目的 構建新型自組裝多肽納米凝膠支架RGDmx，探討支架的細胞相容性及其對前軟骨干細胞（precartilaginous stem cells，PSCs）增殖和向軟骨細胞方向分化的影響。 方法 取新生SD 大鼠四肢長骨干骺端組織分離培養PSCs，采用免疫磁珠分選系統分選純化原代細胞，并進行鑒定。取KLD-12、KLD-12-PRG 多肽凍干粉，以體積比1 ∶ 1 復合構建RGDmx。將純化后的第3 代PSCs 接種至KLD-12（對照組）和RGDmx（實驗組）培養，1、3、7、14 d用細胞計數（cell counting kit，CCK）-8 法檢測支架細胞增殖- 毒性；制備不同混合比（0、20%、40%、60%、80%、100%）RGDmx，觀察其對PSCs 增殖的影響；采用無血清軟骨形成培養液（complete chondrogenic medium，CCM）誘導兩組支架內PSCs 向軟骨細胞方向分化，培養14 d 時行甲苯胺藍染色法鑒定，并用RT-PCR 法檢測兩組軟骨分化特異性基因Ⅱ型膠原和蛋白聚糖的表達情況。 結果 成功分離純化獲得成纖維細胞生長因子受體3 表達陽性細胞，免疫組織化學染色及免疫熒光染色鑒定為PSCs。CCK-8 檢測結果顯示，復合培養后實驗組細胞吸光度（A）值隨培養時間延長逐步提高，7 d達峰值；其中7、14 d 時細胞A 值高于對照組（P lt; 0.05）；復合培養7 d 時，混合比為40% 組細胞A 值較其他混合比組高，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。CCM 誘導培養14 d 時，兩組支架內細胞甲苯胺藍染色均呈陽性；RT-PCR 檢測示實驗組細胞Ⅱ型膠原和蛋白聚糖mRNA 表達水平均高于對照組，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論 自組裝多肽納米凝膠支架RGDmx 具有良好的細胞相容性，可有效促進PSCs 增殖及向軟骨細胞方向分化，是組織工程較理想的細胞載體系統。
目的 評價新型復合材料納米TCP/ 明膠/ 鹿茸多肽的生物相容性，為其在骨缺損修復領域中的臨床應用提供實驗依據。 方法 制備納米TCP/ 明膠/ 鹿茸多肽復合材料，掃描電鏡觀察其形態。常規培養L929 和NIH/3T3 細胞，取對數生長期的細胞用于實驗。通過急性毒性實驗、溶血實驗、細胞增殖實驗和細胞毒性實驗等研究該復合材料的生物相容性。 結果 掃描電鏡觀察示復合材料微球直徑約10 μm，單個分散存在，微球表面存在納米級孔洞。急性毒性實驗結果顯示，實驗動物在觀察期內一般狀態良好，無驚厥、癱瘓和死亡等毒性反應，給藥前、后體重無明顯變化，該復合材料無急性毒性。溶血實驗結果顯示溶血率均lt; 5%，符合醫用生物材料的溶血實驗要求。細胞增殖實驗結果顯示，不同濃度材料浸提液作用于NIH/3T3 細胞均不同程度地促進細胞增殖，具有較好的生物學活性。細胞毒性實驗結果顯示，該材料細胞毒性為0 級。 結論 納米TCP/ 明膠/ 鹿茸多肽復合材料具有良好的生物相容性。
目的 綜述自組裝多肽納米纖維材料（self-assembling peptide nanofiber scaffold，SAPNS）的基礎研究及其在神經組織工程中的研究現狀。 方法 廣泛查閱近期國內外SAPNS 研究的相關文獻，并進行回顧和綜合分析。 結果 SAPNS 可促進神經干細胞的黏附、增殖和分化以及神經元軸突向外生長和延伸，促進ECM 的合成并能抑制神經膠質細胞的黏附和分化，很好地模擬了細胞在體內的生長環境。 結論 SAPNS 是一種理想的基質材料，為損傷神經組織的修復提供了新的方法。
目的 觀察組織工程支架材料FGL 多肽組裝納米纖維和神經干細胞（neural stem cells，NSCs）的生物相容性。 方法 固相法合成FGL 多肽兩親性分子（FGL peptide-amphiphile，FGL-PA），采用高效液相色譜儀和質譜儀進行純化和分析。加入0.1 mol/L HCl 于FGL-PA 溶液，降低pH 值引發其自組裝，透射電鏡觀察自組裝后的材料。取新生1 d 大鼠大腦皮質，培養大鼠NSCs，分別加入最終濃度為0、50、100、200、400 mg/L FGL-PA，采用CCK-8 試劑盒檢測FGL-PA 對細胞增殖的影響。將NSCs 分別加入分化培養基（對照組：DMEM/F12、2% B27 和10% FBS）和含FGL-PA的分化培養基（實驗組：DMEM/F12、2% B27、10% FBS 和100 mg/L FGL-PA）誘導分化，采用免疫熒光法檢測FGL-PA 對NSCs 分化的影響。 結果 FGL-PA 可自組裝形成凝膠，透射電鏡示其為納米纖維，直徑為10 ～ 20 nm，長度可達數百納米。加入各濃度FGL-PA 48 h 后，當FGL-PA 濃度為50、100、200 mg/L 時，吸光度（A）值顯著增加，差異有統計學意義（P lt; 0.05）。NSCs 誘導分化培養14 d，免疫熒光結果顯示對照組NSCs 分化為神經元比例為46.35% ± 1.27%，實驗組為72.85% ± 1.35%，兩組比較差異有統計學意義（P lt; 0.05）。 結 論 FGL-PA 能自組裝形成納米纖維凝膠，具有良好的生物相容性和生物活性。
目的 探討鹿茸多肽局部給藥和鹿茸多肽-PLGA 復合膜對大鼠坐骨神經損傷后神經再生的影響。 方法 制備厚度為50 μm、濃度分別為3 mg/g 及15 mg/g 的鹿茸多肽-PLGA復合膜。取3 ～ 6 月齡Wistar 大鼠72 只，雌雄不限，體重（250 ± 50） g，制備坐骨神經切斷模型。模型制備后隨機分成4 組，每組18 只。A 組：吻合后不作任何處理；B組：術后每隔1 d 術側腓腸肌內注射10 mg/L鹿茸多肽1 mL；C組：神經吻合口部位包繞3 mg/g 鹿茸多肽-PLGA復合膜；D 組：神經吻合口部位包繞15 mg/g 鹿茸多肽-PLGA 復合膜。術后第2、4 及6 周，大體觀察神經斷端粘連情況，行電生理檢測、免疫組織化學染色及半定量分析、辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）逆行示蹤。 結果 術后各組大鼠行為無明顯異常，足底、足趾均無潰瘍；神經吻合口處均無神經瘤形成。術后2、4 及6 周，A 組神經吻合處與周圍組織粘連明顯，B 組僅有輕度粘連，C、D 組無明顯粘連。術后各時間點小腿三頭肌誘發電位恢復率B、C、D 組明顯高于A組（P lt; 0.01），D 組優于B 組和C 組（P lt; 0.05）；2、4 周B 組和C 組差異無統計學意義（P gt; 0.05），6 周時C 組優于B 組（P lt;0.05）。再生神經纖維軸突及髓鞘TGF-β1、IGF 抗原染色：A 組輕度著色，B、C、D 組隨觀察時間的延長著色逐漸加深。各時間點B、C、D 組TGF-β1、 IGF 抗原表達均較A 組高（P lt; 0.05）；術后6 周，D 組與B、C 組比較差異有統計學意義（P lt;0.05），B、C 組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。HRP 逆行示蹤實驗：隨時間延長，被標記的有髓神經纖維逐漸增多，B、C、D 組標記陽性的有髓神經纖維數明顯高于A 組，D 組高于其他組，B 組和C 組差異不明顯。 結論 鹿茸多肽局部應用和鹿茸多肽-PLGA 復合膜包繞神經吻合口周圍對神經再生均有促進作用，此作用與鹿茸多肽有明顯量效關系，鹿茸多肽-PLGA 復合膜有預防神經粘連作用。
目的 探討自行合成的骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2，BMP-2)活性多肽對大鼠骨髓間充質干細胞（marrow mesenchymal stem cells，MSCs）體外定向誘導成骨的能力，評價BMP-2活性多肽的成骨誘導性及誘導成骨的劑量依賴性 方法取4周齡Wistar大鼠分離培養MSCs，傳至第3代時改用條件培養基，培養基中分別加入濃度為300、200、100、50及0 μg/ml的BMP2活性多肽，并依次記為A、B、C、D和E組。細胞培養至5、10、15及20 d，檢測堿性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性，測定鈣含量，采用實時熒光定量PCR（fluorescent quantitative PCR，FQPCR)檢測Ⅰ型膠原、骨橋蛋白 (osteopontin，OPN) 及骨鈣素（osteocalcin，OCN） mRNA的表達，檢測不同濃度BMP2活性多肽體外誘導成骨的能力。結果 倒置相差顯微鏡下觀察，用條件培養基培養3～4 d后，培養細胞由長梭形轉變為短梭形或多角形。隨條件培養基中BMP-2活性多肽濃度的增加，細胞發生成骨樣改變的時間提前。ALP活性和鈣含量檢測顯示，A組和B組較其他組增加明顯，且差異有統計學意義（Plt;0.05），但A、B組間比較差異無統計學意義（Pgt;0.05）。FQ-PCR檢測發現不同濃度條件培養基培養14 d后，Ⅰ型膠原、OPN和OCN mRNA在各組均有表達。Ct值表明其表達量的大小順序為A、B、C、D組，E組無表達，A組和B組的Ct值明顯大于C組和D組，差異有統計學意義（Plt;0.05），但A組和B組之間差異無統計學意義（Pgt;0.05）。結論 BMP-2活性多肽能有效地促進MSCs向成骨方向分化，其誘導作用存在劑量依賴關系，最佳誘導劑量為200 μg/ml。
目的 對多肽生長因子對牙周膜細胞（periodontal ligamentcell,PDLC）影響的研究進行綜述。 方法 廣泛查閱近年國內外多肽生長因子對牙周膜細胞影響的相關文獻，并進行回顧與綜合分析。 結果 PDLC的增殖和多向分化是牙周組織再生的基礎。多肽生長因子對PDLC功能影響的研究成為牙周組織再生研究的熱點之一。多肽生長因子在PDLC的移行、生長、增殖、分化、蛋白質和基質合成上均起著重要作用。 結論 多肽生長因子可應用于牙周組織的再生治療，但還需進一步深入研究。
目的 通過觀察鹿茸多肽對白細胞介素 1β（interleukin 1β，IL-1β）誘導軟骨表型化骨髓間充質干細胞（marrow mesenchymal stem cells，MSCs）凋亡的影響，以優化軟骨組織工程的種子細胞。方法 新西蘭大白兔2只，抽取其骨髓；經密度梯度離心得到單核細胞，經體外分離、培養獲得兔MSCs。用轉化生長因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）和堿性成纖維細胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）將其誘導分化軟骨表型。將軟骨表型化MSCs隨機分成A組（空白對照組）：5%胎牛血清的αMEM培養液；B組（IL-1β組）：5%胎牛血清的αMEM培養液加入100 ng IL-1β；C組（鹿茸多肽組）：5%胎牛血清的αMEM培養液加入10 μg/ml鹿茸多肽作用3d后再加入100 ng IL-1β；D組（TGF-β1組）：5%胎牛血清的α-MEM培養液加10 ng/ml TGF-β1作用3 d后再加入100 ng IL-1β。分別于培養24、48和72 h后取樣，采用透射電鏡觀察細胞形態，Annexin V法檢測細胞凋亡率，RT-PCR技術分析Caspase-3 mRNA表達水平，ELISA法檢測Caspase-3蛋白酶活性。結果 透射電鏡觀察：B組24 h后細胞核內染色質開始呈塊狀凝集，分布于核膜下，核膜不規則；48 h后細胞核內染色質凝集加劇；72 h后部分細胞內的核碎片凝集成凋亡小體。各時間點C、D組細胞結構改變相對滯后，且數量較少；A組細胞結構幾乎無明顯改變。各時間點B組MSCs凋亡率、Caspase-3 mRNA表達及蛋白酶活性逐漸增高，與A組比較差異有統計學意義（Plt;0.01）；C、D組與B組比較則逐漸下降，且差異有統計學意義（Plt;0.05）。結論 Caspase3參與MSCs凋亡，鹿茸多肽通過減少Caspase-3 mRNA表達，并抑制其蛋白酶活性，阻止或逆轉軟骨表型化MSCs凋亡。
為了研究多肽促進傷口愈合的可能性，從豬血清中分離出一組酸、熱穩定的多肽，分子量低于１８ｋｕ，無免疫原性、無毒副作用。用５０μｌ多肽制劑（５ｍｇ／ｍｌ）注入小鼠皮下埋置的聚乙烯醇海綿“死腔傷口”中，從致傷當日起，每日一次共５次；對照“死腔傷口”內注入５０μｌ牛血清白蛋白（５ｍｇ／ｍｌ）。傷后７，１０ｄ治療組海綿中總ＤＮＡ、蛋白質及羥脯氨酸含量明顯高于對照組，有顯著差異（Ｐ＜０．０５），傷后１４ｄ兩組間無差異（Ｐ＞０．０５）。體外實驗發現，與對照基質１％胎牛血清１６４０液相比，含０．２％多肽制劑的對照基質可明顯促進傷口修復細胞增殖，經統計學處理有顯著差異（Ｐ＜０．０５）。結果證實，豬血清源分子量低于１８ｋｕ的酸、熱穩定多肽，具有促傷口愈合的活性，直接促進傷口修復細胞生長是其發揮作用的機理之一。
【摘要】 目的 了解不同糖代謝狀態的人群空腹及口服葡萄糖耐量實驗（oral glucose tolerance test，OGTT）餐后胰高血糖素樣態-1（GLP-1）和葡萄糖依賴的促胰島素多態（GIP）水平。 方法 將受試者根據OGTT結果分為3組:正常糖耐量組（NGT，n=61例），糖耐量受損組（IGT，n=53）和2型糖尿病組（T2DM， n=66）。采空腹及糖餐后2 h靜脈血檢測GLP-1和GIP水平。 結果 T2DM組空腹GLP-1水平低于NGT和IGT組（Plt;0.05）。NGT和IGT的空腹GLP-1水平差異無統計學意義（Pgt;0.05）。餐后GLP-1水平三組差異無統計學意義（Pgt;0.05）。空腹及餐后GIP水平在NGT、IGT和T2DM均呈逐漸增加的趨勢，而且同OGTT-0 h和OGTT-2 h血糖水平呈正相關（r=0.384，0.426；Plt;0.05）。 結論 不同的GLP-1和GIP水平也許是IGT和T2DM胰島素分泌能力不同的原因之一。【Abstract】 Objective To investigate the fasting, and after oral glucose tolerance test (OGTT), the postprandial levels of glucagon-like peptide-1 (GLP-1) and glucose-dependent insulinotropic polypeptide (GIP) in Chinese people with different degrees of glucose tolerance. Methods Based on the results of OGTT, 180 subjects were divided into three groups: normal glucose tolerance group (NGT group, n=61), impaired glucose tolerance group (IGT group, n=53) and type-2 diabetes mellitus group (T2DM group, n=66). Fasting venous blood and the venous blood 2 hours after OGTT was sampled to detect GLP-1 and GIP levels. Results The fasting GLP-1 level in the T2DM group was significantly lower than that in the NGT and IGT groups (Plt;0.05). There was no significant difference in fasting GLP-1 level between NGT and IGT groups (Pgt;0.05). There was no significant difference in GLP-1 level 2 hours after OGTT among all the three groups (Pgt;0.05). GIP level gradually increased in the order of NGT, IGT and T2DM both before and after glucose load, and it was positively correlated with glucose levels just after OGTT and 2 hours after OGTT (r=0.384,0.426;Plt;0.05). Conclusion Different GLP-1 and GIP levels may be one of the reasons for different insulin secretion ability between IGT and T2DM