黏膜細胞。兩種方法培養的口腔黏膜細胞行免疫熒光染色，均呈綠色熒光。HE 染色觀察，BAMG 經脫細胞處理后未見細胞，脫細胞效果良好。復合培養1 周后，HE 染色及掃描電鏡觀察口腔黏膜細胞與BAMG 復合良好。 結論 兔口腔黏膜細胞可在體外成功培養、擴增，與同種異體BAMG 復合后生長良好，為構建組織工程尿道提供了一種新的選擇。
目的研究股內側肌肌皮穿支解剖學特征，設計游離股內側肌穿支皮瓣，為臨床修復軟組織缺損提供一種新的皮瓣。 方法取6具自愿捐獻的新鮮成人下肢標本，以氧化鉛混合紅色乳膠灌注，解剖股內側肌肌皮穿支，并通過血管造影技術觀測股內側肌肌皮穿支的起源、走行、分布情況。根據解剖研究，于2009年6月－2011年8月，臨床采用大小為14 cm × 6 cm～20 cm × 5 cm的股內側肌穿支皮瓣修復4例足部皮膚軟組織缺損，缺損范圍8 cm × 6 cm～12 cm × 8 cm。 結果股動脈恒定發出的股內側肌動脈在內側肌內下行至髕旁，終末支與旋股外側動脈終末支吻合形成髕周血管網。沿途發出3～5支粗大肌皮穿支達深筋膜內，并淺出至股內側肌表面皮膚，構成股內側血管網。臨床應用4例股內側肌穿支皮瓣均成活，受區創面及供區切口均Ⅰ期愈合；患者均獲隨訪，隨訪時間6～12個月，皮瓣色澤、質地良好，踝關節背伸、跖屈活動范圍正常。 結論游離股內側肌穿支皮瓣切取簡便，皮瓣供區隱蔽，質地優良，是理想的皮瓣供區。
目的 磷酸鈣生物材料由于其優良的生物相容性而具有廣闊的應用前景，但傳統方法難以制備具有復雜形狀的支架。以快速成形方法制備磷酸鈣多孔陶瓷支架材料，并對其體外成骨性能進行初步研究。 方法 采用快速成形方法制備磷酸鈣多孔陶瓷支架材料（直徑10 mm、高度5 mm、孔徑800 μm），取Beagle 犬髂骨髓分離培養BMSCs，接種第3 代BMSCs 于支架材料上。將實驗分為4 組，A 組為成骨誘導培養的細胞/ 材料復合物組，B 組為未經成骨誘導培養的細胞/ 材料復合物組，另設平皿成骨誘導培養及常規培養為陽性對照組（C 組）及陰性對照組（D 組）。于接種后第1、3、7 天，利用DNA 定量檢測方法及ALP 定量、定性檢測方法檢測BMSCs 在支架材料上的增殖及ALP 的表達；并經DiO 熒光染色后，應用激光共聚焦顯微鏡觀察BMSCs 在材料上的黏附生長情況。 結果 DNA定量結果表明，隨培養時間增加，C、D 組在第3 天時細胞生長進入平臺期；A、B 組細胞呈持續增長趨勢，細胞培養過程中增殖速度均略低于C、D 組，且未出現明顯的平臺期。DiO 熒光染色示，BMSCs 在以快速成形方法制備的磷酸鈣多孔陶瓷支架材料上黏附、生長狀態良好。ALP 染色示，隨培養時間延長，A、B 組支架上細胞染色均逐漸加深，A 組各時間點染色程度均明顯強于B 組。培養后第1、3 天，4 組ALP 表達均較低，差異無統計學意義（P gt; 0.05）；培養第7 天，各組ALP 表達均明顯升高，A 組比其他各組明顯高表達（P lt; 0.05），B 組及C 組均明顯高于D 組（P lt; 0.05）。 結論 快速成形的多孔磷酸鈣陶瓷具有良好的細胞相容性，BMSCs 與支架復合在體外誘導培養可以進行成骨分化。因此通過快速成形技術制備的磷酸鈣多孔陶瓷是骨組織工程可選的細胞支架。
目的 初步確立hBMSCs 的二維生物打印方法，實現對細胞噴射過程的控制并保持打印后細胞活力。 方法 取健康志愿者骨髓5 mL，常規培養hBMSCs 至第2 代，調整為1 × 106 個/mL 單細胞懸液。實驗分3 組：打印組1 細胞先行碘化丙啶（propidium iodide，PI）熒光標記，快速成型組織打印機進行二維細胞打印，x 軸間隔300 μm，y 軸間隔1 500 μm，激光共聚焦顯微鏡觀察。打印組2 細胞未行PI 標記，經生物打印后培養2 h，Live/Dead viability Kit 測定細胞活力，激光共聚焦顯微鏡觀察細胞熒光染色情況；取1 份未經Live/Dead viability Kit 測試的打印組2 細胞，培養7 d 后倒置顯微鏡觀察細胞形態，貼壁后常規培養，動態觀察細胞生長狀態。對照組除細胞懸液不行打印，其余操作同打印組2。 結果 打印組1 細胞激光共聚焦顯微鏡觀察，“細胞墨滴”在二維組織中規則且均勻分布，滿足二維設計細胞打印要求；每個“細胞墨滴”包含細胞15 ～ 35 個。打印組2 細胞經活力測試，細胞孵育30 min 后激光共聚焦顯微鏡觀察顯示細胞熒光染色情況。對照組細胞活力與打印組2 無明顯區別。打印后細胞常規培養7 d，細胞可正常貼壁生長，形態、生長狀態良好。 結論 通過生物打印技術可實現hBMSCs 在二維平面上的定向、定量規則分布，并為進一步的細胞三維打印乃至器官打印體系奠定基礎。
研究人脂肪干細胞（adipose derived stem cells，ADSCs）在體外單層培養條件下誘導為血管平滑肌細胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）的可行性。 方法 應用酶消化法消化人脂肪組織獲得ADSCs，基礎培養液培養傳代，取第1 代細胞用于誘導分化實驗。實驗分兩組，ADSCs 以含5 ng/mL TGF-β1 及50 ng/mL PDGF-BB 的M-199 誘導液聯合誘導，作為誘導組；以含10% FBS 的M-199 培養液培養ADSCs 作為未誘導組。鏡下觀察細胞生長情況；免疫熒光和RT-PCR 方法檢測平滑肌細胞特異標記的表達情況；流式細胞儀檢測誘導陽性率。 結果 誘導組細胞形態形成平滑肌細胞特有的“峰- 谷”生長模式，未誘導組細胞形態未發生改變，與原代ADSCs 相似呈成纖維細胞樣生長。誘導培養14 d，誘導組細胞體外擴增能力較未誘導組顯著降低（P lt; 0.01）。免疫熒光檢測：誘導組表達平滑肌特異標記α 平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重鏈（smooth muscle-myosin heavy chain，SMMHC）和Calponin，未誘導組無表達。細胞誘導前α-SMA、SM-MHC及Calponin 陽性表達率分別為3.26% ± 1.31%、3.55% ±1.60%、4.02% ± 1.81%；誘導組陽性表達率分別為48.13% ± 8.31%、45.33% ± 10.68%、39.13% ± 9.42%；誘導前、后差異有統計學意義（P lt; 0.01）。RT-PCR 檢測：誘導組表達平滑肌特異標記α-SMA、SM-MHC、Calponin 和SM-22α，未誘導組無表達。 結 論 脂肪干細胞經體外培養及誘導后，呈明顯的VSMCs 特性，有可能成為血管組織工程新的種子細胞來源。
目的研究化學萃取同種異體肌腱移植聯合注射同種異體軟骨細胞重建兔肩關節前盂唇損傷的效果。方法成年新西蘭大白兔 45 只，體質量 2.5～3.0 kg。取其中 15 只兔的跟腱，采用化學萃取法進行抗原滅活制備同種異體肌腱，將萃取后肌腱與未處理肌腱行 HE 染色和 Masson 染色對比；取膝關節軟骨，采用胰蛋白酶法分離培養軟骨細胞并行Ⅱ型膠原免疫組織化學染色鑒定。取剩余 30 只兔制備肩關節前盂唇缺損模型，將同種異體肌腱移植至受損盂唇后，隨機分為兩組（每組 15 只），A 組移植術后即刻關節內注射同種異體軟骨細胞，B 組不作任何處理。術后 4、6、8 周每組各取 5 只兔的移植肌腱，大體觀察后采用 HE 染色觀察細胞核數量，Masson 染色觀察肌纖維組織膠原纖維的表達情況，AB 染色檢測移植后糖胺聚糖含量，評估兩組同種異體肌腱組織內細胞生長情況。結果 HE 染色、Masson 染色顯示，采用化學萃取法制備的同種異體肌腱抗原被滅活且纖維組織結構保持完好；Ⅱ型膠原免疫組織化學染色示，培養細胞為軟骨細胞。肌腱移植術后 AB 染色示，各時間點 A 組糖胺聚糖含量均顯著高于 B 組，差異有統計學意義（P<0.05）。術后 6 周 HE 染色示，A 組肌腱組織內的細胞核數量明顯多于 B 組（t=20.043，P=0.000）。術后 6 周 Masson 染色示，A 組肌腱組織中的細胞核明顯增多，肌纖維及膠原纖維相互交錯，組織結構更加緊湊，肌腱組織以藍染為主；而 B 組細胞核較少，主要為原移植物的膠原纖維。結論經化學萃取法滅活抗原的同種異體肌腱，能夠修復重建兔肩關節前盂唇缺損，且聯合同種異體軟骨細胞移植能夠促進移植肌腱的愈合。