目的 探討核心結合因子α1（core-binding factor α1,Cbfa1）對骨髓間充質干細胞（mesenchymal stem cells,MSCs）成骨定向分化的作用。方法 抽取3月齡日本大白兔股骨骨髓，密度梯度離心獲得MSCs，以Cbfa1重組腺病毒轉染第3代MSCs，3 d后免疫熒光法觀察目的基因的表達，并于1~7 d MTT法檢測其對細胞增殖的影響(Cbfa1腺病毒處理組)。以正常培養組、單純誘導組和對照腺病毒處理組作為對照，各組設置7、14 d兩個時間點進行觀察。RT-PCR法半定量分析Cbfa1腺病毒處理對MSCs堿性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）、骨鈣素（osteocalcin，OC）、骨橋蛋白（osteopontin，OPN）和I型膠原等多種成骨細胞標志基因的影響，同時觀察Cbfa1對MSCs成脂、成肌分化指標過氧化物酶體增殖物激活受體γ2和生肌決定因子的影響。結果 免疫熒光顯示，轉染Cbfa1重組腺病毒后MSCs可以表達Cbfa1；②各組MSCs增殖差異無統計學意義（Pgt;0.05）；③RT-PCR顯示7、14 d，Cbfa1腺病毒處理組ALP、OC和OPN的表達均明顯上調，Ⅰ型膠原的表達基本不變；④Cofa1使PPARγ、MyoD的表達受到抑制。結論 Cbfa1能明顯促進MSCs成骨方向的分化。
目的 制備并優化陽離子載體脂多糖胺納米囊泡（lipopolysaccharide-amine nanopolymersomes，LNPs）性能，探討其負載靶基因后體外誘導 BMSCs 定向成骨分化能力。 方法 采用接枝共聚的方法合成 LNPs，探討合成時不同 pH（7.5、8.0、8.5、9.0）對 LNPs 及 LNPs/pBMP-2-綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）復合物理化性能的影響；通過體外大鼠 BMSCs 細胞毒性及轉染實驗，篩選出具低毒高轉染效能的 LNPs，再用其負載 pBMP-2-GFP 基因轉染大鼠 BMSCs，通過定期觀察細胞形態、測定細胞表達 BMP-2 蛋白水平和 ALP 活性、鈣結節生成情況來評價 LNPs/pBMP-2-GFP 對 BMSCs 成骨分化的影響。 結果 pH 為 8.5 時合成的 LNPs 含氮量、粒徑及 zeta 電位均低于其余 pH 值組，其細胞毒性最低（細胞成活率 96.5%±1.4%）、轉染效率最高（98.8%±0.1%）。BMSCs 經 LNPs/pBMP-2-GFP 轉染誘導處理后，在前 4 d 內，其 BMP-2 蛋白表達量均明顯高于 Lipofectamine2000（Lipo）/pBMP-2-GFP 組、支鏈型聚乙烯亞胺 25K/pBMP-2-GFP 組和空白對照組（P<0.05）。誘導后 14 d 其 ALP 活性高于 Lipo/pBMP-2-GFP 組和空白對照組（P<0.05），與成骨誘導液處理組相當（P>0.05）；茜素紅染色顯示其和成骨誘導液處理組細胞出現明顯鈣結節，而 Lipo/pBMP-2-GFP 組和空白對照組細胞出現凋亡、未見明顯鈣結節；誘導后 21 d 鏡下觀察見細胞中出現透明塊狀結節，呈成骨細胞形態特點。 結論 pH 為 8.5 時合成的 LNPs 具有低細胞毒性、高轉染效率，能高效介導 BMP-2 基因轉染大鼠 BMSCs，并成功誘導 BMSCs 成骨定向分化，其成骨誘導效果與成骨誘導液處理相當。LNPs 介導的基因轉染可能是誘導干細胞定向分化的一種簡便有效的手段。