目的 比較用莖環和多腺苷酸聚合酶（poly A polymerase，PAP）加尾實時定量聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）法檢測血漿中微量微 RNA（microRNA，miRNA）的區別，并評價 2 種常用內參基因的表達穩定性。 方法 分離成年 Sprague Dawley 大鼠血漿提取 miRNA，使用莖環和 PAP 加尾實時定量 PCR 法檢測血漿中 rno-miR-200b-3p 和 rno-miR-126-3p 的表達水平，采用 rno-miR-103a-3p 和 U6 作為內參，采用 2△Ct 法計算比較兩種實時定量方法和內參的選擇。 結果 莖環法相較于 PAP 加尾法檢測 Ct 值可以降低 2～4 個循環數，檢測靈敏度增加了 10 倍；PAP 加尾法溶解曲線在明顯單峰之前可見小峰，莖環法顯示獨立單峰，莖環法特異性更優；U6 作為內參相對于 rno-miR-103a 更穩定。 結論 對于 miRNA 濃度偏低的少量樣本檢測，莖環法有準確、靈敏、特異的優點；對于 miRNA 含量豐富、大規模組織樣本的檢測，PAP 加尾法則更適用。對于內參基因的選擇，使用 U6 進行 miRNA 半定量相對于 rno-miR-103a-3p 更穩定，重復性更強。