目的建立去除熒光定量聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）體系中內源性核酸污染的方法，用于降低或排除顱內術后易感染細菌的熒光定量 PCR 檢測出假陽性的概率。方法首先去除熒光定量 PCR 反應體系中的內源性核酸污染；隨后利用多重 PCR 技術，以混合菌 DNA 作為模板進行革蘭菌特異性鑒定；并研究去除污染后的多重 PCR 技術檢測混合細菌 DNA 的檢測限和靈敏度。結果建立的方法能夠快速有效地去除熒光定量 PCR 體系內的內源性核酸污染，并對 PCR 體系中 Taq 酶的活性以及擴增效率均無影響，最低檢測限為 102 CFU/mL（金黃色葡萄球菌和綠膿假單胞菌），與培養法相同。酶切法對 PCR 體系中酶的活性及擴增效率均無明顯影響，且對 PCR 反應體系及引物特異性沒有影響（循環數 Ct=32，熒光強度 ΔRn=200）。過濾法卻使 PCR 擴增效率顯著下降（循環數 Ct=32，熒光強度 ΔRn=150）。結論酶切法去除內源性核酸污染對熒光定量 PCR 檢測限及靈敏度均無影響，操作簡便快速，降低了 PCR 檢測的假陽性概率，能及時準確地診斷顱內細菌感染。